一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法技术

本发明专利技术公开了一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法。是将新鲜花药用固定液固定后，然后打开花药取花粉，用磷酸缓冲液冲洗，再脱水获得扫描电子显微镜样品，其特征在于，是将磷酸缓冲液冲洗的花粉经部分脱水后用乙醇水溶液超声波冲洗若干次，再恒温加热，然后换成乙醇水溶液，超声波清洗若干次，再进行后续脱水，获得预处理好的扫描电子显微镜样品。本发明专利技术的既能保证花粉形态结构不变型和外壁纹饰不被破坏，还能将分泌物清除干净。给分类学家提供优质的图片，对分类学上有重要的意义。对分类学上有重要的意义。对分类学上有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法

：
[0001]本专利技术属于电镜领域，具体涉及一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法。

技术介绍
：
[0002]植物花粉是种子植物特有的结构,花粉纹饰在分类学上有很重要的意义。但有些植物花粉壁分泌粘液将花粉纹饰全部覆盖，扫描电子显微镜下完全看不到真实花粉形态结构。给分类学家带来很多困扰。由于花粉是新鲜花粉外泌粘液会把花粉全部包裹住，要想处理这些分泌物对于新鲜植物花粉处理是一项很困难实验，首先要保证花粉形态结构不变型和外壁纹饰不被破坏，还要将分泌物清除干净。目前没有一种快速清洗新鲜花粉分泌物有效方法。

技术实现思路
：
[0003]本专利技术的目的是提供一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法。
[0004]本专利技术的快速清洗新鲜花粉分泌物方法，是将新鲜花药用固定液固定后，然后打开花药取花粉，用磷酸缓冲液冲洗，再脱水获得扫描电子显微镜样品，其特征在于，是将磷酸缓冲液冲洗的花粉经部分脱水后用乙醇水溶液超声波清洗若干次，再恒温加热，然后换成乙醇水溶液，超声波清洗若干次，再进行后续脱水，获得预处理好的扫描电子显微镜样品。
[0005]优选，是将磷酸缓冲液冲洗的花粉经体积分数30％、50％乙醇水溶液脱水后，再加入体积分数70％乙醇水溶液进行超声波清洗三次，第一次10min，第二次5min，第三次3min，每次离心倒掉上清液，加入新的体积分数70％乙醇水溶液，然后50℃加热2h，再超声波清洗2次，每次3min，每次离心倒掉上清液加入新的体积分数70％乙醇水溶液，再经体积分数80％乙醇水溶液、体积分数90％乙醇水溶液、100％乙醇脱水，获得预处理好的扫描电子显微镜样品。
[0006]优选，所述的将新鲜花药用固定液固定是取新鲜花药放入FAA固定液中，抽气再固定12h以上。
[0007]优选，所述的再加入体积分数70％乙醇水溶液进行超声波清洗三次，时间不同。
[0008]优选，所述的加入新体积分数70％乙醇水溶液需要加热。
[0009]优选，所述的50℃加热2h是恒温金属浴50℃加热2h。
[0010]优选，所述的加热后，再次加入新的体积分数70％乙醇水溶液超声波清洗2次。
[0011]所述的用磷酸缓冲液冲洗是用0.1M磷酸缓冲液进行冲洗三次，每次20min，每次离心5min，5000rpm。
[0012]所述的将磷酸缓冲液冲洗的花粉经体积分数30％、50％乙醇水溶液脱水是体积分数30％、50％乙醇水溶液脱水，每次10min。
[0013]所述的再经体积分数80％乙醇水溶液、体积分数90％乙醇水溶液、100％乙醇脱水是再经体积分数80％乙醇水溶液每次10min、体积分数90％乙醇水溶液每次10min、100％乙
醇脱水5次每次10min。
[0014]本专利技术的既能保证花粉形态结构不变型和外壁纹饰不被破坏，还能将分泌物清除干净。给分类学家提供优质的图片，对分类学上有重要的意义。
附图说明：
[0015]图1是光叶地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，未处理直接涂台；
[0016]图2是光叶地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，常规方法；
[0017]图3是光叶地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，本专利技术的方法；
[0018]图4是银毛闭鞘姜花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，未处理直接涂台；
[0019]图5是银毛闭鞘姜花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，常规方法；
[0020]图6是银毛闭鞘姜花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，本专利技术的方法；
[0021]图7是莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，未处理直接涂台；
[0022]图8是莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，常规方法；
[0023]图9是莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，本专利技术的方法；
[0024]图10是云南地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，未处理直接涂台；
[0025]图11是云南地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，常规方法；
[0026]图12是云南地莴笋花花粉形态结构的扫描件电子显微镜图，本专利技术的方法；。
具体实施方式
[0027]以下实施例为本专利技术的一些举例，不应看作是对本专利技术的限定。
[0028]实施例1：
[0029]选择4种姜科植物花粉外壁分泌粘液最多，无法看清楚纹饰为试验材料见表1。
[0030]表1实验材料名称及采集地
[0031][0032][0033]一、野外采集新鲜花药放入FAA固定液中(由于样品在野外采集时间较长不能用常规做扫描电子显微镜固定液戊二醛固定，主要原因是戊二醛要求4℃冰箱保存，野外采集样品达不到要求，所以选择FAA固定固定液。
[0034]二、以下采集后在实验室操作完成步骤：
[0035]1.取新鲜花药放入新FAA固定液中，抽气再固定12h。
[0036]2.将花药打开取花粉放置1.5ml离心管中。用0.1M磷酸缓冲液进行冲洗三次(每次20min)，每次离心5min，5000rpm。
[0037]3.乙醇脱水30％、50％每次10min，离心5min，5000rpm，倒掉上清液加入70％乙醇。
[0038]4.再70％乙醇进行超声波清洗三次，第一次10min；第二次5min；第三次3min。每次离心(5000rpm)倒掉上清液，加入新的70％乙醇。
[0039]5.用恒温金属浴50℃加热2h。
[0040]6.超声波清洗二次，每次3min，每次离心(5000rpm)倒掉上清液，加入新的70％乙醇。
[0041]7.继续系列脱水80％乙醇10min、90％乙醇10min，100％乙醇5次每次10min。转入专用样品蓝中。
[0042]8.临界点干燥，涂台。
[0043]9.离子溅射仪进行镀铂金10nm。
[0044]10.扫描电镜上机观察并拍照。
[0045]三、所用仪器弄号：
[0046]1.超声波：WIGGENS 59HZ 250W
[0047]2.离心机：eppendorf Centrifuge 5425
[0048]3.恒温金属浴：JS
‑
400A
[0049]3.临界点干燥仪：LEICAEM CPD300
[0050]4.离子溅射仪：LEICAEMACE600
[0051]5.扫描电子显微镜：JEOL JSM
‑
6360LV
[0052]四、专利技术此方法主要是步骤4、5、6步骤，其它步骤为常规方法。
[0053]1.步骤4超声波清洗三次每次时间不同，第一次10min时间是为了把分泌粘液超声清除一些。第二次、第三次逐渐缩短时间是为了防止超声过度破坏花粉外壁结构。重复更换70％乙醇是把清洗废液倒掉，让新的70％乙醇更好清洗。在70％乙醇超声效果最好，因为70％乙醇对细胞组织有一定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速清洗新鲜花粉分泌物方法，是将新鲜花药用固定液固定后，然后打开花药取花粉，用磷酸缓冲液清洗，再脱水获得扫描电子显微镜样品，其特征在于，是将磷酸缓冲液清洗的花粉经部分脱水后用乙醇水溶液超声波清洗若干次，再恒温加热，然后换成乙醇水溶液，超声波清洗若干次，再进行后续脱水，获得预处理好的扫描电子显微镜样品。2.根据权利要求1所述的快速清洗新鲜花粉分泌物方法，其特征在于，是将磷酸缓冲液清洗的花粉经体积分数30％、50％乙醇水溶液脱水后，再加入体积分数70％乙醇水溶液进行超声波清洗三次，第一次10min，第二次5min，第三次3min，每次离心倒掉上清液，加入新的体积分数70％乙醇水溶液，然后50℃加热2h，再超声波清洗2次，每次3min，每次离心倒掉上清液加入新的体积分数70％乙醇水溶液，按常规方法再经体积分数80％乙醇水溶液、体积分数90％乙醇水溶液、100％乙醇脱水，临界点干燥获得预处理好的扫描电子显微镜样品。3.根据权利要求1或2所述的快速清洗新鲜花粉分泌物方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓颖，陈娟，戴光义，严佳威，邓汝芳，潘小平，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：