一种高效表达α-乳白蛋白的酵母菌株和α-乳白蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种优化了氨基酸序列的α

【技术实现步骤摘要】
一种高效表达
α
‑
乳白蛋白的酵母菌株和
α
‑
乳白蛋白及其应用


[0001]本申请涉及生物
，具体地，涉及一种优化了氨基酸序列的α
‑
乳白蛋白、编码该α
‑
乳白蛋白的基因、插入有该基因的表达载体、高效表达该α
‑
乳白蛋白的酵母菌株、制备该α
‑
乳白蛋白的方法以及一种人造乳。

技术介绍

[0002]近些年来，在食品、洗涤剂、造纸、化学、制药和药妆行业中，为了克服天然来源蛋白质提取的困难，并且降低成本，重组蛋白质被广泛使用。
[0003]毕赤酵母是目前应用广泛的重组蛋白高效表达平台，也是是合成生物学和现代发酵工业中常用的真核底盘细胞，在工农业及医药等行业均有广泛应用。可溶性表达量偏低已成为限制研究目标蛋白质结构与功能的重大阻碍。随着合成生物学和基因工程技术的发展，越来越多的科研工作者利用DNA重组方法生产有用的蛋白质，这需要高活性、高产量的蛋白质表达系统。
[0004]另外目前，野生型的α
‑
乳白蛋白仍然具有较高的致过敏性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提高重组α
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乳白蛋白的表达量并且降低α
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乳白蛋白的致过敏性。
[0006]本专利技术的专利技术人基于骆驼α
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乳白蛋白的氨基酸序列，对人α
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乳白蛋白的氨基酸序列进行了优化，得到了具有较低致过敏性的α
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乳白蛋白，并且还对表达质粒进行了优化，使得α
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乳白蛋白能够在毕赤酵母中进行高表达。
[0007]本专利技术提供了一种优化了氨基酸序列的α
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乳白蛋白，所述α
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乳白蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了编码如上所述的α
‑
乳白蛋白的基因。
[0009]可选地，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]本专利技术还提供了一种表达载体，该表达载体插入有如上所述的基因并形成表达如上所述的α
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乳白蛋白的表达框。
[0011]可选地，该表达载体插入有人工多顺反子α
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乳白蛋白表达模块；所述人工多顺反子α
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乳白蛋白表达模块包括多个拷贝的如上所述的基因。
[0012]可选地，所述表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]本专利技术还提供了一种高效表达α
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乳白蛋白的酵母菌株，所述酵母菌株为导入有如上所述的表达载体的毕赤酵母。
[0014]本专利技术还提供了一种制备α
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乳白蛋白的方法，该方法包括：将如上所述的酵母菌株进行培养，得到培养后的物料，并且从所述培养后的物料中纯化所述α
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乳白蛋白。
[0015]可选地，所述培养的条件包括：培养基的成分包括10
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30g/L的蛋白胨、5
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20g/L的酵母提取物、10
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30g/L的葡萄糖和2
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10mL/L的甲醇；培养的温度为25
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35℃、时间为60
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90小
时。
[0016]本专利技术还提供了一种人造乳，其中，所述人造乳含有蛋白质和水，所述蛋白质包括如上所述的α
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乳白蛋白。
[0017]通过上述技术方案，本专利技术得到了致敏性几乎消失的α
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乳白蛋白，并且还能够使得α
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乳白蛋白在毕赤酵母中高表达，因此可以用于制备具有更高应用价值的人造乳制品。
[0018]本专利技术的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0019]附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0020]图1为α
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乳白蛋白人工高效表达模块的构建的结构示意图。
[0021]图2为靶标α
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乳白蛋白的酵母菌株高效表达和纯化结果。M，标准分子量；1
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2，对照酵母菌株GS
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LA的表达产物；3
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4，表达模块菌株GS
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MLA的表达产物。
[0022]图3为α
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乳白蛋白的致敏性ELISA检测分析结果。
[0023]序列表说明
[0024]SEQ ID NO.1，人工优化的α
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乳白蛋白的氨基酸序列；
[0025]SEQ ID NO.2，人工优化的α
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乳白蛋白的基因DNA序列；
[0026]SEQ ID NO.3，人工优化α
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乳白蛋白的高效表达模块核酸序列；
[0027]SEQ ID NO.4，人工优化α
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乳白蛋白的高效表达载体的核酸序列。
具体实施方式
[0028]以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0029]本专利技术提供了一种优化了氨基酸序列的α
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乳白蛋白，所述α
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乳白蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0030]其中，SEQ ID NO.1的序列中，1
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123位的氨基酸为α
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乳白蛋白的主体，末尾的6个氨基酸为纯化标签。
[0031]本专利技术还提供了编码如上所述的乳白蛋白的基因。其中，编码基因的核苷酸序列可以按照密码子规则推导出来，根据密码子简并性的规则，可以有多个不同的核苷酸序列编码如上所述的α
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乳白蛋白的氨基酸序列。
[0032]为了α
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乳白蛋白的高效表达，考虑到毕赤酵母的密码子偏好，优选地，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0033]本专利技术还提供了一种表达载体，该表达载体插入有如上所述的基因并形成表达如上所述的α
‑
乳白蛋白的表达框。
[0034]其中，可以根据宿主的适配性，选择合适的表达载体，例如淼灵生物公司的pPIC9K表达载体。
[0035]可选地，如图1所示，该表达载体插入有人工多顺反子α
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乳白蛋白表达模块；所述人工多顺反子α
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乳白蛋白表达模块包括多个拷贝的如上所述的基因。相邻的两个拷贝的基因之间可以插入有基因串联序列，例如IRES序列。
[0036]可选地，所述表达载体为pPIC
‑
MLA，其核苷酸序列如SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种优化了氨基酸序列的α
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乳白蛋白，其特征在于，所述α
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乳白蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述的α
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乳白蛋白的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其中，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种表达载体，其特征在于，该表达载体插入有权利要求2或3所述的基因并形成表达权利要求1所述的α
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乳白蛋白的表达框。5.根据权利要求4所述的表达载体，其中，该表达载体插入有人工多顺反子α
‑
乳白蛋白表达模块；所述人工多顺反子α
‑
乳白蛋白表达模块包括多个拷贝的权利要求2或3所述的基因。6.根据权利要求5所述的表达载体，其中，所述表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。7.一种高效表达α
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乳白蛋白的酵母菌株，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：林敏，张瑞雪，周正富，张维，战嵛华，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：