6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术技术领域，尤其涉及6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒。包括取样盒和检测盒，所述取样盒上设置有盒盖、放置槽、冰袋盒和取样刷槽，所述检测盒上设置有盒盖，所述检测盒内设置有阳性参照瓶、阴性参照瓶、RNA抽提试剂瓶、漂洗瓶、cDNA逆转录试剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶，所述实时荧光定量PCR试剂瓶内盛有PCR缓冲液、上下游引物和探针。将RNA抽提、cDNA逆转录、荧光定量PCR检测所需大部分试剂集中于试剂盒内，最大可能减少了自行调配时出现的误差，取样后可直接检测，也可以将试剂瓶放入放置槽进行转运，使用方便。便。便。

【技术实现步骤摘要】
6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物技术
，尤其涉及6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒是一种嗜上皮性双链环状DNA病毒，由7800～7900个碱基对组成，含有8或9个开放阅读框（ORFs），包裹在无包膜衣壳蛋白内，是一种没有包膜的病毒颗粒。其基因组按功能分为早期转录区（E区）、晚期转录区（L区）和上游调控区（URR）三个主要区域。早期转录区（E区）有8个开放读码框架，是编码病毒周期所必需的基因，并在细胞转化中起重要作用（E1、E2、E4、E5、E6和E7），其中E6、E7是病毒癌基因。晚期转录区（L区）编码病毒颗粒的主要外壳蛋白L1和次要外壳蛋白L2。上游调控区（URR）也称为长控制区（LCR），是含有复制起点和转录因子结合位点的非编码区，通过控制病毒基因转录调节DNA复制。尽管不同人乳头瘤病毒分子ORF的大小和数量存在差异，但所有人乳头瘤病毒都含有保守的核心基因参与复制（即E1和E2）和包装（即L1和L2），其余基因（即E4、E5、E6和E7）在驱动细胞周期、免疫逃逸和病毒释放方面发挥作用。
[0003]人乳头瘤病毒感染具有严格的种属与组织特异性，只对人的皮肤和黏膜组织有特异性感染能力。根据病毒感染后致癌性的高低，可以将这些亚型分为两大类。其中比较重要的亚型及其对应的临床病变主要如下：（1）低危亚型：主要包括6、11、40和42等，可以引起生殖器疣等上皮组织良性增生。（2）高危亚型：主要包括16、18、31、33、35、39、45、51以及66等，可以引起宫颈癌、肛门癌、口咽癌等恶性肿瘤。国内现有基于实时荧光定量PCR技术定量检测人乳头瘤病毒方法多针对于高危亚型，且自行取样时存在诸多不便，检测时试剂需求复杂。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是解决现有技术中的问题，提供6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒。
[0005]本专利技术的技术方案是：6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，包括取样盒3和检测盒6，所述取样盒3上设置有盒盖1、放置槽2、冰袋盒4和取样刷槽5，所述取样刷槽5位于取样盒3和检测盒6之间，所述检测盒6上设置有盒盖1，所述检测盒6内设置有阳性参照瓶、阴性参照瓶、RNA抽提试剂瓶、漂洗瓶、cDNA逆转录试剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶，所述实时荧光定量PCR试剂瓶内盛有PCR缓冲液、上下游引物和探针，所述PCR缓冲液包括pH为7.5的20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷硫酸盐溶液、10mmol/L的氯化镁溶液、100mmol/L的氯化钾溶液。
[0006]所述取样刷槽5内设置有取样刷，所述取样刷包括伸缩杆7、透明套筒8和刷头9,所述伸缩杆7活动设置于所述透明套筒8内，所述透明套筒8上设置有凹槽，所述刷头9卡接于凹槽上。
[0007]所述上游引物序列为 5
’‑
GAGCTGTCGCTTAATTGCTC
‑3’
，所述下游引物序列为 5
’‑
TGCTAATTCGGTGCTTACCTG
‑3’
，所述探针序列为5
’‑
GGTGTTCCCATAGATGCAGTA
‑3’
。
[0008]作为一种优选的技术方案，所述阳性参照瓶内盛有6、11型人乳头瘤病毒混合强阳性样本。
[0009]作为一种优选的技术方案，所述阴性参照瓶内盛有灭菌生理盐水。
[0010]作为一种优选的技术方案，所述RNA抽提试剂瓶试剂组份为：10%TritonX
‑
100,10%去氧胆酸钠，200mmol/L 苯甲基磺酰氯和100mmol/L EDTA。
[0011]作为一种优选的技术方案，所述漂洗瓶中盛有70％乙醇。
[0012]作为一种优选的技术方案，所述cDNA逆转录试剂瓶盛有cDNA逆转录试剂，所述cDNA逆转录试剂包括10
×
RT Mix、dNTPs、oligo
‑
dT、逆转录酶、氯化镁、DEPC
‑
H2O。
[0013]本专利技术的有益效果为：分为取样盒和检测盒两部分，取样盒和检测盒通过取样刷槽隔开，避免温度传导，取样刷上设置有伸缩杆，使用时将伸缩杆抽出，可延长取样刷长度，方便取样，取样完毕后，缓慢推动伸缩杆，将刷头从凹槽内顶出，刷头缓慢落入试剂瓶内，不会接触试剂瓶壁且可以防止喷溅。检测盒将RNA抽提、cDNA逆转录、荧光定量PCR检测所需大部分试剂集中于一起，最大可能减少了自行调配时出现的误差，使用方便。取样后可直接检测，也可以将试剂瓶放入放置槽进行转运，适用于小型或临时检测机构。
[0014]荧光定量PCR法使用特异性探针对定量分子进行识别，具有很高的准确性。同时靶序列由引物和探针双重控制，特异性好、假阳性低。 综合了PCR技术、荧光标记技术、激光技术、数码显象技术为一体的技术，因此检测灵敏度高。 荧光信号的产生和每次扩增产物成一一对应的关系，通过荧光信号的检测可以直接对产物进行定量；定量范围可在0－10
10
拷贝/毫升。扩增和检测可以在同一管内检测，一步完成，不需要开盖，不易污染。 速度快、高通量。
[0015]逆转录得到的DNA与原DNA相比，只有外显子的基因片段，没有内含子的片段，避免提RNA时残留基因组的干扰。
附图说明
[0016]图1为本专利技术结构示意图；图2为本专利技术取样刷主视图；图3为本专利技术取样刷左视图；图4为本专利技术的6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒对临床样本检测的扩增曲线图；其中：1、盒盖，2、放置槽，3、取样盒，4、冰袋盒，5、取样刷槽，6、检测盒，7、伸缩杆，8、透明套筒，9、刷头。
具体实施方式
[0017]为了使本专利技术的技术手段、技术特征、专利技术目的与技术效果易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本专利技术。
[0018]实施例一：
如图1所示，为本专利技术结构示意图，6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，包括取样盒3和检测盒6，所述取样盒3上设置有盒盖1、放置槽2、冰袋盒4和取样刷槽5，所述取样刷槽5位于取样盒3和检测盒6之间，所述放置槽2内设置有放置样品用的试剂瓶，所述取样刷槽5内设置有取样刷，所述检测盒6上设置有盒盖1，所述检测盒6内设置有阳性参照瓶、阴性参照瓶、RNA抽提试剂瓶、漂洗瓶、cDNA逆转录试剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶。 取样后可直接检测，也可以将试剂瓶放入放置槽2，将冰袋放入冰袋盒4进行转运。
[0019]如图2及图3所示，为本专利技术取样刷主视图及左视图，所述取样刷包括伸缩杆7、透明套筒8和刷头9,所述伸缩杆7活动设置于所述透明套筒8内，所述透明套筒8上设置有凹槽，所述刷头9卡接于凹槽上。使用时将伸缩杆7抽出，可延长取样刷长度，方便取样，取样完毕后，缓慢推动伸缩杆7，将刷头9从凹槽内顶出，刷头9缓慢落入试剂瓶内，不会接触试剂瓶壁且可以防止喷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括取样盒（3）和检测盒（6），所述取样盒（3）上设置有盒盖（1）、放置槽（2）、冰袋盒（4）和取样刷槽（5），所述取样刷槽（5）位于取样盒（3）和检测盒（6）之间，所述检测盒（6）上设置有盒盖（1），所述检测盒（6）内设置有阳性参照瓶、阴性参照瓶、RNA抽提试剂瓶、漂洗瓶、cDNA逆转录试剂瓶和实时荧光定量PCR试剂瓶，所述实时荧光定量PCR试剂瓶内盛有PCR缓冲液、上下游引物和探针，所述PCR缓冲液包括pH为7.5的20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷硫酸盐溶液、10mmol/L的氯化镁溶液、100mmol/L的氯化钾溶液。2.根据权利要求1所述的6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述取样刷槽（5）内设置有取样刷，所述取样刷包括伸缩杆（7）、透明套筒（8）和刷头（9）,所述伸缩杆（7）活动设置于所述透明套筒（8）内，所述透明套筒（8）上设置有凹槽，所述刷头（9）卡接于凹槽上。3.根据权利要求1所述的6、11型人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述上游引物序列为 5
’‑
GAGCTGTCGCTTAATTGCTC
‑3’
，所述下游引物序列为 5
’‑
TGCTAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：高霞，
申请(专利权)人：济南千麦医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：