氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物在制备治疗胃癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物(化合物14

【技术实现步骤摘要】
氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物在制备治疗胃癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，特别涉及一种氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物(化合物14
‑5‑
18)在制备治疗胃癌细胞侵袭转移药物中的应用。

技术介绍

[0002]胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，已成为我国第三大癌症死亡原因。虽然目前已采取手术、放疗、化疗、生物治疗等综合治疗手段，但其5年生存率仍较低，部分原因是胃癌细胞的快速转移。采用奥沙利铂、伊立替康等药物治疗晚期胃癌的方案都具有较好的耐受性，且疗效显著，但是大多伴有严重的毒副作用，尤其是Ⅲ、Ⅳ级的外周神经损伤、呕吐以及腹泻。为此，迫切需要针对其转移的更有效的治疗方法。
[0003]G蛋白偶联受体激酶相互作用(G protein
‑
coupled receptor(GPCR)
‑
kinase interacting protein,GIT)蛋白，包括GIT1和GIT2，是ADP核糖化因子(ADP
‑
ribosylation factor,Arf)小分子GTP结合蛋白的GTP酶激活蛋白(GTPase activing protein,GAP)。P21激活的激酶相互作用交换因子(Pak
‑
interactive exchange factor,Pix)蛋白，包括α
‑
Pix和β
‑
Pix，是激活Rho家族小分子GTP结合蛋白家族成员Rac1和Cdc42的鸟嘌呤核苷酸交换因子(Guanine nucleotide exchange factor,GEF)
[0004]目前，众多研究证据表明，GIT1/β
‑
Pix复合物与等多种恶性肿瘤的侵袭转移过程高度相关。在仓鼠卵巢细胞中，GIT/PIX复合物被接头蛋白Paxlin招募到焦点黏附中，并通过激活下游的Rho GTP酶GTP
‑
Rac1/Cdc42等参与细胞迁移，促进肌动蛋白聚合和伪足的形成，产生推动细胞前进的动力，导致细胞定向迁移。此外，敲降GIT1能够抑制高转移乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，以及裸鼠尾静脉肺转移模型中癌细胞的侵袭转移；在胶质母细胞瘤细胞中，敲低β
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Pix或α
‑
Pix会增加螯合泛素连接酶Cbl活性，减少迁移和侵袭，降低致瘤性。此外，有研究表明，GIT1/β
‑
Pix复合物可被肿瘤转移抑制因子N
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α
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乙酰转移酶10蛋白(N
‑
α
‑
acetyltransferase 10protein，Naa10p)抑制，降低Cdc42/Rac1的激活，从而抑制人肺腺癌细胞的侵袭转移，提示GIT1/β
‑
Pix蛋白复合物可能是肿瘤侵袭转移的促进因子。因此，研究GIT1与β
‑
Pix相互作用的分子机制和在肿瘤侵袭转移中的功能有利于发现癌症治疗的新靶点和开发肿瘤治疗的新型药物。然而，尚未报道针对这种具有挑战性的蛋白
‑
蛋白相互作用的小分子实体。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物在制备治疗胃癌药物中的应用，该药物通过抑制GIT1/β
‑
Pix复合物的形成，而抑制胃癌细胞侵袭转移。
[0006]本专利技术的技术方案是：
[0007]氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物在制备治疗胃癌药物中的应用。
[0008]所述药物为抑制剂。
[0009]所述抑制剂抑制胃癌细胞的侵袭转移。
[0010]所述抑制剂抑制胃癌细胞GIT1与β
‑
Pix的相互作用。
[0011]所述化合物14
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18的结构式为：
[0012][0013]所述药物以口服方式给药。
[0014]所述药物用药量为每公斤每天10～30mg。
[0015]本专利技术所述应用，申请人采用体外和体内模型，系统地研究了化合物14
‑5‑
18对胃癌侵袭转移的潜在抑制作用，通过实验验证，化合物14
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18通过抑制GIT1与β
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Pix的相互作用，而抑制胃癌的侵袭转移。
附图说明
[0016]图1为6种氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物结构式；
[0017]图2为FP实验检测6种氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物对GIT1/β
‑
Pix抑制活性；
[0018]图3为FP实验检测化合物14
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18K
i
值；
[0019]图4为免疫共沉淀分析化合物14
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18对GIT1/β
‑
Pix相互作用的抑制效果；
[0020]图5为检测GIT1在胃上皮细胞(GES
‑
01)和胃癌细胞系(MGC803、MKN45、SGC7901、AGS、BGC823)的表达水平；
[0021]图6为Transwell分析化合物14
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18对胃癌细胞侵袭转移能力的影响；
[0022]图7为动物实验分析化合物14
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18对胃癌细胞侵袭转移能力的影响；
[0023]图8为动物实验终点小鼠肺组织的H&E染色；
[0024]图9为免疫共沉淀分析GIT1上β
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Pix结合位点突变对GIT1/β
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Pix相互作用的影响；
[0025]图10为Transwell分析GIT1上β
‑
Pix结合位点突变后化合物14
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18对胃癌细胞侵袭转移抑制作用的变化。
具体实施方式
[0026]一.试剂
[0027]DMEM培养基、胰酶
‑
EDTA、青霉素和链霉素购自Thermo(美国)；
[0028]胎牛血清(FBS)购自Lonsera(乌拉圭)；
[0029]细胞裂解液RIPA、蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂、4x Laemmli Sample Buffer、BCA试剂盒、Tween
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80购自Beyotime(中国)；
[0030]HA、FLAG抗体购自Cell Signaling Technology(美国)；
[0031]抗HA琼脂糖单抗、抗FLAG琼脂糖单抗、DMSO购自Sigma(美国)；
[0032]FITC
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β
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Pix及β
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Pix多肽购自强耀生物(中国)；
[0033]0.8μm孔大小的底部过滤小室、Matrigel基质胶购自Corning(美国)；
[0034]PV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.氧化吲哚螺双环[2,2,1]庚烷类化合物在制备治疗胃癌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物为GIT1/β
‑
Pix抑制剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述抑制剂抑制胃癌细胞的侵袭转移。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈应春，杜玮，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：