基于CD3反应性的T细胞募集多肽制造技术

提供与T细胞上的CD3结合的T细胞募集多肽。所述多肽能够用于治疗癌症的方法。所述多肽能够用于治疗癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
基于CD3反应性的T细胞募集多肽
[0001]本申请是申请日为2016年5月13日、专利技术名称为“基于CD3反应性的T细胞募集多肽”的中国专利申请No.201680040586.1的分案申请。
专利

[0002]本专利技术提供多特异性T细胞募集多肽，所述多肽结合T细胞上的CD3和靶细胞上的至少一个抗原。本专利技术也涉及在这些多特异性多肽中使用的单价T细胞募集多肽。本专利技术还提供治疗方法和提供它们的试剂盒。

技术介绍

[0003]癌症在全世界造成了巨大的人员伤亡。现在，它是世界上的主要死因，其次是心脏病和中风。癌症是世界范围内发病率和死亡率的主要原因之一，在2012年约有1400万新病例和820万癌症相关死亡。预计未来20年新病例的数量将上升约70％(来源：WHO癌症)。在2008年，世界范围内癌症的过早死亡和残疾导致的总体经济影响大约为9000亿美元，占全球国内生产总值的1.5％。
[0004]可用于实体瘤的治疗方案典型地包括手术切除、化疗和放疗的组合。在40年的临床经验中，几乎没有取得任何进展，特别是在癌症的晚期阶段。
[0005]急切期待对抗癌症的新疗法。
[0006]抗体疗法现在是对抗疾病并且尤其是癌症的医生的医疗设备的重要部分。单克隆抗体已经被确立为几年来一系列疾病的关键治疗方法。所有同时期批准的抗体疗法都依赖于单特异性单克隆抗体(mAb)。直到今天，mAb的大多数靶标需要激动或拮抗的方法。虽然靶向细胞表面抗原本身能够通过诱导细胞凋亡来介导抗肿瘤活性，但是大多数针对血液恶性肿瘤的基于mAb的活性依赖于Fc介导的效应子功能，诸如补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
[0007]免疫疗法已经成为癌症研究的快速发展领域。免疫疗法正在将身体的免疫监视系统并且特别是T细胞导向癌细胞。
[0008]细胞毒性T细胞(CTL)是这样的T淋巴细胞，其杀死癌细胞、被感染的细胞(特别是被病毒感染的细胞)或以其它方式受损的细胞。T淋巴细胞(或T细胞)在细胞表面表达T细胞受体或TCR分子以及CD3受体。αβTCR
‑
CD3复合物(或“TCR复合物”)由六种不同的I型单跨越(single
‑
spanning)跨膜蛋白组成：形成负责配体识别的TCR异源二聚体的TCRα和TCRβ链，以及非共价缔合的CD3γ、CD3δ、CD3ε和ζ链(它们具有在受体活化时被磷酸化的胞质序列基序并且募集大量信号传导组分)(Call等人2004,Molecular Immunology 40:1295
–
1305)。
[0009]T细胞受体的α链和β链均由恒定结构域和可变结构域组成。生理学上，T细胞受体的αβ链识别载有肽的MHC复合物，并且在与CD3链接合时偶联。这些CD3链随后将接合信号转导到细胞内环境。
[0010]考虑到天然存在的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导细胞溶解的潜力，已经探索了各种策略来募集CTL以介导肿瘤细胞杀伤。由于T淋巴细胞缺少Fc受体的表达，所以它们不是
通过抗肿瘤单克隆的Fc尾来募集到肿瘤位点。作为备选方案，患者的T细胞采用对确定的肿瘤抗原具有已知的特异性的第二TCR进行修饰。这种过继性细胞转移本质上是高度个性化的和劳动密集型的。然而，T细胞疗法的主要问题仍然是已知在癌症患者中发生的大量免疫逃逸机制(Nagorsen等人2012,Pharmacology&Therapeutics 136:334
–
342)。
[0011]较新的发展已经尝试通过经由基于重组抗体的“双特异性抗体”技术以多克隆方式接合患者的所有细胞毒性T细胞来组合免疫疗法与抗体疗法的优点，而不是引发依赖于癌细胞表达MHC分子以及特异性肽抗原的存在、产生、转运和展示的特异性T细胞应答。
[0012]双特异性抗体已经被工程改造，其在一个臂(靶标结合臂)上具有肿瘤识别部分，而该分子的另一个臂对T细胞抗原(效应子结合臂)(主要是CD3)具有特异性。通过将两个臂同时结合到它们各自的靶抗原上，T淋巴细胞被导向肿瘤细胞并在肿瘤细胞处活化，在那里它们能够发挥其细胞溶解功能。
[0013]使用双特异性抗体来活化针对肿瘤细胞的T细胞的概念在二十多年前就有描述，但是制造问题和临床失败使该领域陷入停滞。开发了较小格式的双特异性抗体，其比常规抗体更容易穿透组织和肿瘤。另外，较小的格式更善于创建细胞毒性突触(其杀死靶细胞)。据认为较小格式的双特异性抗体比常规抗体更容易制造，并且免疫原性较低。然而，由5个氨基酸肽接头连接的两个单链可变片段(scFv)组成的较小的双特异性BiTE分子表现出缺乏稳定性(scFv倾向于聚集)，低表达滴度和差的溶解度。此外，识别CD3链的博纳吐单抗(Blinatumomab)(一种BiTE分子)的首次临床试验由于以下而过早地停止：在一方面是神经系统不良事件，细胞因子释放综合征和感染，且在另一方面是缺少生物活性的客观临床反应或强烈迹象。除了效力，BiTE必须不断地被注入
‑‑
可能是由于缺少Fc结构域
‑‑
这不会有助于患者的依从性(compliance)。对于DART(由MacroGenics开发的双亲和力重靶向分子)，其中来自一个抗体(Ab)的重可变结构域与另一个Ab的轻可变结构域连接，也存在同样的问题。MacroGenics目前试图通过将Fc结构域融合到其下一代DART上来解决这个问题，这使得分子不仅变得更大，而且还导致制造问题和其它Fc功能的输入。Fc的较大格式将具有更好的PK，但是重新引入了脱靶活性的风险。(Garber 2014,Nature reviews 13:799
‑
801)。
[0014]仍然需要替代的双特异性格式。
[0015]专利技术概述
[0016]本专利技术通过提供多特异性多肽解决了该问题，所述多特异性多肽包含第一免疫球蛋白单可变结构域(ISV)和至少一个另外的免疫球蛋白单可变结构域，其中所述第一ISV对CD3具有高亲和力/与CD3结合；所述至少一个另外的ISV对靶细胞上存在的抗原具有高亲和力/与靶细胞上存在的抗原结合。在特别的方面，第一ISV的结合将活化T细胞针对靶细胞的固有细胞毒性潜力(独立于MHC1之外)。
[0017]因此，在第一方面，本专利技术提供多肽，其包含第一和第二免疫球蛋白单可变结构域(ISV)，其中
[0018]‑
所述第一ISV对T细胞上存在的分化簇3(CD3)具有高亲和力/与T细胞上存在的分化簇3(CD3)结合；
[0019]‑
所述第二ISV对靶细胞上的第一抗原具有高亲和力/与靶细胞上的第一抗原结合；
[0020]其中所述第一抗原不同于所述CD3；并且
[0021]其中所述靶细胞不同于所述T细胞。
[0022]在另外的方面，本专利技术提供如本文所述的多肽，其中所述多肽将T细胞导向靶细胞。
[0023]在另外的方面，本专利技术提供如本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包含第一免疫球蛋白单可变结构域(ISV)和第二免疫球蛋白单可变结构域的多肽，其中
‑
所述第一ISV对T细胞上存在的分化簇3(CD3)具有高亲和力/与T细胞上存在的分化簇3(CD3)结合；
‑
所述第二ISV对靶细胞上的第一抗原具有高亲和力/与靶细胞上的第一抗原结合；其中所述第一抗原不同于所述CD3；并且其中所述靶细胞不同于所述T细胞。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽将所述T细胞导向所述靶细胞。3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述多肽诱导T细胞活化。4.根据权利要求3所述的多肽，其中所述T细胞活化独立于MHC识别。5.根据权利要求3或4所述的多肽，其中所述T细胞活化依赖于将与靶细胞上的所述第一抗原结合的所述多肽呈递至T细胞。6.根据权利要求3至5中任一项所述的多肽，其中所述T细胞活化引起所述T细胞的一种或多种细胞应答，其中所述细胞应答选自由以下组成的组：增殖，分化，细胞因子分泌，细胞毒性效应分子释放，细胞毒性活性，表达活化标志物和重定向的靶细胞溶解。7.根据权利要求3至5中任一项所述的多肽，其中所述T细胞活化引起抑制所述靶细胞的活性达多于约10％，诸如20％、30％或40％或甚至多于50％，诸如多于60％，诸如70％、80％或甚至多于90％，诸如100％。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV结合TCR复合物的CD3γ(SEQ ID NO:292)、CD3δ(SEQ ID NO:291)和/或CD3ε(SEQ ID NO:293)，或其多态变体或同种型。9.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述多肽和/或第一ISV关于结合所述CD3具有选自由以下组成的组的结合速率常数(Kon)：至少约102M
‑1s
‑1、至少约103M
‑1s
‑1、至少约104M
‑1s
‑1、至少约105M
‑1s
‑1、至少约106M
‑1s
‑1、107M
‑1s
‑1、至少约108M
‑1s
‑1、至少约109M
‑1s
‑1和至少约10
10
M
‑1s
‑1，优选如通过表面等离子共振所测量的。10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述多肽和/或第一ISV对结合所述CD3具有选自由以下组成的组的解离速率常数(Koff)：至多约10
‑3s
‑1、至多约10
‑4s
‑1、至多约10
‑5s
‑1、至多约10
‑6s
‑1、至多约10
‑7s
‑1、至多约10
‑8s
‑1、至多约10
‑9s
‑1和至多约10
‑
10
s
‑1，优选如通过表面等离子共振所测量的。11.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV以这样的EC50值与所述CD3结合：在100nM至1pM之间的EC50值，诸如100nM以下的平均EC50值，甚至更优选90nM以下的平均EC50值，诸如小于80、70、60、50、40、30、20、10、5nM或甚至更小，诸如小于4、3、2、1nM或甚至更小，诸如小于500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、5pM或甚至更小，诸如小于4pM的平均EC50值，优选如通过流式细胞术所测量的。12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV以这样的平均KD值与所述CD3结合：在100nM至10pM之间的平均KD值，诸如90nM以下的平均KD值，甚至更优选80nM以下的平均KD值，诸如小于70、60、50、40、30、20、10、5nM或甚至更小，诸如小于4、3、2、1nM，诸如小于500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20pM或甚至更小，诸如小于10pM的平均KD值。优选地，KD通过SPR确定，例如如通过Proteon所确定的。
13.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NOs:81
‑
100；和(b)与SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:81
‑
100中任一者具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NOs:101
‑
122；和(d)与SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:101
‑
122中任一者具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NOs:123
‑
143；和(f)与SEQ ID NO:123的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:123
‑
143中任一者具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。14.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:81；和(b)与SEQ ID NO:81具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置1处G已经变为R；
‑
在位置3处T已经变为A；
‑
在位置4处Y已经变为F；
‑
在位置8处S已经变为G；和/或
‑
在位置10处G已经变为A。15.根据权利要求13或14所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:101；和(b)与SEQ ID NO:101具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置3处V已经变为T或A；
‑
在位置5处S已经变为T；
‑
在位置6处G已经变为D或E；和/或
‑
在位置9处T已经变为S、A或P。16.根据权利要求13至15中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:123；和(b)与SEQ ID NO:123具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置2处I已经变为T；
‑
在位置9处I已经变为V；和/或
‑
在位置10处A已经变为P。
17.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NOs:81
‑
87；和(b)与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NOs:101
‑
109；和(d)与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NOs:123
‑
127；和(f)与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。18.根据权利要求13
‑
17中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:81表示，CDR2由SEQ ID NO:101表示，且CDR3由SEQ ID NO:123表示。19.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1是SEQ ID NO:88。20.根据权利要求13或19所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2是SEQ ID NO:110。21.根据权利要求13、19或20所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3是SEQ ID NO:128。22.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:88；和(b)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NO:110；和(d)与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NO:128；和(f)与SEQ ID NO:128的氨基酸序列具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。23.根据权利要求13或22所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:88表示，CDR2由SEQ ID NO:110表示，且CDR3由SEQ ID NO:128表示。24.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1是SEQ ID NO:90。25.根据权利要求13或24所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:112；和
(b)与SEQ ID NO:112具有1个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置2处V已经变为A。26.根据权利要求13、24或25所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3是SEQ ID NO:130。27.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:90；和(b)与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NOs:112
‑
113；和(d)与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NO:130；和(f)与SEQ ID NO:130的氨基酸序列具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。28.根据权利要求13或27所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:90表示，CDR2由SEQ ID NO:112表示，且CDR3由SEQ ID NO:130表示。29.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1是SEQ ID NO:89。30.根据权利要求13或29所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2是SEQ ID NO:111。31.根据权利要求13、29或30所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3是SEQ ID NO:129。32.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:89；和(b)与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NO:111；和(d)与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NO:129；和(f)与SEQ ID NO:129的氨基酸序列具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。33.根据权利要求13或32所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:89表示，CDR2由SEQ ID NO:111表示，且CDR3由SEQ ID NO:129表示。34.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至
FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:91；和(b)与SEQ ID NO:91具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置6处R已经变为N或T；
‑
在位置7处N已经变为H；和/或
‑
在位置8处M已经变为T。35.根据权利要求13或34所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:114；和(b)与SEQ ID NO:114具有1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置1处R已经变为Q；
‑
在位置3处T已经变为S；和/或
‑
在位置7处D已经变为A或K。36.根据权利要求13、34至35中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:131；和(b)与SEQ ID NO:131具有1或2个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置2处S已经变为R；和/或
‑
在位置6处S已经变为V。37.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NOs:91
‑
93；和(b)与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NOs:114
‑
117；和(d)与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NOs:131
‑
133；和(f)与SEQ ID NO:131的氨基酸序列具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。38.根据权利要求13或37所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:91表示，CDR2由SEQ ID NO:114表示，且CDR3由SEQ ID NO:131表示。39.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:94；和(b)与SEQ ID NO:94具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置3处S已经变为T、A或G；
‑
在位置5处N已经变为S；
‑
在位置6处M已经变为T或A；和/或
‑
在位置9处L已经变为M。40.根据权利要求13或39所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR2选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:118；和(b)与SEQ ID NO:118具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置2处H已经变为V；
‑
在位置5处S已经变为H或A；
‑
在位置8处N已经变为S；和/或
‑
在位置10处Y已经变为F。41.根据权利要求13、39至40中任一项所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中CDR3选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NO:134；和(b)与SEQ ID NO:134具有1、2、3或4个氨基酸差异的氨基酸序列，其中
‑
在位置6处A已经变为S或D；
‑
在位置7处F已经变为Y或A；
‑
在位置8处R已经变为H；
‑
在位置9处S已经变为A；
‑
在位置11处G已经变为D、T、N、S、K或R；和/或
‑
在位置14处V已经变为I。42.根据权利要求13所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：(i)CDR1选自由以下组成的组：(a)SEQ ID NOs:94
‑
100；和(b)与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(ii)CDR2选自由以下组成的组：(c)SEQ ID NOs:118
‑
122；和(d)与SEQ ID NO:118的氨基酸序列具有4、3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或(iii)CDR3选自由以下组成的组：(e)SEQ ID NOs:134
‑
143；和(f)与SEQ ID NO:134的氨基酸序列具有3、2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。43.根据权利要求13或42所述的多肽，其中所述第一ISV基本上由4个框架区(分别是FR1至FR4)和3个互补决定区(分别是CDR1至CDR3)组成，其中：CDR1由SEQ ID NO:94表示，CDR2由SEQ ID NO:118表示，且CDR3由SEQ ID NO:134表示。44.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中靶细胞上的所述第一抗原是肿瘤抗原，优选肿瘤相关抗原(TAA)。45.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其进一步包含第三ISV，所述第三ISV对靶
细胞上的第二抗原具有高亲和力和/或与靶细胞上的第二抗原结合，其中所述第二抗原不同于所述第一抗原。46.根据权利要求45所述的多肽，其中靶细胞上的所述第二抗原是肿瘤抗原，优选肿瘤相关抗原(TAA)。47.根据权利要求44
‑
46中任一项所述的多肽，其中所述第一抗原和所述第二抗原存在于相同的靶细胞上。48.根据权利要求44
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46中任一项所述的多肽，其中所述第一抗原和所述第二抗原存在于不同的靶细胞上。49.根据权利要求44
‑
48中任一项所述的多肽，其中所述TAA独立地选自由以下组成的组：黑素瘤相关的硫酸软骨素蛋白聚糖(Melanoma
‑
associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan,MCSP),表皮生长因子受体(EGFR),成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast Activation Protein,FAP),MART
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1,癌胚抗原(“CEA”),gp100,MAGE
‑
1,HER
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2,和LewisY抗原,CD123,CD44,CLL
‑
1,CD96,CD47,CD32,CXCR4,Tim
‑
3,CD25,TAG
‑
72,Ep
‑
CAM,PSMA,PSA,GD2,GD3,CD4,CD5,CD19,CD20,CD22,CD33,CD36,CD45,CD52,和CD147,生长因子受体,包括ErbB3和ErbB4,和细胞因子受体,包括白细胞介素
‑
2受体γ链(CD132抗原),白细胞介素
‑
10受体α链(IL
‑
10R
‑
A),白细胞介素
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10受体β链(IL
‑
10R
‑
B),白细胞介素
‑
12受体β
‑
1链(IL
‑
12R
‑
β1),白细胞介素
‑
12受体β
‑
2链(IL
‑
12受体β
‑
2),白细胞介素
‑
13受体α
‑
1链(IL
‑
13R
‑
α
‑
1)(CD213a1抗原),白细胞介素
‑
13受体α
‑
2链(白细胞介素
‑
13结合蛋白),白细胞介素
‑
17受体(IL
‑
17受体),白细胞介素
‑
17B受体(IL
‑
17B受体),白细胞介素21受体前体(IL
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21R),I型白细胞介素
‑
1受体(IL
‑
1R
‑
1)(CD121a),II型白细胞介素
‑
1受体(IL
‑
1R
‑
β)(CDw121b),白细胞介素
‑
1受体拮抗蛋白(IL
‑
1ra),白细胞介素
‑
2受体α链(CD25抗原),白细胞介素
‑
2受体β链(CD122抗原),白细胞介素
‑
3受体α链(IL
‑
3R
‑
α)(CD123抗原),CD30,IL23R,IGF
‑
1R,IL5R,IgE,CD248(内皮唾液酸蛋白(endosialin)),CD44v6,gpA33,Ron,Trop2,PSCA,密蛋白(claudin)6,密蛋白18.2,CLEC12A,CD38,ephA2,c
‑
Met,CD56,MUC16,EGFRvIII,AGS
‑
16,CD27L,柄蛋白(Nectin)
‑
4,SLITRK6,间皮素,叶酸受体,组织因子,axl,磷脂酰肌醇聚糖(glypican)
‑
3,CA9,Cripto,CD138,CD37,MUC1,CD70,胃泌素释放肽受体,PAP,CEACAM5,CEACAM6,CXCR7,N
‑
钙粘蛋白(cadherin),FXYD2γa,CD21,CD133,Na/K
‑
ATP酶,mIgM(膜结合IgM),mIgA(膜结合IgA),Mer,Tyro2,CD120,CD95,CA 195,DR5,DR6,DcR3和CAIX，和相关的多态变体和同种型。50.根据权利要求49所述的多肽，其中所述TAA是CD20(UniProt 11836)，HER2(Uniprot P04626)，其多态变体或同种型。51.根据权利要求44
‑
49中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：安内利斯，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：