用于生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的组合物和方法技术

本文公开了生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的方法和组合物，特别是用于生产流感病毒疫苗。毒疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的组合物和方法
[0001]公开领域
[0002]公开了用于生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的组合物和方法。
[0003]专利技术背景
[0004]病毒疫苗中的抗原可以包含纯化的组分(例如重组病毒蛋白)或经修饰以失去其毒力的病毒片段(例如灭活病毒)。例如，一些流感疫苗含有流感病毒，该流感病毒已经通过烷基化处理，从而改变其病毒核酸或蛋白质来不可逆地灭活。无论抗原组分如何，在将其施用于患者之前，所有疫苗在生产后必须经过广泛的加工和纯化。纯化通常涉及色谱和过滤步骤，以除去抗原生产中生产的不期望的副产物，例如宿主细胞的组分或沿途添加的化学品。
[0005]一些流感疫苗通过灭活活病毒来生产。在从病毒宿主细胞中收获和纯化病毒之前，其可以在无病原体的卵或培养的细胞系中生长。然后病毒可以通过热或化学品灭活，并随后进行分裂步骤，在此期间病毒颗粒被分解以形成较小的亚病毒粒子。根据分裂期间的条件，亚病毒粒子可能无法达到单分散性和/或期望大小，这可能影响下游纯化过程。例如，分裂期间的盐浓度可能提供不充分的静电荷屏蔽，导致亚病毒粒子单元聚集并形成更大的颗粒。然后，这些聚集体可能损害纯化柱和污染过滤器，导致通过量降低、总产量降低和无法制造疫苗。因此，需要改进的过程来提高过滤器通过量和产量，特别是在季节性流感疫苗生产产能提升期间或在大流行期间。
[0006]本专利技术人惊奇地发现分裂的亚病毒粒子的大小可以通过用试剂处理该颗粒来减小，该试剂包含至少一种选自非离子表面活性剂、离子表面活性剂和盐的组分，并且其中该至少一种组分以有效减小亚病毒粒子的颗粒大小的量存在。本公开提供了可以用于生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的方法和组合物。本公开还提供了用于分裂病毒颗粒以形成亚病毒粒子的方法和组合物，并且考虑了它们在流感病毒疫苗生产中的用途。
[0007]如本公开所示，亚病毒粒子的大小与过滤器通过量呈负相关。因此，在病毒疫苗生产期间增加过滤器通过量和产量的策略可能包括通过分裂减小亚病毒粒子颗粒大小，或在整个加工过程中维持理想条件以防止亚病毒粒子聚集。这可以通过本专利技术的方法和组合物实现，包括改变分裂步骤中涉及的试剂(例如盐、表面活性剂)的条件和相对量。

技术实现思路

[0008]本公开提供了用于生产具有减小的颗粒大小的病毒疫苗的方法和组合物以及用于分裂病毒颗粒以形成亚病毒粒子的方法和组合物，并且考虑了它们在流感病毒疫苗生产中的用途。
[0009]本专利技术提供了生产以亚病毒粒子形式配制的病毒疫苗的方法，该方法包括以下步骤：
[0010]a.从收获的细胞培养物中病毒颗粒；
[0011]b.灭活和分裂病毒颗粒以产生亚病毒粒子；和
[0012]c.纯化亚病毒粒子。
[0013]其中步骤b的灭活和分裂病毒颗粒包括用包含非离子表面活性剂和离子表面活性剂的试剂处理病毒颗粒，并且其中非离子表面活性剂和离子表面活性剂以有效减小病毒颗粒的颗粒大小的量存在。
[0014]在一些实施方案中，试剂进一步包含盐，其中盐以有效减小病毒颗粒的颗粒大小的量存在。
[0015]在一些实施方案中，亚病毒粒子的平均流体动力学半径在150nm至350nm的范围内。
[0016]在一些实施方案中，非离子表面活性剂是聚山梨酯80。在一些实施方案中，非离子表面活性剂包含至少约1.0g/L聚山梨酯80，例如至少约1.5g/L、至少约2.0g/L或至少约2.5g/L。在一些实施方案中，离子表面活性剂包括西曲溴铵(CTAB)。在一些实施方案中，离子表面活性剂包含约1.25g/L
‑
3.0g/L CTAB，例如约1.5g/L、约2.0g/L、约2.5g/L或约3.0g/L。在一些实施方案中，盐包括氯化钠(NaCl)。在一些实施方案中，盐包含0
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200mM NaCl，例如约25mM、约50mM、约75mM、约100mM、约125mM、约150mM或约175mM。在一些实施方案中，非离子表面活性剂包括聚山梨酯80，离子表面活性剂包括CTAB，并且盐包括氯化钠NaCl。
[0017]在该方法的一些实施方案中，步骤c中的纯化包括吸附过滤。在一些这样的实施方案中，吸附过滤通过量为至少约50L/m2，例如至少约100L/m2、至少约150L/m2、至少约200L/m2、至少约200L/m2、至少约300L/m2、或至少约350L/m2。在一些其他实施方案中，亚病毒粒子的颗粒大小小于约500nm，例如小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm或小于约150nm。在一些实施方案中，亚病毒粒子的颗粒大小是流体动力学半径。在一些实施方案中，亚病毒粒子的大小通过动态光散射(DLS)测量。
[0018]在该方法的一些实施方案中，病毒颗粒来自流感病毒。在一些实施方案中，病毒颗粒来自流感病毒A株。
[0019]本公开还提供了减小病毒颗粒大小的方法，该方法包括用包含非离子表面活性剂和离子表面活性剂的试剂处理病毒颗粒，并且其中非离子表面活性剂和离子表面活性剂以有效减小病毒颗粒的颗粒大小的量存在。在一些实施方案中，试剂进一步包含盐，其中盐以有效减小病毒颗粒的颗粒大小的量存在。
[0020]在一些实施方案中，非离子表面活性剂包含聚山梨酯80。在一些实施方案中，非离子表面活性剂包含至少约1.0g/L聚山梨酯80，例如至少约1.5g/L、至少约2.0g/L或至少约2.5g/L。在一些实施方案中，离子表面活性剂包括西曲溴铵(CTAB)。在一些实施方案中，离子表面活性剂包含约1.25g/L
‑
3.0g/L CTAB，例如约1.5g/L、约2.0g/L、约2.5g/L或约3.0g/L。在一些实施方案中，盐包括氯化钠(NaCl)。在一些实施方案中，盐包含25
‑
200mM NaCl，例如约50mM、约75mM、约100mM、约125mM、约150mM或约175mM。在一些实施方案中，非离子表面活性剂包括聚山梨酯80，离子表面活性剂包括CTAB，并且盐包括氯化钠NaCl。
[0021]在一些实施方案中，该方法进一步包括通过吸附过滤器过滤经处理的病毒颗粒。在一些实施方案中，吸附过滤器的通过量为至少约50L/m2，例如至少约100L/m2、至少约150L/m2、至少约200L/m2、至少约250L/m2、至少约300L/m2、或至少约350L/m2。在一些实施方案中，病毒颗粒大小小于约500nm，例如小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm或小于约150nm。在一些实施方案中，病毒颗粒大小是病毒颗粒的流体动力学半径。在一些实施方案中，病毒颗粒大小通过动态光散射(DLS)测量。
[0022]在一些实施方案中，病毒颗粒来自流感病毒。在一些实施方案中，病毒颗粒来自流感病毒A株。
[0023]本公开还提供了减小流感病毒纯化过程中病毒颗粒大小的方法，该方法包括
[0024]a.纯化从细胞培养物中收获的病毒颗粒；
[0025]b.灭本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.生产以亚病毒粒子形式配制的病毒疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：a.从收获的细胞培养物中纯化病毒颗粒；b.灭活和分裂所述病毒颗粒以产生亚病毒粒子；和c.纯化所述亚病毒粒子；其中步骤b的灭活和分裂所述病毒颗粒包括用包含非离子表面活性剂和离子表面活性剂的试剂处理所述病毒颗粒，并且其中所述非离子表面活性剂和所述离子表面活性剂以有效减小所述病毒颗粒的颗粒大小的量存在。2.权利要求1所述的方法，其中所述试剂进一步包含盐，其中所述盐以有效减小所述病毒颗粒的颗粒大小的量存在。3.权利要求1
‑
2中任一项所述的方法，其中所述亚病毒粒子的平均流体动力学半径(hydrodynamic radius)在150nm至350nm的范围内。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂是聚山梨酯80。5.权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含至少约1.0g/L聚山梨酯80，例如至少约1.5g/L、至少约2.0g/L或至少约2.5g/L。6.权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中所述离子表面活性剂包含西曲溴铵(cetrimonium bromide，CTAB)。7.权利要求1
‑
6中任一项所述的方法，其中所述离子表面活性剂包含约1.25g/L
ꢀ‑
3.0g/L CTAB，例如约1.5g/L、约2.0g/L、约2.5g/L或约3.0g/L。8.权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中所述盐包含氯化钠(NaCl)。9.权利要求1
‑
8中任一项所述的方法，其中所述盐包含0
‑
200mM NaCl，例如约25mM、约50mM、约75mM、约100mM、约125mM、约150mM或约175mM。10.权利要求1
‑
9中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含聚山梨酯80，所述离子表面活性剂包含CTAB，并且所述盐包含氯化钠NaCl。11.权利要求1
‑
10中任一项所述的方法，其中步骤c中的纯化包括吸附过滤。12.权利要求11所述的方法，其中吸附过滤通过量为至少约50L/m2，例如至少约100L/m2、至少约150L/m2、至少约200L/m2、至少约200L/m2、至少约300L/m2、或至少约350L/m2。13.权利要求1
‑
12中任一项所述的方法，其中所述亚病毒粒子的颗粒大小小于约500nm，例如小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm或小于约150nm。14.权利要求1
‑
13所述的方法，其中所述亚病毒粒子的颗粒大小是所述流体动力学半径。15.权利要求1
‑
14中任一项所述的方法，其中所述亚病毒粒子的大小通过动态光散射(DLS)测量。16.权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒来自流感病毒。17.权利要求1
‑
16中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒来自流感病毒A株。18.权利要求4
‑
17中任一项所述的方法，其中分裂之前聚山梨酯80的浓度为0.3g/L。19.权利要求4
‑
18中任一项所述的方法，其中分裂期间聚山梨酯80的浓度以0
‑
2.2g/L的范围增加。20.权利要求4
‑
19中任一项所述的方法，其中分裂期间聚山梨酯80的浓度为0.3g/L、1.4g/L或2.5g/L。
21.权利要求8
‑
20中任一项所述的方法，其中范围为0
‑
25mM的NaCl的浓度与增加的过滤通过量相关联。22.减小病毒颗粒大小的方法，所述方法包括用包含非离子表面活性剂和离子表面活性剂的试剂处理所述病毒颗粒，并且其中所述非离子表面活性剂和所述离子表面活性剂以有效减小所述病毒颗粒的颗粒大小的量存在。23.权利要求22所述的方法，其中所述试剂进一步包含盐，其中所述盐以有效减小所述病毒颗粒的颗粒大小的量存在。24.权利要求22
‑
23中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含聚山梨酯80。25.权利要求22
‑
24中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含至少约1.0g/L聚山梨酯80，例如至少约1.5g/L、至少约2.0g/L或至少约2.5g/L。26.权利要求22
‑
25中任一项所述的方法，其中所述离子表面活性剂包含西曲溴铵(CTAB)。27.如权利要求22
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26中任一项所述的方法，其中所述离子表面活性剂包含约1.25g/L
ꢀ‑
3.0g/L CTAB，例如约1.5g/L、约2.0g/L、约2.5g/L或约3.0g/L。28.权利要求22
‑
27中任一项所述的方法，其中所述盐包含氯化钠(NaCl)。29.权利要求22
‑
28中任一项所述的方法，其中所述盐包含25
‑
200mM NaCl，例如约50mM、约75mM、约100mM、约125mM、约150mM或约175mM。30.权利要求22
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29中任一项所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含聚山梨酯80，所述离子表面活性剂包含CTAB，并且所述盐包含氯化钠NaCl。31.权利要求22
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30中任一项所述的方法，其进一步包括通过吸附过滤器过滤所述经处理的病毒颗粒。32.权利要求31所述的方法，其中所述吸附过滤器的通过量为至少约50L/m2，例如至少约100L/m2、至少约150L/m2、至少约200L/m2、至少约250L/m2、至少约300L/m2、或至少约350L/m2。33.权利要求22
‑
32中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒大小小于约500nm，例如小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm或小于约150nm。34.权利要求22
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33所述的方法，其中所述病毒颗粒大小是所述病毒颗粒的流体动力学半径。35.权利要求22
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34中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒大小通过动态光散射(DLS)测量。36.权利要求22
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35中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒来自流感病毒。37.权利要求22
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36中任一项所述的方法，其中所述病毒颗粒来自流感病毒A株。38.权利要求24
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37中任一项所述的方法，其中分裂之前聚山梨酯80的浓度为0.3g/L。39.权利要求24
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38中任一项所述的方法，其中分裂期间聚山梨酯80的浓度以0
‑
2.2g/L的范围增加。40.权利要求24
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39中任一项所述的方法，其中分裂期间聚山梨酯80的浓度为0.3g/L、1.4g/L或2.5g/L。41.权利要求28
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40中任一项所述的方法，其中范围为0
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25mM的NaCl的浓度与增加的过
滤通过量相关联。42.减小流感病毒纯化过程中病毒颗粒大小的方法，所述方法包括a.纯化从细胞培养物中收获的病毒颗粒；b.灭活和分裂所述病毒颗粒以产生亚病毒粒子；和c.纯化所述亚病毒粒子；其中步骤b的活化和分裂...

【专利技术属性】
技术研发人员：C达德，M史密斯，D利迪亚德，
申请(专利权)人：塞其里斯英国有限公司，
类型：发明
国别省市：