基因重组海参肽rAj-HRP在抗肿瘤药物中的应用制造技术

本申请属于生物技术领域，具体涉及一种基因重组海参肽rAj

【技术实现步骤摘要】
基因重组海参肽rAj
‑
HRP在抗肿瘤药物中的应用


[0001]本申请属于生物
，具体涉及基因重组海参肽rAj
‑
HRP的制备及其通过抑制肿瘤细胞EGFR细胞信号通路在抗肿瘤药物制备中的应用。

技术介绍

[0002]癌症目前已经成为全球性第一大致死因素，到2020年每年死于癌症的人数超过1200万人，到2030年，预计每年新发癌症病例数将增加到2360万。而就癌症的发病情况来看，肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌最为多见，约占全部恶性肿瘤的70％
‑
80％。因此，寻找并研发安全强效的抗肿瘤药物已刻不容缓。
[0003]目前，抗癌药物分为三大类别，包括：常规化疗药物、激素治疗药物、分子靶向药物。在这三大类抗癌药物中，化疗药物和激素治疗药物因其毒副作用强而限制了其治疗效果，而分子靶向药物则因其疗效好、副作用小的优势成为抗肿瘤药物市场的发展趋势，其已占全球抗肿瘤药物市场的60％份额。但不容忽视的是，靶向药物大多数为单抗类产品，具有拮抗肿瘤类型单一、研发代价高、生产成本高、销售价格高的特点，这严重限制了患者的广泛使用。因此，寻找新型抗癌药物成为全球相关领域科研工作者的神圣使命。由于陆地资源有限，向海洋要药俨然成为寻找新型抗肿瘤药物的热点。由于本课题组一直致力于海洋生物活性研究，因此我们把抗癌药物寻找的目光聚焦到了仿刺参(Apostichopus japoicus)这一物种。
[0004]仿刺参属棘皮动物门、海参纲、楯手目、刺参科，是辽宁地区重要的海珍品经济养殖品种，关于其活性成分的研究还处于起步阶段，在抗肿瘤研究领域更是一片空白。
[0005]有鉴于此，提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本申请的第一目的在于提供一种全新重组海参肽rAj
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HRP；
[0007]本申请的第二目的在于提供一种所述重组海参肽rAj
‑
HRP的制备方法；
[0008]本申请的第三目的在于提供所述重组海参肽rAj
‑
HRP在抗肿瘤中的应用；
[0009]本申请的第四目的在于提供所述重组海参肽rAj
‑
HRP在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0010]为实现上述目的，本申请具体提供如下技术方案：
[0011]本申请首先提供一种重组海参肽，其氨基酸序列为如下任一：
[0012]1)包含SEQ ID NO.1所示序列；
[0013]2)满足氨基酸保守替代的基础上，与SEQ ID NO.2具有至少80％以上同源性；
[0014]优选的，至少80％、90％、95％或99％的序列同源性。
[0015]3)如SEQ ID NO.1所示序列。
[0016]优选的，所述重组海参肽是分离的，或合成的。
[0017]本申请还提供一种分离的核苷酸序列，其编码上述任一所述的重组海参肽。
[0018]优选的，所述核苷酸序列入SEQ ID NO.1所示。
[0019]更优选的，所述重组海参肽是分离的，或合成的。
[0020]本申请还提供一种重组序列，所述重组序列连接有上述任一所述的重组海参肽或核苷酸序列。
[0021]本申请还提供一种组合物，包含上述任一所述的重组海参肽或核苷酸序列。
[0022]本申请还提供一种重组载体，包括上述任一所述的核苷酸序列。
[0023]进一步的，所述载体为克隆载体或表达载体。
[0024]更进一步的，所述表达载体为真核表达载体或原核表达载体。
[0025]本申请还提供一种重组细胞，所述细胞包含上述任一所述的重组载体。
[0026]本申请还提供上述重组海参肽的制备方法，利用上述任一所述重组载体进行表达的步骤。
[0027]优选的，进一步包括分离和纯化的步骤。
[0028]本申请还提供一种上述任一所述重组海参肽的如下任一应用：
[0029]1)在抗肿瘤活性中的应用；
[0030]2)在抗肿瘤细胞增殖、迁移或侵染中的应用；
[0031]3)在制备抗肿瘤药物中的应用，优选的，在制备以EGFR为靶点的抗肿瘤药物中的应用；
[0032]4)在筛选肿瘤抑制中的应用；优选的以EGFR为靶点的肿瘤抑制剂中的应用；
[0033]5)在抗肿瘤活性评价中的应用。
[0034]本申请还提供一种上述任一所述核苷酸的如下任一应用：
[0035]1)在抗肿瘤活性中的应用；
[0036]2)在抗肿瘤细胞增殖、迁移或侵染中的应用；
[0037]3)在制备抗肿瘤药物中的应用，优选的，在制备以EGFR为靶点的抗肿瘤药物中的应用；
[0038]4)在筛选肿瘤抑制中的应用；优选的以EGFR为靶点的肿瘤抑制剂中的应用；
[0039]5)在抗肿瘤活性评价中的应用。
[0040]本申请还提供一种在体外或体内抑制肿瘤细胞的方法，包括给予或过表达上述任一所述重组海参肽的步骤。
[0041]本申请的有益技术效果：
[0042]本申请从仿刺参中首次分离出一种全新的重组海参肽rAj
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HRP，实验证实rAj
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HRP具有体内与体外剂量依赖性地抑制肿瘤细胞的功能，且作用靶点为EGFR，rAj
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HRP有望应用于EGFR为靶点的抗肿瘤药物制备领域。
附图说明
[0043]图1、纯化rAj
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HRP肽的Tricine SDS
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PAGE电泳图。其中，泳道1：rAj
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HRP肽；泳道2：小分子蛋白Marker。
[0044]图2、CCK法检测rAj
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HRP对HCT116细胞增殖的抑制结果。其中，(A)结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用；横坐标为rAj
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HRP的浓度(μM)，纵坐标为HCT116细胞增殖抑制率(％)；(B)胃癌MGC803增殖的抑制作用，横坐标为rAj
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HRP的浓度(μM)，纵坐标为MGC803细胞增殖
抑制率(％)；(C)大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用，横坐标为rAj
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HRP的浓度(μM)，纵坐标为C6细胞增殖抑制率(％)。
[0045]图3、rAj
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HRP对移植瘤体积的影响结果(n＝5)，横坐标为实验组组别，纵坐标为肿瘤体积。其中，(A)rAj
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HRP对HCT116移植瘤裸鼠肿瘤体积的影响；(B)rAj
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HRP对MGC803移植瘤裸鼠肿瘤体积的影响；(C)rAj
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HRP对C6移植瘤裸鼠肿瘤体积的影响。
[0046]图4、rAj
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HRP对HCT116移植瘤裸鼠肿瘤重量的影响结果(n＝5，与模型组数据的显著性差异用星号表示，*p&lt本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组海参肽，其特征在于，其氨基酸序列为如下任一：1)包含SEQ ID NO.2所示序列；2)满足氨基酸保守替代基础上，与SEQ ID NO.2具有至少90％以上同源性；优选的，所述重组海参肽是分离的，或合成的。2.一种核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1所述的重组海参肽；优选的，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.一种重组序列，其特征在于，其连接有权利要求1或2任一所述重组海参肽序列或核苷酸序列。4.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1
‑
2任一所述的重组海参肽或核苷酸。5.一种重组载体，其特征在于，包括权利要求2所述的核苷酸序列；优选的，所述载体为克隆载体或表达载体；更优选的，所述表达载体为真核表达载体或原核表达载体。6.一种重组细胞，其特征在于，包含权利要求要求5所述的重组载体。7.权利要求1所述重组海参肽的制备方法，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：周遵春，王继红，蒋经伟，吕莉，肖蓉，孙红娟，陈仲，潘泳嘉，姜苹哲，
申请(专利权)人：辽宁省海洋水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：