人脑胶质瘤标志物hsa_circ_0009362及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及到hsa_circ_0009362基因在胶质瘤临床早期诊断、治疗以及预后评估中的应用。一种人脑胶质瘤的生物标志物，所述标志物是hsa_circ_0009362基因。hsa_circ_0009362基因在胶质瘤诊断和预后判断相关试剂盒中的用途。hsa_circ_0009362基因的抑制剂在制备治疗胶质瘤靶向药物中的应用，所述抑制剂能够特异抑制hsa_circ_0009362基因的功能。实验证明hsa_circ_0009362基因在体内胶质瘤组织中的表达较正常脑组织中明显上调，使得hsa_circ_0009362基因成为肿瘤辅助诊断标志物具备可行性。本发明专利技术为胶质瘤诊治提供了新的理论依据和全新靶点，也为胶质瘤预后评估提供方法。评估提供方法。评估提供方法。

【技术实现步骤摘要】
人脑胶质瘤标志物hsa_circ_0009362及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及到环状RNA：hsa_circ_00009632在胶质瘤的早期诊断、临床治疗以及预后评估中的应用。

技术介绍

[0002]胶质瘤是中枢神经系统中的一种常见的原发性肿瘤，恶性程度高，预后很差。目前对胶质瘤主要治疗方法首选为手术切除，术后辅助化学治疗、放射治疗等。由于血脑屏障的存在，常用的化疗药物较难到达肿瘤位置发挥作用，胶质瘤患者的治疗效果仍然很差，尤其是胶质母细胞瘤患者的中位生存时间不到15个月。近年来，全基因组分子图谱已揭示不同类型胶质瘤的遗传学和表观分子生物学特征，由于基因测序技术的迅速发展，大量有价值的分子标志物逐渐被发现，这些分子在胶质瘤诊断、治疗和预后方面逐渐受到广泛的关注。因此，分子靶向治疗有望成为彻底治愈胶质瘤的治疗方式之一。胶质瘤发生发展的相关致癌和抑癌基因与胶质瘤患者的早期诊断和临床治疗预后密切相关，因此寻找胶质瘤基因治疗的有效靶点，可以作为评估胶质瘤发病风险、早期诊断、临床治疗以及预后评估的重要指标。
[0003]胶质瘤干细胞（glioma stem cells，GSCs）是恶性胶质瘤中一种特殊类型的细胞，具有高度自我更新能力并且可以多向分化，是一种肿瘤起始发生以及后续发展的细胞。有临床调查研究表明其与胶质瘤细胞的发生发展、增殖侵袭、迁移、血管形成、抗凋亡坏死以及耐药复发等过程有十分紧密的关联。因此，靶向胶质瘤干细胞的分子治疗能够提高胶质瘤的治疗效果，从根本上降低术后放化疗的耐受性，并有效抑制复发，最终有望实现胶质瘤彻底治愈。研究寻找一种新的高效的胶质瘤特异性分子靶向标志物，对于恶性胶质瘤的早期诊断、临床分子靶向治疗以及预后评估十分重要。
[0004]环状RNA（circular RNA，circRNA）是一类具有闭合环状结构的非编码RNA分子，没有5
’
帽结构和3
’
poly(A)尾结构，由于其特殊结构及不受外切酶影响的属性的存在，使其可以稳定表达并且不易降解。同时，环状RNA还具有多种多样的生物学功能，如海绵吸附miRNA、调控基因转录、与有功能的蛋白质结合、翻译蛋白以及作为多元复合物的支架 。circRNA功能多样，并且在体内含量丰富，有多种基因表达调控方式，在胶质瘤增殖、凋亡、侵袭和迁移等方面发挥重要作用。近年来，circRNA在胶质瘤中的作用被逐渐发现以及深入研究，具有广泛的临床应用潜力，有望成为胶质瘤基因治疗的新的靶点，从而提高胶质瘤的诊疗水平，加长患者生存期以及降低放化疗的耐受性。

技术实现思路

[0005]基于临床问题以及现实技术的角度，本专利技术提供了一种人脑胶质瘤标记物circRNA hsa_circ_0009362，核酸序列：SEQ ID NO:1，及其在恶性胶质瘤的早期诊断、临床治疗以及预后评估等方面的应用。专利技术人基于高通量测序技术发现同正常组织相比较，胶质瘤组织中的hsa_circ_0009362显著高表达，且随着WHO分级级别升高而升高。同时，高表
达hsa_circ_0009362与不良预后成正相关。故本专利技术人以患者来源胶质瘤细胞为研究对象，通过慢病毒载体转染对hsa_circ_0009362基因进行沉默与过表达，通过体外实验发现hsa_circ_0009362的过表达能够有效促进胶质瘤干细胞的增殖、侵袭、迁移、神经球形成等恶性表型，相反，沉默基因后则表现为抑制胶质瘤干细胞的增殖、侵袭、迁移、神经球形成等表型，此恶性表型通过胶质瘤细胞相关指标得以体现。
[0006]为了证实hsa_circ_0009362在脑胶质瘤的诊治中的作用，本专利技术采取以下技术方案。
[0007]本专利技术提供了hsa_circ_0009362基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒中的应用。
[0008]进一步地，所述试剂盒中包含扩增hsa_circ_0009362基因的特异性引物、与hsa_circ_0009362基因核苷酸序列杂交的探针或干细胞干性标志物蛋白抗体。
[0009]进一步地，述扩增hsa_circ_0009362基因的特异性引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
[0010]进一步地，所述的脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒以hsa_circ_0009362基因作为标记物。
[0011]优选地，所述的脑胶质瘤诊断筛查的试剂盒是通过western或定量PCR技术来检测组织中hsa_circ_0009362基因的表达水平，所述的hsa_circ_0009362基因表达的程度与脑胶质瘤发生率呈正相关。
[0012]优选地，所述的脑胶质瘤预后评估试剂盒是通过Western或定量PCR技术检测组织中hsa_circ_0009362基因的表达水平，所述的hsa_circ_0009362基因表达的程度与脑胶质瘤的预后生存期呈负相关。
[0013]本专利技术还提供hsa_circ_0009362基因表达水平的抑制剂在制备治疗胶质瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制剂能够抑制hsa_circ_0009362基因表达水平。
[0014]进一步地，所述抑制剂包括抑制hsa_circ_0009362基因表达的siRNA、shRNA、含有siRNA、shRNA序列的表达载体和/或其他抑制剂化合物；所述表达载体包括真核表达载体，所述真核细胞表达载体包括质粒表达载体或病毒表达载体。
[0015]优选地，所述抑制hsa_circ_0009362基因表达的siRNA序列如SEQ ID NO:4
‑
SEQ ID NO:7所示。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下。
[0017]由于目前临床上关于胶质瘤辅助诊断与预后判断的标记物尚不完善或特异性较低，本专利技术提供胶质瘤标记物hsa_circ_0009362及其应用，hsa_circ_0009362基因在体内胶质瘤中的表达较正常脑组织中明显上调，使得hsa_circ_0009362有望成为肿瘤辅助诊治预后相关特异标记物。并且根据本专利技术研究结果，抑制内源性胶质瘤中的hsa_circ_0009362表达可显著降低胶质瘤干细胞增殖和肿瘤发生发展，反映胶质瘤恶性表型表达减弱，这一特性使得hsa_circ_0009362可以成为肿瘤治疗潜在的有效靶点。本专利技术同时发现hsa_circ_0009362基因表达越高，胶质瘤患者生存率越低，即hsa_circ_0009362过表达患者预示着较差的生存预后，这一特性使得hsa_circ_0009362基因能够作为胶质瘤患者生存预后评估指标。本专利技术为胶质瘤患者治疗与预后提供的全新理论依据和新的潜在靶标，也为胶质瘤的诊治和预后评估提供新的方法。
附图说明
[0018]图1 hsa_circ_0009362基因在临床各等级胶质瘤样品中表达情况。其中，a是hsa_circ_0009362在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.hsa_circ_0009362基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的hsa_circ_0009362基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒中包含扩增hsa_circ_0009362基因的特异性引物、与hsa_circ_0009362基因核苷酸序列杂交的探针或干细胞干性标志物蛋白抗体。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述扩增hsa_circ_0009362基因的特异性引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。4.根据权利要求1所述的hsa_circ_0009362基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒中的应用，其特征在于，所述的脑胶质瘤诊断筛查和/或预后评估的试剂盒以hsa_circ_0009362基因作为标记物。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的脑胶质瘤诊断筛查的试剂盒是通过western或定量PCR技术来检测组织中hsa_circ_0009362基因的表达水平，所述的hsa_c...

【专利技术属性】
技术研发人员：景治涛，蒋炀，张国清，陈炼，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：