一种利用BSA-CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法技术

本发明专利技术属于肉制品新鲜度检测技术领域，本发明专利技术提供了一种利用BSA

【技术实现步骤摘要】
一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法


[0001]本专利技术涉及肉制品新鲜度检测
，尤其涉及一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法。

技术介绍

[0002]冷鲜肉及加工肉制品腐败产生异味的主要成份为甲硫醇(CH3SH)、2
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丁醇、丙酸、丁酸、二甲基硫醚、硫代乙酸甲酯等，其中CH3SH占腐败异味特征性挥发物权重较高。文献报道，CH3SH也是导致火腿产生异味的主要物质。因此，CH3SH可以作为冷鲜肉及加工肉制品贮藏过程中指示新鲜度品质变化的特征化合物。
[0003]CH3SH作为一种典型的含硫恶臭有毒气体，对环境安全和人体健康有极大的危害。人体吸入CH3SH后通过呼吸系统和消化系统吸收，引起恶心、头痛等症状，如果吸入CH3SH浓度超过安全阈值，可能会导致人体神经系统麻痹甚至死亡。CH3SH的产生主要与有氧和无氧条件下含硫氨基酸降解、硫化物甲基化和巯基转移等过程有关。目前CH3SH的有效检测方法主要包括气相色谱法、电化学和石英晶体微量天平传感器等，但均存在样品处理过程中成本高、操作复杂耗时等缺陷，严重限制了其在肉制品工业中的应用。荧光法具有制备简单、操作方便、成本低、灵敏度高等优点，引起了许多研究人员的关注，但至今关于CH3SH的荧光检测法的相关报道很少。
[0004]铜纳米簇(CuNCs)通常由配体壳和金属核组成，尺寸一般在2nm左右。由于量子尺寸效应，CuNCs在可见光到红外范围内均具有荧光特性。CuNCs作为一种纳米荧光材料，具有制备工艺简单、配体丰富、生物相容性好、无毒及稳定性强等诸多优点。近些年来，CuNCs在生物荧光标记和生物成像领域显示出了巨大的应用潜力。牛血清白蛋白(BSA)通常作为稳定剂和还原剂用来合成金属纳米簇，特别是用于合成CuNCs。但由于BSA的游离氨基数量少、空间位阻高、还原性弱，Cu
2+
很难通过配位键与其四个游离氨基结合，导致BSA
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CuNCs的合成过程非常耗时。且目前关于利用BSA
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CuNCs荧光传感策略检测冷鲜肉及加工肉制品中CH3SH含量的研究也未见报道。

技术实现思路

[0005]为克服现有技术中存在的上述缺陷，本专利技术利用AOX驱动CH3SH产生H2O2进而原位合成发光的BSA
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CuNCs，提供了一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法，包括如下步骤：
[0008](1)将硫酸铜、酒石酸钾钠与水混合，调节pH值为11～13，得铜离子储备液；
[0009](2)将步骤(1)所得的铜离子储备液与BSA溶液混合4～6min后得BSA
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Cu
2+
混合液；
[0010](3)通过氮气鼓吹，将待测肉制品中的CH3SH挤入NaOH溶液中，得吸收液；
[0011](4)将所述吸收液与AOX稀释液混合进行第一次孵育以产生H2O2，将第一次孵育结束后的混合液与pH值为6～8的PBS缓冲液按照1:0.5～1.5的体积比混合，再与步骤(2)所得的BSA
‑
Cu
2+
混合液混合进行第二次孵育，得到发光BSA
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CuNCs，检测发光BSA
‑
CuNCs的荧光强度，得荧光检测值；
[0012](5)根据CH3SH浓度与荧光检测值的标准曲线和步骤(4)获得的荧光检测值计算待测肉制品中的CH3SH含量。
[0013]优选的，所述肉制品包括冷鲜肉、火腿或酱卤肉。
[0014]优选的，步骤(1)中所述硫酸铜、酒石酸钾钠与水的混合比例为24～26mg:55～57mg:9～11mL，所述调节pH值的组分为NaOH溶液，所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.5～1.5M。
[0015]优选的，步骤(2)中所述铜离子储备液与BSA溶液的体积比为1:1～3，所述BSA溶液的浓度为8～12mg/mL。
[0016]优选的，步骤(3)中所述氮气鼓吹的时间为25～35s，所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.05～0.15M。
[0017]优选的，步骤(4)中所述吸收液与AOX稀释液的体积比为1:1～3:1，所述AOX稀释液为浓度为2～4μL/mL的PBS缓冲液；
[0018]所述第一次孵育的温度为30～45℃，所述第一次孵育的时间为25～35min；
[0019]所述第二次孵育的温度为35～40℃，所述第二次孵育的时间为55～65min。
[0020]优选的，步骤(4)中所述检测发光BSA
‑
CuNCs的荧光强度的条件参数为：激发波长为300～350nm，激发光和发射光的缝隙宽度为15～25nm，扫描范围为360～600nm。
[0021]优选的，步骤(5)中所述CH3SH浓度与荧光检测值的标准曲线为F
‑
F0＝3.902[CH3SH]+55.748，R2＝0.9944，其中，F
‑
F0表示发光BSA
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CuNCs的荧光强度，[CH3SH]表示CH3SH的浓度。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0023]1、本专利技术一方面采用的H2O2分子小，配位能力强，有助于形成相对稳定的BSA
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Cu
2+
‑
H2O2络合物，而络合物的形成会降低Cu
2+
/Cu的还原电位，加快Cu
2+
的还原。另一方面，Cu
2+
催化H2O2转化为羟基自由基，表现出更强的氧化能力，进而破坏BSA内部的二硫键，增强BSA对Cu
2+
的还原能力，促进BSA
‑
Cu
2+
体系原位合成BSA
‑
CuNCs。在醇氧化酶(AOX)的催化作用下，CH3SH被氧化为甲醛、硫化氢和H2O2，进而触发BSA
‑
Cu
2+
体系原位合成BSA
‑
CuNCs。由于BSA
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CuNCs的荧光发射对CH3SH具备浓度依赖性，因此可以实现CH3SH含量的快速检测。
[0024]2、本专利技术利用AOX驱动CH3SH产生H2O2进而原位合成发光的BSA
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CuNCs，构建了一种快速检测CH3SH含量的荧光传感策略。该方法具备高灵敏度、低检测限(0.19μM)以及较宽的检测线性范围(1
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300μM)，且样品前处理过程简单，检测速度快，成本低，可以实现本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将硫酸铜、酒石酸钾钠与水混合，调节pH值为11～13，得铜离子储备液；(2)将步骤(1)所得的铜离子储备液与BSA溶液混合4～6min后得BSA
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Cu
2+
混合液；(3)通过氮气鼓吹，将待测肉制品中的CH3SH挤入NaOH溶液中，得吸收液；(4)将所述吸收液与AOX稀释液混合进行第一次孵育以产生H2O2，将第一次孵育结束后的混合液与pH值为6～8的PBS缓冲液按照1:0.5～1.5的体积比混合，再与步骤(2)所得的BSA
‑
Cu
2+
混合液混合进行第二次孵育，得到发光BSA
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CuNCs，检测发光BSA
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CuNCs的荧光强度，得荧光检测值；(5)根据CH3SH浓度与荧光检测值的标准曲线和步骤(4)获得的荧光检测值计算待测肉制品中的CH3SH含量。2.根据权利要求1所述的一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法，其特征在于，所述肉制品包括冷鲜肉、火腿或酱卤肉。3.根据权利要求1或2所述的一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3SH含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述硫酸铜、酒石酸钾钠与水的混合比例为24～26mg:55～57mg:9～11mL，所述调节pH值的组分为NaOH溶液，所述NaOH溶液的摩尔浓度为0.5～1.5M。4.根据权利要求3所述的一种利用BSA
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CuNCs荧光传感策略快速检测肉制品中CH3...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹锦轩，王颖，张月美，靳国锋，潘道东，孙宝国，周昌瑜，王金鹏，徐幸莲，周光宏，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：