滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术通过滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘辅助诊断试剂盒中的应用，以滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物，通过外血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平作为儿童过敏性哮喘的诊断参考指标，数据客观，不易出错；通过将滤泡辅助性T淋巴细胞13的检测试剂在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中实现对血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平的检测，检测过程简单易行，适于推广。推广。推广。

【技术实现步骤摘要】
滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及医学诊断学
，具体为滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]过敏性哮喘(Allergic asthma)是一类由花粉、动物皮屑、尘螨等过敏原引发的以免疫球蛋白E(Immunoglobulin E，IgE)水平升高为主要特征的慢性过敏性疾病。而过敏性哮喘是儿童时期最常见的慢性疾病之一。目前对儿童过敏性哮喘的主要诊断依据，主要从三方面确认：(1)典型的临床表现；(2)气流受限的证据；(3)异常的免疫反应水平。
[0003]其中，典型的临床症状包括：喘息、咳嗽、胸闷、呼吸困难等，以及双肺满布的呼气相哮鸣音。
[0004]气流受限的证据：查体时主要表现是双肺听诊时满布的呼气相哮鸣音，客观依据主要依靠肺通气功能检测，主要用于5岁以上的儿童，其结果的准确性取决于儿童的配合性，有较大的个体差异性，在小于5岁以及5岁以上的不能配合的儿童，有经验的临床医生可以依靠诊断性运用气道舒张剂来判断哮喘患儿的气道受阻的情况。年龄小的患者，因其对于肺通气功能测定的不配合性，其诊断依然依赖儿科医生的临床诊断，存在一定程度的主观性，无可避免的会导致一定程度的诊断不足或过度诊断。
[0005]异常的免疫反应水平：目前临床上用来评估个体免疫反应的方法主要分为两大类，体内实验最常用的为皮肤点刺实验，该实验简单、方便且准确率高，但是该试验结果易受患者皮肤条件、服药史、操作者的水平等影响，此外，该试验可能会引起严重的过敏反应，比如哮喘发作、过敏性休克等，因此过敏性哮喘急性期的患者不宜进行。体外实验包括最早的放射变应原吸附实验，以及目前常用的酶联免疫法测IgE、免疫印迹法等。酶联免疫法测IgE只能定性/半定量结果，方法繁琐，灵敏度低。而目前临床使用的免疫印迹法操作繁复，要获得非常精确的结果十分困难。
[0006]目前来说儿童过敏性哮喘的诊断，较大程度上还是依靠儿科医生的临床诊断，会因为临床医生本身的能力和经验影响诊断结果准确性。

技术实现思路

[0007]为了解决针对目前儿童过敏性哮喘的诊断，较大程度上依赖儿科医生的临床诊断的问题，本专利技术提供了滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其可以用滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物，为儿童过敏性哮喘的诊断提供客观的参考指标，有助于提高诊断准确率，同时检测过程简单易行，检测结果准确，非常适用于临床推广。
[0008]本专利技术的技术方案是这样的：
[0009]滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应
用，其通过检测体外血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13在滤泡辅助性T淋巴细胞中的所占的比例来作为儿童过敏性哮喘的表征。
[0010]其进一步特征在于：
[0011]所述血液样本为外周血。
[0012]其通过将滤泡辅助性T淋巴细胞13的检测试剂在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用实现对滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平的检测。
[0013]所述检测试剂包括荧光抗体,所述荧光抗体具备可供检测的标记。
[0014]所述试剂盒包括：抗体组合物、固定破膜液及固定破膜缓冲液、BFA、PMA和及离子霉素。
[0015]所述抗体组合物包括：CD45RA
‑
AF488、CD3
‑
AF532、CXCR5
‑
APC、CD19
‑
Super Bright 436、TCRγδ
‑
BV480、CD8a
‑
BV570、CD4
‑
BV750、IL
‑4‑
PE
‑
Dazzle 594、IL
‑
13
‑
PE中的一种或两种及两种以上。
[0016]本专利技术通过滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘辅助诊断试剂盒中的应用，以滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物，通过外血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平作为儿童过敏性哮喘的诊断参考指标，数据客观，不易出错；通过将滤泡辅助性T淋巴细胞13的检测试剂在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中实现对血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平的检测，检测过程简单易行，适于推广。
附图说明
[0017]附图1为T
FH
13细胞的圈门策略附图2为T
FH
13细胞占T
FH
细胞中的比例的实施例；
[0018]附图3为T
FH
13细胞与临床指标血清总IgE(TIgE)之间的相关性。
具体实施方式
[0019]滤泡辅助性T淋巴细胞13(以下简称：T
FH
13细胞)是一群新命名的细胞，本专利技术人经研究发现，儿童过敏性哮喘患者外周血中T
FH
13细胞占滤泡辅助性T淋巴细胞(以下简称：T
FH
细胞)的比例显著增高(P＜0.0001)，如附图2所示，且与血清中总IgE水平(r＝0.5162，P＝0.0002)具有一个较强的正相关，具体如图3所示。表明外周血中T
FH
13细胞的比例升高与过敏性哮喘的发病有关，且通过其与IgE之间的相互作用来发挥作用，因此本专利技术将T
FH
13细胞作为一个评价过敏性哮喘儿童体内异常免疫反应水平的免疫细胞标志物。
[0020]图3中，其中P表示统计学差异，表示两组数据之间是否是统计学意义，P＜0.05为具有显著的统计学差异；r为相关系数，表示两组数据之间的相关性。
[0021]本专利技术中，通过检测外周血中T
FH
13细胞在T
FH
细胞中的比例的变化，作为客观指标，用来辅助评估儿童过敏性哮喘，这对于辅助诊断、指导治疗、调节异常的免疫水平、评估靶向性的免疫治疗疗效有着重要的意义。
[0022]本专利技术技术方案中T
FH
13细胞的检测试剂包括荧光抗体,荧光抗体具备可供检测的标记。
[0023]基于检测试剂实现的T
FH
13细胞的检测方法，包括：制备外周血单个核细胞，采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中的T
FH
细胞表达水平，在T
FH
细胞中得到T
FH
13细胞；得到的T
FH
13在T
FH
细胞中的比例即为检测结果。具体包括以下步骤。
[0024]使用EDTA抗凝管收集外周血约4mL，Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs(外周血单个核细胞)，用含10％DMSO的FBS将PBMCs冻存备用。按表1配制检测过程所需的液体，备用。
[0025]表1：试剂准备
[0026][0027]步骤一，记录光谱数据。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其通过检测体外血液样本中的滤泡辅助性T淋巴细胞13在滤泡辅助性T淋巴细胞中的所占的比例来作为儿童过敏性哮喘的表征。2.根据权利要求1所述滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其特征在于：所述血液样本为外周血。3.根据权利要求1所述滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其特征在于：其通过将滤泡辅助性T淋巴细胞13的检测试剂在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用实现对滤泡辅助性T淋巴细胞13的水平的检测。4.根据权利要求3所述滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其特征在于：所述检测试剂包括荧光抗体,所述荧光抗体具备可供检测的标记。5.根据权利要求3所述滤泡辅助性T淋巴细胞13作为诊断标记物在制备儿童过敏性哮喘试剂盒中的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚芳，周鹏程，童晓，管超姣，季拓，
申请(专利权)人：江南大学附属医院，
类型：发明
国别省市：