用于培养VERO细胞的低血清培养基组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及用于培养Vero细胞的低血清培养基组合物，以及Vero细胞培养方法和病毒生产方法，每种方法都使用该组合物。每种方法都使用该组合物。每种方法都使用该组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养VERO细胞的低血清培养基组合物及其用途


[0001]相关申请的交互引用
[0002]本申请基于2019年12月24日提交的韩国专利申请第10
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2019
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0174356号并要求其优先权，该韩国专利申请的公开内容特此通过引用整体并入本文。
[0003]

[0004]本专利技术涉及用于培养Vero细胞的低血清培养基组合物，以及培养Vero细胞的方法和生产病毒的方法，这两种方法都使用该组合物。

技术介绍

[0005]Vero细胞是在制造病毒疫苗中被广泛批准并使用的连续细胞系。Vero细胞最初是从提取自非洲绿猴的肾细胞中分离的，并且已被用于生产灭活脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)、口服脊髓灰质炎病毒活疫苗、狂犬病疫苗等。Vero细胞对各种病毒具有广泛的敏感性，据报道对于致癌性是安全的，并且根据世界卫生组织，不会对人类健康构成威胁，因此，基于Vero细胞的疫苗现可在全球范围内利用。
[0006]在使用动物细胞的常规疫苗生产中，在细胞增殖或用病毒感染细胞来增殖病毒的步骤中，通常使用添加了动物源性材料(例如血清、胰蛋白酶、白蛋白等)的培养基。特别是，血清中含有促进细胞存活和增殖的物质例如营养物、激素、生长因子和细胞因子，在细胞生长中发挥着重要功能，保护细胞免受物理损伤或剪切力，并且促进贴壁细胞在容器上粘附和铺展，因此具有将培养基模拟成类似于体内环境的优点。然而，由于血清的化学组成的复杂性，血清具有缺点，例如难以生产均一的产品并因此为细胞生长提供了不同的变量、单价高、使用血清生产的疫苗被外来病原体感染的风险、以及需要复杂的下游工艺。
[0007]Vero细胞是贴壁细胞，通常在含有10％胎牛血清(FBS)的正常培养基中在附着于微载体上的同时进行培养。FBS中所含的主要组分是白蛋白，已知白蛋白是一种在细胞粘附中起重要作用的蛋白质。然而，由于血清培养基的上述缺点，出现了对减少血清或无血清培养基的需求。

技术实现思路

[0008]【技术问题】
[0009]因此，需要开发一种培养基，所述培养基的组成含有可以帮助细胞粘附并促进细胞生长的补充剂，以代替培养基中血清量的减少。
[0010]【技术解决方案】
[0011]本文所述的一个实施方式提供了一种用于培养Vero细胞的培养基组合物，所述培养基组合物包含1
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7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1
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6g/L的水解物和1
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6mg/L的胰岛素。
[0012]本文所述的另一个实施方式提供了一种培养Vero细胞的方法，所述方法包括在培养基组合物中培养Vero细胞，所述培养基组合物包含1
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7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1
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6g/L的水解物和1
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6mg/L的胰岛素。
[0013]本文所述的另一个实施方式提供了一种生产病毒的方法，所述方法包括在培养基组合物中培养Vero细胞，所述培养基组合物包含1
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7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1
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6g/L的水解物和1
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6mg/L的胰岛素。
附图说明
[0014]图1显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(1号实验)。
[0015]图2显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(2号实验)。
[0016]图3显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(3号实验)。
[0017]图4显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(4号实验)。
[0018]图5显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(5号实验)。
[0019]图6显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(6号实验)。
[0020]图7显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(7号实验)。
[0021]图8显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(7号实验)。
具体实施方式
[0022]根据本专利技术的一个方面，提供了一种用于培养Vero细胞的培养基组合物，所述培养基组合物包含1
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7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1
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6g/L的水解物和1
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6mg/L的胰岛素。
[0023]在一个实施方式中，所述培养基组合物可不含胎牛血清(FBS)。
[0024]在一个实施方式中，所述水解物可以是不含动物组分且不含蛋白质的水解物。
[0025]在一个实施方式中，Vero细胞可以在所述培养基组合物中在附着于微载体上的同时进行培养。
[0026]在一个实施方式中，所述培养基组合物可包括培养附着于微载体上的Vero细胞。
[0027]在一个实施方式中，所述培养基可包括MEM培养基。
[0028]根据本专利技术的另一个方面，提供了一种培养Vero细胞的方法，所述方法包括在上述培养基组合物中培养Vero细胞。
[0029]在一个实施方式中，所述培养可以以10mL至1000L的规模实施。
[0030]根据本专利技术的另一个方面，提供了一种生产病毒的方法，所述方法包括用病毒感染在上述培养基组合物中培养的Vero细胞，并培养用病毒感染的Vero细胞。
[0031]在一个实施方式中，所述用病毒感染的Vero细胞的培养可以以10mL至2000L的规模实施。
[0032]以下，将更详细地描述本专利技术。
[0033]术语“Vero细胞”是指任何Vero细胞系或由其培养或传代的细胞系，包括但不限于遗传修饰的Vero细胞。已知Vero细胞的非限制性实例可包括VERO(ATCC编号CCL
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81)、VERO C1008(ATCC编号CRL
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1586)、VERO 76(ATCC编号CRL
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1587)、Vero
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SF
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ACF(ATCC编号CCL
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81.5)等。
[0034]术语“Vero细胞培养”包括其中Vero细胞生长或维持在存活状态的任何过程。例如，Vero细胞培养不仅包括其中所述细胞生长或增殖的过程，而且还包括其中细胞数量没有显著增加但维持存活状态的过程。
[0035]在一个优选的实施例中，本文所述的Vero细胞可用作病毒疫苗或基于病毒或病毒载体的疗法的底物。在一个实施方式中，可用病毒感染Vero细胞以产生病毒。可以通过所述Vero细胞产生的病毒可以是减毒病毒、重组病毒或溶瘤病毒。可以通过所述Vero细胞产生的病毒可例如但不限于脊髓灰质炎病毒、肠道病毒、传染性法氏囊病病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于培养Vero细胞的培养基组合物，所述培养基组合物包含：1
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7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)；1
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6g/L的水解物；和1
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6mg/L的胰岛素。2.根据权利要求1所述的培养基组合物，其特征在于它不含胎牛血清(FBS)。3.根据权利要求1所述的培养基组合物，其中所述水解物是不含动物组分且不含蛋白质的水解物。4.根据权利要求1所述的培养基组合物，其中所述Vero细胞在附着于微载体上的同时进行培养。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋智惠，金良炫，文秀珍，金民庭，金惠淑，
申请(专利权)人：株式会社LG化学，
类型：发明
国别省市：