一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，属于粘液处理技术领域。在本发明专利技术中，羧甲基纤维素经多价金属离子交联改性后，具有多孔状立体分子交联结构，其多孔状结构特性实现了类似筛取细胞的功能，简称为“液相分子筛”，此结构不仅可以吸附粘液中的蛋白分子，将粘液蛋白长分子链之间进行分离，使细胞成分从粘液包裹状态解离出来，更因为自身带有大量孔洞，能使细胞在机械力的作用下通过孔洞分离出来，实现细胞的分离提取。本发明专利技术以使用纯物理方式从粘液液样本中提取细胞成分，多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素不与细胞发生化学反应，因此不会破坏细胞结构。因此不会破坏细胞结构。因此不会破坏细胞结构。

【技术实现步骤摘要】
一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法


[0001]本专利技术涉及粘液处理
，特别涉及一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法。

技术介绍

[0002]粘液(或称黏液)是一种从人体的黏膜层或黏膜下层分泌出来的湿滑液体，如痰液、宫颈细胞液等。粘液一般都是比较浓稠的胶状体，其内含有丰富的细胞成分。粘液是病理细胞学或细胞培养等领域经常遇到的样本类型，从粘液中将细胞样本完整地提取出来，是进行诊断或科研的前提和基础。
[0003]目前从粘液中提取细胞的技术，主要有“碱溶液处理法”和“化学裂解液法”两种方法。“碱溶液处理法”通常是将痰液等样本放入到热的氢氧化钠水溶液中进行粘液裂解。“化学裂解液法”是使用如乙酰半胱氨酸、盐酸溴己新等化学成分，对粘液蛋白中的二硫键进行化学裂解。很明显，无论是强碱条件，还是化学裂解条件，细胞成分根本承受不了这样的理化环境。实际处理效果已经证明，上述两种方法，细胞成分的形态均会受到极大破坏，处理粘液的同时，难以获得有诊断价值的细胞成分。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术目的在于提供一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，本专利技术提供的方法不破坏细胞结构，能够顺利将细胞从粘液中分离提取出来。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，包括以下步骤：
[0007]提供多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液；
[0008]将粘液与所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液混合，机械力分离，得到细胞。
[0009]优选的，所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的质量浓度为0.2～0.5％；
[0010]所述粘液与多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的体积比≤65:100。
[0011]优选的，所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的制备方法，包括以下步骤：
[0012]将羧甲基纤维素、水与无机强碱混合，得到碱改性羧甲基纤维素溶液；
[0013]将所述碱改性羧甲基纤维素溶液与冰醋酸混合，得到酸改性羧甲基纤维素溶液；
[0014]将所述酸改性羧甲基纤维素溶液与可溶性多价金属盐混合，进行交联反应，得到多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液。
[0015]优选的，所述可溶性多价金属盐为可溶性镁盐、可溶性钙盐、可溶性锌盐和可溶性铁盐中的一种或几种。
[0016]优选的，所述羧甲基纤维素与水的质量比为0.2～0.5:100；所述羧甲基纤维素与
无机强碱的质量比为0.5～1:0.5～1。
[0017]优选的，所述羧甲基纤维素的质量与冰醋酸的体积比为0.8～1.3g:0.8～1.5mL；
[0018]所述羧甲基纤维素与可溶性多价金属盐的质量比为0.5～1:0.5～1。
[0019]优选的，所述混合的方式为振荡混合或涡旋混合，所述混合的时间为5～10min。
[0020]优选的，所述机械力分离为离心分离；所述离心分离的离心力为600～800g，所述离心分离的时间为5～10min。
[0021]优选的，所述粘液为痰液、宫颈细胞液、肺泡灌洗液、支气管涮洗液、甲状腺穿刺样本、肾穿刺样本中的一种或几种。
[0022]本专利技术提供了一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，包括以下步骤：提供多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液；将粘液与所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液混合，机械力分离，得到细胞。在本专利技术中，羧甲基纤维素有吸附粘液的功能，其机理是，羧甲基纤维素分子与粘液中的蛋白分子极性相反，能够与粘液中的蛋白分子形成物理性相异相吸。羧甲基纤维素经多价金属离子交联改性后，具有多孔状立体分子交联结构，该交联结构不仅可以吸附粘液中的蛋白分子，将粘液蛋白长分子链之间进行分离，使细胞成分从粘液包裹状态解离出来，更因为自身带有大量孔洞，能够使细胞在机械力的作用下通过孔洞分离出来，实现细胞的分离提取。因为本专利技术的多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液具有多孔状立体分子结构，只能存在于液相中，而且其多孔状结构特性实现了类似筛取细胞的功能，为便于区别于传统技术，也为简化技术名称，专利技术人将“改性羧甲基纤维素水溶性交联多孔状立体结构溶液”这样的复杂名称，简称为“液相分子筛”。
[0023]本专利技术以使用纯物理方式从粘液液样本中提取细胞成分，多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素不与细胞发生化学反应，因此不会破坏细胞结构。实施例结果表明，采用本专利技术方法进行提取，制得的细胞样本载玻片中，几乎无粘液存在，大量细胞清晰可见。
附图说明
[0024]图1为痰液样本显微镜观察结果；
[0025]图2为实施例1细胞样本显微镜观察结果；
[0026]图3为实施例2细胞样本显微镜观察结果；
[0027]图4为实施例3细胞样本显微镜观察结果；
[0028]图5为实施例4细胞样本显微镜观察结果。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供了一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，包括以下步骤：
[0030]提供多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液；
[0031]将粘液与所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液混合，机械力分离，得到细胞。
[0032]本专利技术提供多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液。在本专利技术中，所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的制备方法，优选包括以下步骤：
[0033]将羧甲基纤维素、水与无机强碱混合，得到碱改性羧甲基纤维素溶液；
[0034]将所述碱改性羧甲基纤维素溶液与冰醋酸混合，得到酸改性羧甲基纤维素溶液；
[0035]将所述酸改性羧甲基纤维素溶液与可溶性多价金属盐混合，进行交联反应，得到多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液。
[0036]本专利技术优选将羧甲基纤维素、水与无机强碱混合，得到碱改性羧甲基纤维素溶液。在本专利技术中，所述羧甲基纤维素的来源优选为市售。在本专利技术中，所述羧甲基纤维素的粘度优选为400～1200mPa.s，更优选为600～1000mPa.s。
[0037]在本专利技术中，所述无机强碱优选为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
[0038]在本专利技术中，所述羧甲基纤维素与水的质量比优选为0.05～0.25:100，更优选为0.1～0.2:100；所述羧甲基纤维素与无机强碱的质量比优选为0.5～1:0.5～1，更优选为1:1。
[0039]在本专利技术中，所述混合的方式优选为先将羧甲基纤维素与水混合，得到羧甲基纤维素溶液，再将羧甲基纤维素溶液与无机强碱混合。在本专利技术中，所述羧甲基纤维素与水混合的温度优选为40～50℃，更优选为45～50℃。
[0040]得到所述碱改性羧甲基纤维素溶液后，本专利技术优选将所述碱改性羧甲基纤维素溶液与冰醋酸混合，得到酸改性羧甲基纤维素溶液。
[0041]在所述混合前，本专利技术优选对所述碱改性羧甲基纤维素溶液进行加热。在本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于液相分子筛从粘液中提取细胞的方法，包括以下步骤：提供多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液；将粘液与所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液混合，机械力分离，得到细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的质量浓度为0.2～0.5％；所述粘液与多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的体积比≤65:100。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液的制备方法，包括以下步骤：将羧甲基纤维素、水与无机强碱混合，得到碱改性羧甲基纤维素溶液；将所述碱改性羧甲基纤维素溶液与冰醋酸混合，得到酸改性羧甲基纤维素溶液；将所述酸改性羧甲基纤维素溶液与可溶性多价金属盐混合，进行交联反应，得到多价金属离子交联改性的羧甲基纤维素溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述可溶性多价金属盐为可溶性镁盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴鹏，马雪松，
申请(专利权)人：灵知蓝诺北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：