肝外递送制造技术

本发明专利技术的一个方面涉及一种化合物，该化合物包含：与靶基因互补的反义链；与所述反义链互补的有义链；和一个或多个亲脂性单体，这些亲脂性单体含有任选地经由接头或载体与至少一条链上的一个或多个位置缀合的一个或多个亲脂性部分。本发明专利技术的另一个方面涉及基因沉默的方法，该方法包括向细胞或有需要的受试者施用治疗有效量的亲脂性单体缀合的化合物。用治疗有效量的亲脂性单体缀合的化合物。用治疗有效量的亲脂性单体缀合的化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肝外递送

技术介绍

[0001]在体内将iRNA剂有效递送至细胞需要特异性靶向以及来自细胞外环境(特别是血清蛋白)的实质性保护。基于RNAi的疗法显示针对治疗肝脏相关障碍的临床数据前景很好。然而，将siRNA递送至肝外组织仍存在障碍，这使得基于siRNA的疗法的使用颇为受限。
[0002]iRNA剂的体内实验及治疗应用的限制因素之一是有效递送完整siRNA的能力。已将特定难题与非病毒基因在体内转移至视网膜关联起来。挑战之一是克服阻碍视网膜转染的内界膜。另外，已显示玻璃体的带负电荷的糖与阳性DNA
‑
转染试剂复合物相互作用，促进其聚集，这阻碍扩散及细胞摄取。
[0003]由于游离寡核苷酸无法穿过的血脑屏障(BBB)，寡核苷酸向中枢神经系统(CNS)的递送引起特定问题。将寡核苷酸递送至CNS中的一种方式是通过鞘内递送。然而，寡核苷酸也需要有效内化至CNS的靶细胞中以实现期望的治疗效果。先前的研究通常使用诸如脂质体、阳离子脂质及纳米颗粒形成复合物的递送试剂，以帮助寡核苷酸细胞内内化至神经元起源的细胞中。
[0004]因此，持续需要新的改进的方法：用于在体内递送siRNA分子而不使用组织递送试剂，以实现及增强iRNA剂的治疗潜力。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个方面提供了一种化合物(例如，可以是单链或双链的寡核苷酸)，其包含一个或多个亲脂性单体，这些亲脂性单体含有任选地经由接头或载体与寡核苷酸的至少一条链上的一个或多个位置缀合的一个或多个亲脂性部分。例如，本专利技术的一些实施例提供了一种化合物(例如，双链iRNA剂)，其包含：与靶基因互补的反义链；与所述反义链互补的有义链；和一个或多个亲脂性单体，这些亲脂性单体含有任选地经由接头或载体与至少一条链上的一个或多个位置缀合的一个或多个亲脂性部分。
[0006]在一些实施例中，通过辛醇
‑
水分配系数logK
ow
测量的亲脂性部分的亲脂性超过0。亲脂性部分的logK
ow
可超过1、超过1.5、超过2、超过3、超过4、超过5或超过10。
[0007]在一些实施例中，通过化合物的血浆蛋白结合测定中的未结合分数测量的化合物的疏水性超过0.2。在一个实施例中，测定的血浆蛋白结合测定是使用人类血清白蛋白的电泳迁移率变化测定(EMSA)。通过结合测定中未结合的siRNA的分数测量的化合物的疏水性超过0.15、超过0.2、超过0.25、超过0.3、超过0.35、超过0.4、超过0.45或超过0.5以增强siRNA的体内递送。
[0008]在一些实施例中，亲脂性部分为脂肪族、环状诸如脂环族、或多环，诸如聚脂环化合物，诸如类固醇(例如固醇)或直链或支链脂肪族烃。示例性亲脂性部分是脂质、胆固醇、视黄酸、胆酸、金刚烷乙酸、1
‑
芘丁酸、二氢睾酮、1,3
‑
双
‑
O(十六烷基)甘油、香叶氧基己醇、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3
‑
丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3
‑
(油酰基)石胆酸、O3
‑
(油酰基)胆烯酸、布洛芬、萘普生、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪。
[0009]适合的亲脂性部分也包括含有饱和或不饱和C4‑
C
30
烃链(例如C4‑
C
30
烷基或烯基)
及选自由以下组成的组的任选的官能团的亲脂性部分：羟基、胺、羧酸、磺酸酯、磷酸酯、硫醇、叠氮基及炔烃。这些官能团可用于将亲脂性部分附接至iRNA剂。在一些实施例中，亲脂性部分含有饱和或不饱和C6‑
C
18
烃链(例如直链C6‑
C
18
烷基或烯基)。在一个实施例中，亲脂性部分含有饱和或不饱和C
16
烃链(例如直链C
16
烷基或烯基)。在一些实施例中，亲脂性部分含有两个或更多个碳
‑
碳双键。
[0010]在一些实施例中，亲脂性部分为具有游离末端羧酸官能团(例如，己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、油酸、亚油酸、花生四烯酸、顺式
‑
4,7,10,13,16,19
‑
二十二碳六烯酸)的C6‑
C
30
部分。
[0011]在一些实施例中，亲脂性部分为C6‑
C
30
酸(例如，己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、油酸、亚油酸、花生四烯酸、顺式
‑
4,7,10,13,16,19
‑
二十二碳六烯酸、维生素A、维生素E、胆固醇等)或C6‑
C
30
醇(例如，己醇、庚醇、辛醇、壬醇、癸醇、十一烷醇、十二烷醇、十三烷醇、十四烷醇、十五烷醇、十六烷醇、十七烷醇、十八烷醇、油醇、亚麻醇、花生四烯醇、顺式
‑
4,7,10,13,16,19
‑
二十二碳六烯醇、视黄醇、维生素E、胆固醇等)。
[0012]亲脂性单体可以包含与iRNA剂的任何部分(例如核碱基、糖部分或核苷间键)缀合的亲脂性部分。当亲脂性部分经由直接附接于iRNA剂的核碱基、核糖或核苷间键与iRNA剂缀合，则亲脂性单体包含核碱基、核糖或核苷间键和亲脂性部分。可替代地，亲脂性单体可以包含与非核糖替换单元，如接头或载体缀合的亲脂性部分。当亲脂性部分经由非核糖替换单元(如接头或载体)缀合至iRNA剂时，则亲脂性单体包含非核糖替换单元(如接头或载体)和亲脂性部分。
[0013]在某些实施例中，亲脂性单体不含有核碱基。
[0014]在某些实施例中，亲脂性单体包含经由一个或多个接头(系链)与化合物缀合的亲脂性部分。
[0015]在一些实施例中，亲脂性单体包含经由接头与化合物缀合的亲脂性部分，该接头含有醚、硫醚、脲、碳酸酯、胺、酰胺、马来酰亚胺
‑
硫醚、二硫化物、磷酸二酯、磺酰胺键、点击反应的产物(例如，来自叠氮化物
‑
炔烃环加成的三唑)或氨基甲酸酯。
[0016]在一些实施例中，至少一个接头(系链)是氧化还原可裂解接头(诸如还原可裂解接头，例如二硫化物基团)、酸可裂解接头(例如，腙基、酯基、缩醛基或缩酮基)、酯酶可裂解接头(例如，酯基)、磷酸酶可裂解接头(例如，磷酸酯)或肽酶可裂解接头(例如，肽键)。
[0017]在其他实施例中，至少一个接头(系链)是生物可裂解接头，该生物可裂解接头选自由以下组成的组：DNA，RNA，二硫化物，酰胺，半乳糖胺、葡糖胺、葡萄糖、半乳糖、甘露糖的官能化单糖或寡糖及其组合。
[0018]在某些实施例中，亲脂性单体包含经由替换一个或多个核苷酸的非核糖替换单元(即载体)与化合物缀合的亲脂性部分。载体可以是环状基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种化合物，该化合物包含：与靶基因互补的反义链；与所述反义链互补的有义链；和一个或多个亲脂性单体，其中该亲脂性单体选自由以下组成的组：
其中：m是0
‑
8的整数；n是1
‑
21的整数；R2’
是H、OH、F、OMe、O
‑
甲氧基烷基、O
‑
烯丙基、O
‑
N
‑
甲基乙酰胺基、O
‑
二甲基氨基乙氧基乙基、或O
‑
氨基丙基；B是经修饰的或未修饰的核碱基；W是烷基；并且R、R
’
、和R”各自独立地是H或烷基。2.如权利要求1所述的化合物，其中所述有义链和反义链的长度各自为15至30个核苷酸。3.如权利要求1所述的化合物，其中所述有义链和反义链的长度各自为19至25个核苷酸。4.如权利要求1所述的化合物，其中所述有义链和反义链的长度各自为21至23个核苷
酸。5.如权利要求4所述的化合物，其中该有义链的长度为21个核苷酸，并且该反义链的长度为23个核苷酸，其中这些链形成21个连续碱基对的双链区，该双链区在3'端具有2个核苷酸长的单链突出端。6.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物在多个末端中的至少一个上包含单链突出端。7.如权利要求6所述的化合物，其中所述单链突出端的长度为1、2或3个核苷酸。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的化合物，其中该有义链和反义链包含少于十个经2'
‑
氟修饰的核苷酸。9.如权利要求1
‑
7中任一项所述的化合物，其中该有义链和反义链包含至少50％、至少60％、或最少70％的经2
’‑
OMe修饰的核苷酸。10.如权利要求1所述的化合物，其中该亲脂性单体选自由以下组成的组：
其中R和R'各自独立地是H、甲基、乙基、异丙基、或叔丁基。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的化合物，其中该有义链在3'端包含至少一个硫代磷酸酯键。12.如权利要求1
‑
10中任一项所述的化合物，其中该有义链在3'端包含至少两个硫代磷酸酯键。13.如权利要求11或12所述的化合物，其中这些硫代磷酸酯键中的一个位于该亲脂性单体与该有义链3'端的第一个核苷酸之间。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的化合物，该化合物进一步包含在该反义链的5'端的磷酸酯或磷酸酯模拟物。15.如权利要求14所述的化合物，其中该磷酸酯模拟物是5'
‑
乙烯基膦酸酯(VP)。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的化合物，其中该反义链在种子区包含至少一个GNA。17.如权利要求16所述的化合物，其中该种子区位于该反义链5'端的位置5
‑
7处。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的化合物，该化合物进一步包含靶向配体，该靶向配体靶向介导向CNS组织递送的受体。19.如权利要求18所述的化合物，其中该靶向配体选自由以下组成的组：血管肽
‑
2、脂蛋白受体相关蛋白(LRP)配体、bEnd.3细胞结合配体、运铁蛋白受体(TfR)配体、甘露糖受体配体、葡萄糖转运蛋白以及LDL受体配体。
20.如权利要求1
‑
17中任一项所述的化合物，该化合物进一步包含靶向配体，该靶向配体靶向介导向眼组织递送的受体。21.如权利要求20所述的化合物，其中该靶向配体选自由以下组成的组：反式视黄醇、RGD肽、LDL受体配体以及基于碳水化合物的配体。22.如权利要求21所述的化合物，其中该靶向配体是RGD肽并且该RGD肽是H
‑
Gly
‑
Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
Ser
‑
Pro
‑
Lys
‑
Cys
‑
OH或Cyclo(
‑
Arg
‑
Gly
‑
Asp
‑
D
‑
Phe
‑
Cys)。23.一种降低细胞中靶基因的表达的方法，该方法包括使所述细胞与化合物接触，该化合物包含：与...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：