一种仿刺参整合素多克隆抗体、抗原蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种仿刺参整合素多克隆抗体、抗原蛋白及其制备方法，属于抗体制备技术领域，本发明专利技术成功得到了仿刺参整合素抗原蛋白，将其免疫小鼠后能够成功得到仿刺参整合素多克隆抗体，克服了现有技术中缺少仿刺参整合素抗体的问题，为仿刺参的生物学研究提供有意义的工具和实验支持。本发明专利技术还成功得到了仿刺参整合素抗原蛋白的编码基因、重组表达载体，通过本发明专利技术提供的制备方法能够制得仿刺参整合素抗原蛋白。本发明专利技术还提供了仿刺参整合素βG基因编码区全序列，填补了相关研究的空白，通过本发明专利技术引物对能够成功扩增出上述仿刺参整合素βG基因编码区全序列，可用于仿刺参整合素的其他相关研究。素的其他相关研究。素的其他相关研究。

【技术实现步骤摘要】
一种仿刺参整合素多克隆抗体、抗原蛋白及其制备方法


[0001]本专利技术涉及抗体制备
，尤其涉及一种仿刺参整合素多克隆抗体、抗原蛋白及其制备方法。

技术介绍

[0002]整合素家族是细胞黏附分子中的一类，属于跨膜糖蛋白，在维持组织细胞结构稳定、参与细胞黏附反应、介导细胞间信号传导等方面发挥重要作用。整合素是由非共价键结合的α和β亚基组成的异质二聚体，每个亚基都是I型跨膜蛋白，具有一个保守的结构，包括一个较大的细胞外多结构域部分、一个单通道跨膜区域和一个通常较短的细胞质尾部，能够与细胞外基质蛋白结合，并与细胞内信号和细胞骨架复合物结合，进行“由外向内”和“由内向外”的双向信号传导，在细胞外基质蛋白和细胞内分子之间进行信息交换。
[0003]哺乳动物中的整合素功能及相关调节机制有关研究已相对成熟，但是目前，针对仿刺参整合素蛋白水平的研究较少，尤其是对仿刺参整合素的抗体制备等研究目前还无相关报道，研究制备仿刺参整合素的抗体，将为仿刺参的生物学研究提供有意义的工具和实验支持。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种仿刺参整合素多克隆抗体、抗原蛋白及其制备方法，解决现有技术中缺少仿刺参整合素抗体的问题。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种仿刺参整合素抗原蛋白，所述仿刺参整合素抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术还提供了编码上述仿刺参整合素抗原蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术还提供了一种仿刺参整合素抗原蛋白的重组表达载体，包括上述述基因和初始载体。
[0009]优选的，所述初始载体为pColdⅡ，所述基因插入初始载体的NdeI和HindIII酶切位点之间。
[0010]本专利技术还提供了一种仿刺参整合素抗原蛋白的制备方法，包含如下步骤：
[0011]将上述重组表达载体转化大肠杆菌、表达，得到仿刺参整合素抗原蛋白。
[0012]本专利技术还提供了一种仿刺参整合素多克隆抗体，所述多克隆抗体是以上述仿刺参整合素抗原蛋白免疫小鼠后得到。
[0013]本专利技术还提供了一种仿刺参整合素βG基因编码区全序列，如SEQ ID NO.3所示。
[0014]本专利技术还提供了一种扩增上述仿刺参整合素βG基因编码区全序列的引物对，所述引物对的序列如SEQ ID NO.4～5所示。
[0015]本专利技术的技术效果和优点：
[0016]本专利技术成功得到了仿刺参整合素抗原蛋白，将其免疫小鼠后能够成功得到仿刺参整合素多克隆抗体，这将为仿刺参的生物学研究提供有意义的工具和实验支持，并且，实验过程中还成功得到了仿刺参整合素抗原蛋白的编码基因、重组表达载体，通过本专利技术提供的制备方法能够制得仿刺参整合素抗原蛋白。本专利技术还提供了仿刺参整合素βG基因编码区全序列，填补了相关研究的空白，通过本专利技术引物对能够成功扩增出上述仿刺参整合素βG基因编码区全序列，可用于仿刺参整合素的其他相关研究。
附图说明
[0017]图1为氨基酸序列比对结果图；
[0018]图2为IPTG诱导重组蛋白表达结果图；
[0019]图3为Elisa检测结果图；
[0020]图4为蛋白免疫印迹检测结果图；
[0021]图5为间接免疫荧光分析结果图。
具体实施方式
[0022]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0023]实施例1扩增仿刺参整合素βG基因编码区全序列
[0024]根据NCBI基因序列GenBank:MRZV01000012.1Apostichopusjaponicus putative integrin beta G subunit isoform X1(仿刺参整合素βG亚基X1)基因编码区及非翻译区(UTR)设计引物对
①
，进行PCR，结果发现仅能扩增出部分片段，5'端起始密码子开始的300多bp无法PCR扩增得到。PCR扩增出的片段测序后与已知序列比对，有连续90bp的碱基插入。
[0025]反转录获得cDNA，应用PCR扩增出部分基因编码区，并利用5'RACE技术获得5'端PCR未能扩增出的序列，进一步根据获得的基因信息设计引物对
②
(合成公司为宝生物(大连)有限公司)，PCR扩增基因编码区全长，获得一条新的仿刺参整合素βG基因编码区全序列(2364bp，核苷酸序列：ATGGATTGTAAACATTCAATATTCTTATTACTGTTACTGTACTGTGCGAGGTCTATACATGCCCAGAACCTAGCTGCTAGCCCTTGCAATGATGCCAAGACATGTGGGGCCTGTATTGTGTTGGACCCGTCCTGTGGCTGGTGCACACAAGGAAACTTCACAGATACCGGCAGTCCTAGATGTGACACCATTCCAAATCTCCGTATGCAAGGATGCAGTGAATATACAAGTCCTAATAGTTCTTATACGATTGATTTGGACAAAGAATTGAGTAATGCAGGAAACACAACCAATTTAGGTGAAGCTGTACAAGTGAAACCACAGGAAATAACTCTGAAATTGAGACCAGGTCAACCTACTCAGTTTACATTTCAAGTGAGGCAGGCAGAAGATTACCCTGTTGATCTTTACTACGTCATGGATCTTTCCAAATCGATGGAGGATGATTTGGTCAATTTGCGGAAAGTTGGAGATGTTCTTGCTGAAGAGATGAGTCAAATCACAAGTGACTTTCGAATGGGTTTTGGATCGTTTGTGGACAAGGTGGTGATGCCATATGTCAGCACCGTACCGGCCAAGCTAGCAGAACCTTGTAGCGGTTGTCAGGCTCCATATGGCTTTAAGAACGAACTCAGTCTGACTGGGGATACAAGTGAATTCTCTAGAACAATTAACCAGCTGCAAGTCTCTGGAAATCTCGATGCCCCTGAAGGGGGCATGGATGCCCTTATGCAAGTTACAGTATGCAAGGAGGCGATTGGTTGGAGGGACATGGCGAGACATTTAGTTATCTTCACCACCGATGCGTCCTTCCATTATGCGGGAGATGGCAAGCTTGGTGGTATCGTTAAACCTAACGATGGAAACTGTTACACCACAGCCCTTGACAATACGTACACCATGTCAAGTGAATTGGACTATCCTTCGATTAGTCAACTGAATGCTGCCATGAGAGATAACAGCATCATTCCAATTTTTGCTGTGACACAGTCTGAATTTTCAGTTTATCAGAATCTTACGGAATACA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种仿刺参整合素抗原蛋白，其特征在于，所述仿刺参整合素抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述的仿刺参整合素抗原蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种仿刺参整合素抗原蛋白的重组表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述的基因和初始载体。4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述初始载体为pColdⅡ，所述基因插入初始载体的NdeI和HindIII酶切位点之间。5.权利要求1所述的仿...

【专利技术属性】
技术研发人员：王际辉，李娜，肖珊，王晗，
申请(专利权)人：东莞理工学院，
类型：发明
国别省市：