用于通用受体疗法的逆转录病毒载体制造技术

本公开涉及包括编码半抗原结合受体和T细胞活化受体的多核苷酸的逆转录病毒载体。所述逆转录病毒载体还可包括转导增强子。还公开了衔接分子以及它们与所述逆转录病毒载体和用所述逆转录病毒载体转导的T细胞结合的用途。所述逆转录病毒载体转导的T细胞结合的用途。所述逆转录病毒载体转导的T细胞结合的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于通用受体疗法的逆转录病毒载体
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2019年10月16日提交的美国临时申请第62/916,110号的权益，所述申请的内容以引用方式整体并入本文中。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表以ASCII格式通过EFS
‑
Web提交并且特此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本创建于2020年10月15日，命名为“UMOJ
‑
003
‑
01WO_SeqList_ST25.txt”且大小为72KB。


[0005]本公开涉及编码转导增强子、合成T细胞活化受体和/或半抗原结合受体的病毒载体、包括其的组合物和其使用方法。本公开还涉及包括半抗原的衔接分子与病毒载体结合使用的用途。所公开的组合物和方法可用于治疗疾病，例如癌症。

技术介绍

[0006]嵌合抗原受体(CAR)是工程化受体，其用于对T细胞进行基因工程改造，以用于过继性细胞免疫疗法(参见Pule等,Cytother.5:3,2003；Restifo等,Nat.Rev.Immunol.12:269,2012)。这些受体包括与细胞内信号传导成分(最常见的是单独或与一个或多个共刺激域组合的CD3)连接的细胞外配体结合域(最常见的是单克隆抗体的单链可变片段(scFv))。抗原结合刺激CAR的胞内段上的信号传导域，从而活化信号传导途径。基于CAR的过继性细胞免疫疗法已被用于治疗难以用常规护理标准疗法治疗的癌症患者(参见Grupp等,N.Engl.J.Med.368:1509,2013；Kalos等,Sci.Transl.Med.3:95ra73,2011)。
[0007]自体T细胞可以进行基因修饰以表达转基因，所述转基因经过工程改造以在体内转移后提高疗效。尽管转基因修饰的T细胞在例如CD19 B细胞谱系恶性肿瘤的情况下成功过继转移，但尚未鉴定出存在于所有形式的癌细胞上但不存在于正常细胞上的通用CAR靶抗原。因此，所述领域由于鉴定细胞表面靶标的需要而受到阻碍，所述细胞表面靶标天然存在于肿瘤细胞上并且由身体的正常细胞/组织最低限度地表达。因此，CAR T细胞治疗的发展由于可能需要数十个至数百个经过审查的CAR靶标和CAR以涵盖影响人类的大多数癌症类型的前景而受到阻碍。此外，现有的CAR技术通常需要昂贵且耗时的离体操纵步骤，以便在将CAR T细胞重新注入宿主之前用CAR载体活化和转导T细胞。此外，CAR T细胞可能具有许多脱靶效应，可能导致危险甚至致命的不良事件。
[0008]对更安全、更具成本效益和更通用的CAR T细胞技术的需求尚未得到满足。

技术实现思路

[0009]本公开总体上涉及方法，所述方法包括(a)向受试者施用包括靶向部分和半抗原的衔接分子；和(b)向受试者施用(i)多个重组逆转录病毒粒子或(ii)通过使免疫细胞与多个重组逆转录病毒粒子离体接触而产生的细胞。逆转录病毒粒子中的每一者包括多核苷
酸，其按5
′
到3
′
的顺序包括：(i)5
′
长末端重复序列(LTR)或非翻译区(UTR)，(ii)启动子，(iii)编码与半抗原特异性结合的受体的序列，和(iv)3
′
LTR或UTR。逆转录病毒粒子中的每一者包括病毒包膜。在一些实施方案中，所述方法是在有需要的受试者中治疗癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法是在有需要的受试者中杀死肿瘤细胞的方法。
[0010]在另一方面，本公开提供了一种系统或组合物，其包括(a)包括靶向部分和半抗原的衔接分子；和(b)(i)多个重组逆转录病毒粒子或(ii)通过使免疫细胞与多个重组逆转录病毒粒子离体接触而产生的细胞。逆转录病毒粒子中的每一者包括多核苷酸，其按5
′
到3
′
的顺序包括：(i)5
′
长末端重复序列(LTR)或UTR，(ii)启动子，(iii)编码与半抗原特异性结合的受体的序列，和(iv)3
′
LTR或UTR。逆转录病毒粒子中的每一者包括病毒包膜。在一些实施方案中，系统或组合物以包括其使用说明书的试剂盒提供。
[0011]本专利技术的其它方面和实施方案由以下具体实施方式提供。
附图说明
[0012]图1A
‑
1D是流式细胞术染色图，描绘了FITC
‑
CAR构建体在转导的T细胞中的表面表达。图1A描绘了淋巴细胞的流式细胞术染色图，所述淋巴细胞进一步门控以使单个细胞可视化(图1B)。进一步对单个细胞进行门控以使CD3+细胞可视化(图1C)。进一步对CD3+细胞进行门控以使FITC
‑
CAR+细胞可视化(图1D)。
[0013]图2A
‑
2F是流式细胞术染色图，描绘了表达RACR
‑
CAR有效负载的转导T细胞如何通过添加雷帕霉素以活化RACR而富集(图2A和图2D)，和/或通过添加FITC抗原以活化CAR而富集(图2B
‑
2C和图2E
‑
2F)。图2A
‑
2C描绘了用0nM雷帕霉素处理的转导细胞，且图2D
‑
2F描绘了用10nM雷帕霉素处理的转导细胞。图2B和2E描绘了用FITC涂布的珠粒刺激的转导细胞，且图2C和2F描绘了用板结合的FITC刺激的转导细胞。
[0014]图3是描绘转导细胞中的活FITC
‑
CAR+T细胞百分比的图，所述转导细胞未刺激、用FITC涂布的珠粒刺激或用板结合的FITC刺激，并且含有(10nM)或不含(0nM)雷帕霉素。
[0015]图4是描绘转导细胞中的活FITC
‑
CAR+T细胞总数的图，所述转导细胞未刺激、用FITC涂布的珠粒刺激或用板结合的FITC刺激，并且含有(10nM)或不含(0nM)雷帕霉素。
[0016]图5是描述在未刺激、用FITC涂布的珠粒刺激或用板结合的FITC刺激并且含有(10nM)或不含(0nM)雷帕霉素的转导细胞中活化标志物CD25的上调的图。gMFI＝几何平均荧光强度。
[0017]图6描绘了FITC CAR
‑
Frb
‑
RACR的矢量图。
[0018]图7描绘了CD3
‑
可卡耳病毒粒子包膜的矢量图。
具体实施方式
[0019]本公开总体上涉及一种方法，所述方法包括(a)向受试者施用包括靶向部分和半抗原的衔接分子；和(b)向受试者施用(i)多个重组逆转录病毒粒子或(ii)通过使免疫细胞与多个重组逆转录病毒粒子离体接触而产生的细胞。逆转录病毒粒子中的每一者包括多核苷酸，所述多核苷酸包括编码与半抗原特异性结合的受体的序列。逆转录病毒粒子中的每一者包括病毒包膜。在一些实施方案中，所述方法是在有需要的受试者中治疗癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法是在有需要的受试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种方法，其包括：(a)向受试者施用包括靶向部分和半抗原的衔接分子；和(b)向所述受试者施用(i)多个重组逆转录病毒粒子或(ii)已离体与多个重组逆转录病毒粒子接触的免疫细胞，其中所述逆转录病毒粒子中的每一者包括多核苷酸，所述多核苷酸包括编码与所述半抗原特异性结合的受体的序列；且其中所述逆转录病毒粒子中的每一者包括病毒包膜。2.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述逆转录病毒粒子是慢病毒粒子。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述病毒包膜包括与所述免疫细胞特异性结合的细胞表面受体。5.如权利要求4所述的方法，其中所述细胞表面受体包括多部分信号传导复合物。6.如权利要求5所述的方法，其中所述多部分信号传导复合物在桥接因子存在下形成功能性多部分信号传导复合物。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述病毒包膜包括一种或多种转导增强子。8.如权利要求7所述的方法，其中所述转导增强子中的每一者是T细胞活化受体、NK细胞活化受体或共刺激分子。9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述衔接分子包括掩蔽半抗原，所述掩蔽半抗原包括一个或多个与所述半抗原共价连接的掩蔽部分。10.如权利要求7所述的方法，其中所述掩蔽半抗原被配置为允许化学反应从所述半抗原去除所述掩蔽部分。11.如权利要求9或10中任一项所述的方法，其中所述掩蔽半抗原被配置为允许活性氧类从所述半抗原去除所述掩蔽部分。12.如权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述掩蔽半抗原包括羟苯基。13.如权利要求9至12中任一项所述的方法，其中所述半抗原包括2,4
‑
二硝基苯酚(DNP)基团。14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述半抗原包括荧光素。15.如权利要求14所述的方法，其中所述半抗原是包括羟苯基荧光素(HPF)的掩蔽半抗原。16.如权利要求14所述的方法，其中所述半抗原是包括荧光素
‑
DNP的掩蔽半抗原。17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述靶向部分包括磷脂醚(PLE)。18.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述靶向部分包括叶酸。19.如权利要求15所述的方法，其中所述衔接分子包括与PLE结合的HPF。20.如权利要求15所述的方法，其中所述衔接分子包括HPF
‑
PEG3‑
C
18
‑
烷基磷脂。21.如权利要求17所述的方法，其中所述衔接分子包括式I的分子：
22.如权利要求17所述的方法，其中所述衔接分子包括HPF
‑
{接头}
‑
erufosine。23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述病毒包膜包括来自可卡耳株的病毒融合糖蛋白或其功能变体。24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述病毒包膜包括病毒融合糖蛋白，所述病毒融合糖蛋白包括与SEQ ID NO:1(可卡耳G蛋白)至少95％一致的氨基酸序列。25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述一种或多种转导增强子包括抗CD3scFv、CD86和CD137L中的一种或多种。26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述转导增强子包括抗CD3scFv、CD86和CD137L中的每一种。27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述多核苷酸包括编码至少一种T细胞活化蛋白的序列。28.如权利要求27所述的方法，其中所述至少一种T细胞活化蛋白是二聚T细胞活化受体。29.如权利要求27或28所述的方法，其中所述至少一种T细胞活化蛋白包括第一受体蛋白，其包括第一二聚化域，和第二受体蛋白，其包括第二二聚化域，其中所述第一二聚化域和所述第二二聚化域响应于分子而特异性地彼此结合。30.如权利要求29所述的方法，其中所述分子选自由以下组成的列表：FK1012、他克莫司(FK506)、FKCsA、雷帕霉素、香豆霉素、赤霉素、HaXS、TMP
‑
HTag、ABT
‑
737以及它们的功能衍生物。31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中与所述半抗原特异性结合的所述受体包括抗体的半抗原特异性抗原结合片段。32.如权利要求31所述的方法，其中所述抗原结合片段包括Fab片段、单链Fv片段(scFv)或单重链抗体。33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中与所述半抗原特异性结合的所述受体包括半抗原特异性嵌合抗原受体。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述半抗原特异性嵌合抗原受体包括与以下氨基酸序列半抗原至少95％一致的氨基酸序列：NN。35.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其中所述受试者中的T细胞被所述逆转录病毒粒子转导。36.如权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述受试者中的T细胞表达与所述半抗原特异性结合的受体。37.如权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述衔接分子特异性结合至和/或标记所述受试者中的癌细胞。38.如权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述掩蔽半抗原通过所述受试者中的化学反应被去除。39.如权利要求1至38中任一项所述的方法，其中由所述逆转录病毒粒子转导的T细胞特异性地杀死包括未掩蔽半抗原的癌细胞。40.如权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述受试者罹患癌症并且所述方法治疗所述癌症。41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述方法杀死肿瘤细胞。42.一种系统、治疗系统或组合物，其包括：(a)包括靶向部分和掩蔽半抗原的衔接分子，其中所述掩蔽半抗原包括与半抗原连接的掩蔽部分；和(b)多个重组逆转录病毒粒子，其中所述逆转录病毒粒子中的每一者包括多核苷酸，其以5
′
至3
′
的顺序包括：(i)5
′
UTR，(ii)启动子，(iii)编码与所述半抗原特异性结合的受体的序列，和(iv)3'UTR；并且其中所述逆转录病毒粒子中的每一者包括病毒包膜，所述病毒包膜包括(i)细胞表面受体，和(ii)一种或多种转导增强子其中任选地，所述转导增强子中的每一者选自由以下组成的组：T细胞活化受体、NK细胞活化受体和共刺激分子。43.如权利要求42所述的系统，其中所述逆转录病毒粒子是慢病毒粒子。44.如权利要求42或43所述的系统，其中所述病毒包膜包括与所述免疫细胞特异性结合的细胞表面受体。45.如权利要求44所述的系统，其中所述细胞表面受体包括多部分信号传导复合物。46.如权利要求45所述的系统，其中所述多部分信号传导复合物在桥接因子存在下形成功能性多部分信号传导复合物。47.如权利要求42至46中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：优莫佳生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：