基于水痘-带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途制造技术

本申请公开了一种基于水痘

【技术实现步骤摘要】
基于水痘
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带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途


[0001]本申请涉及生物制药领域，具体涉及一种基于水痘
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带状疱疹病毒的重组表达载体、重组病毒及用途。

技术介绍

[0002]水痘
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带状疱疹病毒(Varicella
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Zoster Virus,VZV)属于疱疹病毒，其是一种直径为150纳米至200纳米的双链DNA病毒，呈球形，完整病毒包括核心、衣壳、内膜以及包膜。VZV初次感染时表现为水痘症状，即使治好水痘，VZV仍可终生潜伏于人体的颅神经和背根神经节，待人体免疫力低下时可被重新激活引起复发性感染，表现为带状疱疹。有研究发现，带状疱疹的终生发病风险为25％至30％，80岁后风险上升至50％。VZV引起的疾病及其相关后遗症(如带状疱疹愈后神经痛)已成为公共卫生领域不可忽视的重要问题之一。
[0003]目前，通常采用抗病毒药物(例如阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦等)治疗水痘和带状疱疹，但不能预防VZV感染，接种疫苗仍然是预防/控制水痘和带状疱疹最有效和最可靠的措施，但是当前尚无能够同时预防水痘和带状疱疹的双重功效疫苗上市。现上市的水痘疫苗均为减毒活疫苗(例如减毒Oka疫苗)，对带状疱疹无预防效果或预防效果不理想，并且水痘减毒活疫苗可能会给接种者带来多重风险，例如引发罕见的严重并发症、导致免疫受损个体感染等，此外，部分接种者会出现潜伏的VZV被重新激活而罹患带状疱疹的问题。
[0004]现上市的带状疱疹疫苗较少并均具有佐剂成分，主要为Merck公司的Zostavax和GSK公司的Shingrix，中国国家药品监督管理局于2019年批准了Shingrix的进口注册申请，填补了国内带状疱疹疫苗的空白。Zostava具有不适用于60岁以上人群、预防效果一般的缺点，并且Zostava无法用于预防水痘感染，有研究发现，接种Zostava后的五年内对带状疱疹的预防保护率约为50％，接种Zostava后的八年对带状疱疹的预防保护率不再具有统计学意义。Shingrix适用于50岁以上人群，并且对带状疱疹的预防保护率可达90％，可降低带状疱疹愈后神经痛的风险，但Shingrix使用的佐剂为GSK公司的AS01，具有反应原性，不适宜作为水痘疫苗而用于儿童。
[0005]因此，迫切需要研发一种能够同时预防水痘和带状疱疹的双重功效疫苗，并且具有安全性高、免疫效果理想、副作用低、无潜伏风险等优点。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足之处，本申请提供了一种基于水痘
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带状疱疹病毒的重组表达载体、重组腺病毒及用途。
[0007]本申请的技术方案如下：
[0008]第一方面，本申请提供了一种重组表达载体，用于表达水痘
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带状疱疹病毒的gE糖蛋白全长或gE糖蛋白的部分片段，以及IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段，所述重组表达载体包括载体以及装载于所述载体上的核酸分子，所述核酸分子包括：
[0009]第一核苷酸序列，用于编码所述gE糖蛋白全长或gE糖蛋白的部分片段；
[0010]第二核苷酸序列，用于编码所述IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段；以及
[0011]连接序列，用于连接所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列，包括用于编码自剪切多肽的第三核苷酸序列和/或用作内部核糖体进入位点的第四核苷酸序列；
[0012]其中，载体为腺病毒、安卡拉牛痘病毒或水泡性口炎病毒。
[0013]可选的，所述第一核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，或者所述第一核苷酸序列为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有不低于80％的同源性的核苷酸序列。
[0014]可选的，所述第二核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，或者所述第二核苷酸序列为与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有不低于80％的同源性的核苷酸序列。
[0015]可选的，所述自剪切多肽为2A肽，2A肽例如选自P2A、E2A、F2A或T2A。
[0016]可选的，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示或者如SEQ ID NO.12所示。
[0017]可选的，所述载体为基因组中缺失E1编码区和E3编码区的AdC68型黑猩猩腺病毒。
[0018]进一步地，所述载体为基因组中缺失E1编码区和E3编码区的AdC68型黑猩猩腺病毒。
[0019]可选的，所述第一核苷酸序列与所述第二核苷酸序列通过同一个表达框表达。
[0020]可选的，所述第一核苷酸序列与所述第二核苷酸序列通过不同的表达框表达。
[0021]第二方面，本申请提供了一种重组病毒，所述重组病毒是将如第一方面中任意一种所述的重组表达载体转染病毒包装细胞，然后经细胞培养制备而成。
[0022]第三方面，本申请提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如第一方面中任意一种所述的重组表达载体或如第二方面中所述的重组病毒。
[0023]可选的，所述药物组合物还包括药学上可接受的佐剂和/或辅料，所述药物组合物为适用于肌内、皮下或粘膜施用的剂型。
[0024]第四方面，本申请提供了如第一方面中任意一种所述的重组表达载体、或如第二方面中所述的重组病毒、或如第三方面中任意一种所述的药物组合物的用途，所述重组表达载体、所述重组病毒或所述药物组合物用于制备治疗或预防水痘
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带状疱疹病毒的疫苗和/或药物。
[0025]有益效果：本申请提供了一种基于水痘
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带状疱疹病毒的重组表达载体、重组腺病毒及用途，其中，重组表达载体的载体为病毒载体，装载于载体上的核酸分子包括用于编码gE糖蛋白全长或gE糖蛋白的部分片段的第一核苷酸序列、用于编码IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段的第二核苷酸序列，以及用于连接第一核苷酸序列和第二核苷酸序列的连接序列，连接序列包括用于编码自剪切多肽的第三核苷酸序列和/或用作内部核糖体进入位点的第四核苷酸序列。所述重组表达载体通过表达系统表达后能产生独立的gE糖蛋白或gE糖蛋白的部分片段，以及IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段。
[0026]所述重组病毒是将所述重组表达载体转染病毒包装细胞，然后经细胞培养制备而成，所述重组病毒可以用于制备治疗或预防水痘
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带状疱疹病毒的疫苗和/或药物，以重组病毒为重组腺病毒为例，将所述重组腺病毒施用于受试者能够引起较强的体液免疫反应以及广泛的CD4+T细胞和CD8+T细胞免疫，从而产生高滴度的VZV抗体，采用所述重组腺病毒制备的疫苗无需添加佐剂，无需使用特殊仪器/设备(例如基因枪)即可进行接种，能够有效预防水痘和带状疱疹，具有安全性高、适用人群更广、副作用小、无潜伏风险的优点。
[0027]实验发现，经有效量的重组病毒免疫的试验小鼠血清特异性IgG抗体滴度是经有效量的市售水痘减毒疫苗免疫的试验小鼠血清特异性IgG抗体滴度的2.5倍至3.1倍；经有效量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于水痘
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带状疱疹病毒的重组表达载体，其特征在于，用于表达水痘
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带状疱疹病毒的gE糖蛋白全长或gE糖蛋白的部分片段，以及IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段，所述重组表达载体包括载体以及装载于所述载体上的核酸分子，所述核酸分子包括：第一核苷酸序列，用于编码所述gE糖蛋白全长或gE糖蛋白的部分片段；第二核苷酸序列，用于编码所述IE63蛋白全长或IE63蛋白的部分片段；以及连接序列，用于连接所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列，包括用于编码自剪切多肽的第三核苷酸序列和/或用作内部核糖体进入位点的第四核苷酸序列；其中，载体为腺病毒、安卡拉牛痘病毒或水泡性口炎病毒。2.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述第一核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，或者所述第一核苷酸序列为与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有不低于80％的同源性的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述第二核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，或者所述第二核苷酸序列为与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有不低于80％的同源性的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述自剪切多肽为2A肽。5.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：慕婷，徐龙，赵萍，吴月，谢亮，王申，米歇尔，
申请(专利权)人：武汉博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：