民族药双参低分子量水溶性提取物、均一多糖、寡糖、总多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了民族药双参低分子量水溶性提取物、多糖、寡糖和总多糖及其制备方法和应用、药物组合物，涉及药物化学技术领域。本发明专利技术制备的民族药双参低分子量水溶性提取物、民族药双参低分子量均一多糖、民族药双参低分子量寡糖和民族药双参低分子量总多糖均对大鼠肾小球系膜细胞模型具有保护作用，可以使大鼠肾小球系膜细胞内的SOD含量增加，MDA含量降低，且效果显著；对糖尿病肾病具有显著疗效，可以用于制备防治糖尿病肾病药物或保健品；毒性试验证实，民族药双参低分子量均一多糖类成分安全性高，可以保证糖尿病肾病等糖尿病并发症患者长期用药的安全性，可应用于预防、改善或者治疗糖尿病及糖尿病肾病，具有良好的开发和应用前景。用前景。用前景。

【技术实现步骤摘要】
民族药双参低分子量水溶性提取物、均一多糖、寡糖、总多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及药物化学
，尤其涉及民族药双参低分子量水溶性提取物、均一多糖、寡糖和总多糖及其制备方法和应用、药物组合物。

技术介绍

[0002]糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是因胰岛素分泌或利用不足而引起糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱的综合症。近年来，DM在全球范围发病率迅速增加，且发病年龄呈年轻化的趋势。DM不仅影响人们的健康，而且给社会带来沉重的负担。糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy，DN)是DM患者常见的并发症之一，是导致终末期肾病和DM患者死亡的主要原因，约30～40％的DM 患者会发展为DN，且发生率随着病程延长而增加。DN早期临床表现为肾小球滤过率增高，尿中微量白蛋白增多，血浆尿素氮和肌酐升高，最后进展为慢性肾功能不全。DN早期的主要病理特征是肾小球肥大，肾小球和肾小管基底膜增厚及系膜区细胞外基质的进行性积聚；后期为肾小球、肾小管间质的纤维化，并最终导致蛋白尿和肾功能衰竭。
[0003]目前对DM的治疗主要以降糖为主，对DN的治疗以采用联合用药为主，综合降血糖、降血压以及降血脂等方面的药物进行治疗，主要是延缓DN的发展，不能起到根治的效果。当前，临床上用激素及细胞毒类药物治疗DN，尽管取得一定疗效，但存在易复发、易产生激素依赖等不良反应。血管紧张素转换酶抑制剂(如卡托普利、依那普利等)对DN有治疗作用。然而，血管紧张素转换酶抑制剂副作用大，会引起低血压、高血钾、肾功能不全、咳嗽等症状。到目前为止，尚没有理想的治疗方法。因此，针对DM和DN，寻找一种高效、低毒的防治药物是目前亟需解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供民族药双参低分子量水溶性提取物、均一多糖、寡糖和总多糖及其制备方法和应用、药物组合物。采用本专利技术方法制备的民族药双参低分子量水溶性提取物、低分子量多糖、低分子量寡糖和低分子量总多糖可以预防或者治疗糖尿病及糖尿病肾病，且安全性高，具有良好的开发和应用前景。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种民族药双参低分子量水溶性提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)利用低级醇水溶液对民族药双参进行醇提，得到醇提取液；所述低级醇水溶液中低级醇体积分数为30～70％；
[0008](2)将所述乙醇提取液与正丁醇混合进行萃取，将所得水相进行浓缩，得到水溶性组分；
[0009](3)将所述水溶性组分进行脱蛋白处理，得到脱蛋白水溶性组分；
[0010](4)将所述脱蛋白水溶性组分置于大孔吸附树脂柱中，利用低级醇体积分数分别为0％、30％和60％的低级醇水溶液进行梯度洗脱，分别收集3 个洗脱液后浓缩，分别得到水洗脱组分、30％醇洗脱组分和60％醇洗脱组分；
[0011](5)在所述水洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分A和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％进行醇沉，得到多糖类组分B；
[0012](6)在30％醇洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分C和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％进行醇沉，得到多糖类组分D；
[0013](7)在60％醇洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分E和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90～92％进行醇沉，得到多糖类组分Z；
[0014](8)将所述多糖类组分A、多糖类组分B、多糖类组分C、多糖类组分D、多糖类组分E和多糖类组分Z合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物。
[0015]优选的，将步骤(5)～(8)替换为：
[0016]在所述水洗脱组分、30％醇洗脱组分和60％醇洗脱组分中分别加入低级醇至低级醇体积分数为90％，进行醇沉，分别得到水洗醇沉多糖组分、30％甲醇洗醇沉多糖组分和60％甲醇洗醇沉多糖组分；将所述水洗醇沉多糖组分、 30％甲醇洗醇沉多糖组分和60％甲醇洗醇沉多糖组分合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物。
[0017]优选的，将步骤(4)～(8)替换为：
[0018]将所述脱蛋白水溶性组分置于大孔吸附树脂柱中，分别利用水和甲醇体积分数为60％的甲醇水溶液进行洗脱，分别收集2个洗脱液后浓缩，得到水洗脱组分和60％醇洗脱组分；
[0019]分别在所述水洗脱组分和60％醇洗脱组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％，进行醇沉，分别得到水洗醇沉组分和60％醇洗醇沉组分；
[0020]将所述水洗醇沉组分和60％醇洗醇沉组分合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物。
[0021]本专利技术提供了上述技术方案所述制备方法得到的民族药双参低分子量水溶性提取物，所述民族药双参低分子量水溶性提取物的相对分子量为 504～33000。
[0022]本专利技术提供了一种民族药双参低分子量均一多糖，包括具有式I所示结构的低分子量多糖LTGP
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B1、具有式II所示结构的低分子量多糖LTGP
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C3、具有式III所示结构的低分子量多糖LTGP
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D2和具有式a
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b
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c
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d所示连接结构的低分子量多糖LTGP
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E1中的一种或几种；
[0023][0024][0025]本专利技术提供了上述技术方案所述民族药双参低分子量均一多糖的制备方法，
[0026](1)所述低分子量多糖LTGP
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B1的制备方法包括以下步骤：
[0027]将上述技术方案所述制备方法得到的多糖类组分B进行葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离，依次得到LBT1组分、LBT2组分、LBT3组分和LBT4组分；所述葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离的洗脱剂为水；
[0028]将所述LBT2组分进行大孔树脂柱除色，依次得到LBT21组分、LBT22 组分、LBT23组分和LBT24组分；所述大孔树脂柱除色的洗脱剂为水；
[0029]将所述LBT22组分进行硅胶柱层析分离，得到低分子量多糖LTGP
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B1；所述硅胶柱层析分离的洗脱剂为氯仿
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甲醇混合溶剂，所述氯仿
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甲醇混合溶剂中氯仿和甲醇的体积比为4:1；
[0030](2)所述低分子量多糖LTGP
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C3的制备方法包括以下步骤：
[0031]将上述技术方案所述制备方法得到的多糖类组分C进行葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离，依次得到LCT1组分、LCT2组分、LCT3组分和LCT4组分；所述葡聚糖凝胶Sephadex LH
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种民族药双参低分子量水溶性提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)利用低级醇水溶液对民族药双参进行醇提，得到醇提取液；所述低级醇水溶液中低级醇体积分数为30～70％；(2)将所述乙醇提取液与正丁醇混合进行萃取，将所得水相进行浓缩，得到水溶性组分；(3)将所述水溶性组分进行脱蛋白处理，得到脱蛋白水溶性组分；(4)将所述脱蛋白水溶性组分置于大孔吸附树脂柱中，利用醇体积分数分别为0％、30％和60％的低级醇水溶液进行梯度洗脱，分别收集3个洗脱液后浓缩，分别得到水洗脱组分、30％醇洗脱组分和60％醇洗脱组分；(5)在所述水洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分A和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％进行醇沉，得到多糖类组分B；(6)在30％醇洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分C和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％进行醇沉，得到多糖类组分D；(7)在60％醇洗脱组分中加入低级醇至体积分数为60％进行醇沉，得到多糖类组分E和液体组分；在所述液体组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90～92％进行醇沉，得到多糖类组分Z；(8)将所述多糖类组分A、多糖类组分B、多糖类组分C、多糖类组分D、多糖类组分E和多糖类组分Z合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物；所述步骤(5)、步骤(6)和步骤(7)没有时间先后顺序。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将步骤(5)～(8)替换为：在所述水洗脱组分、30％醇洗脱组分和60％醇洗脱组分中分别加入低级醇至低级醇体积分数为90％，进行醇沉，分别得到水洗醇沉多糖组分、30％甲醇洗醇沉多糖组分和60％甲醇洗醇沉多糖组分；将所述水洗醇沉多糖组分、30％甲醇洗醇沉多糖组分和60％甲醇洗醇沉多糖组分合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将步骤(4)～(8)替换为：将所述脱蛋白水溶性组分置于大孔吸附树脂柱中，分别利用水和低级醇体积分数为60％的低级醇水溶液进行洗脱，分别收集2个洗脱液后浓缩，得到水洗脱组分和60％醇洗脱组分；分别在所述水洗脱组分和60％醇洗脱组分中加入低级醇至低级醇体积分数为90％，进行醇沉，分别得到水洗醇沉组分和60％醇洗醇沉组分；将所述水洗醇沉组分和60％醇洗醇沉组分合并，得到民族药双参低分子量水溶性提取物。4.权利要求1～3任一项所述制备方法得到的民族药双参低分子量水溶性提取物，所述民族药双参低分子量水溶性提取物的相对分子量为504～33000。5.一种民族药双参低分子量均一多糖，包括具有式I所示结构的低分子量多糖LTGP
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B1、具有式II所示结构的低分子量多糖LTGP
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C3、具有式III所示结构的低分子量多糖LTGP
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D2和具有式a
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b
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c
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d所示连接结构的低分子量多糖LTGP
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E1中的一种或几种；
6.权利要求5所述民族药双参低分子量均一多糖的制备方法，(1)所述低分子量多糖LTGP
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B1的制备方法包括以下步骤：将权利要求1所述制备方法得到的多糖类组分B进行葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离，依次得到LBT1组分、LBT2组分、LBT3组分和LBT4组分；所述葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离的洗脱剂为水；将所述LBT2组分进行大孔树脂柱除色，依次得到LBT21组分、LBT22组分、LBT23组分和LBT24组分；所述大孔树脂柱除色的洗脱剂为水；将所述LBT22组分进行硅胶柱层析分离，得到低分子量多糖LTGP
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B1；所述硅胶柱层析分离的洗脱剂为氯仿
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甲醇混合溶剂，所述氯仿
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甲醇混合溶剂中氯仿和甲醇的体积比为4:1；(2)所述低分子量多糖LTGP
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C3的制备方法包括以下步骤：将权利要求1所述制备方法得到的多糖类组分C进行葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离，依次得到LCT1组分、LCT2组分、LCT3组分和LCT4组分；所述葡聚糖凝胶Sephadex LH
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20柱层析分离的洗脱剂为水；将所述LCT3组分进行大孔树脂柱除色，得到低分子量多糖LTGP
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C3；所述大孔树脂柱除色的洗脱剂为水；(3)所述低分子量多糖LTGP
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D2的制备方法包括以下步骤：将权利要求1所述制备方法得到的多糖类组分D进行葡聚糖凝...

【专利技术属性】
技术研发人员：王福生，解文静，张祖珍，李冬梅，李彩艺，
申请(专利权)人：大理大学，
类型：发明
国别省市：