一种短乳杆菌248及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种短乳杆菌248及其应用，所述短乳杆菌248其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23167；所述短乳杆菌248处理的青贮饲料有氧稳定性较好，可降低pH，耐冻融性和耐酸性佳，能快速产酸以实现较低pH的效果，对环境的适应性佳，提高了青贮发酵品质，可达到长期保存青贮饲料的效果；在青贮开窖时，采用所述短乳杆菌248处理的青贮饲料可避免二次发酵。短乳杆菌248处理的青贮饲料可避免二次发酵。短乳杆菌248处理的青贮饲料可避免二次发酵。

【技术实现步骤摘要】
248混合，进行发酵，得到所述青贮饲料。
[0021]优选地，所述青贮原料为燕麦。
[0022]优选地，所述发酵的发酵温度为
‑
5℃～37℃。
[0023]优选地，所述发酵的发酵温度为
‑
5℃～20℃。
[0024]优选地，所述发酵的发酵温度为20℃。
[0025]优选地，所述发酵的pH值条件为pH3～6。
[0026]优选地，所述发酵的时间60天。
[0027]优选地，所述发酵为固体厌氧。
[0028]本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
[0029]本专利技术提供了一种短乳杆菌248及其应用；所述短乳杆菌248处理的青贮饲料有氧稳定性较好，可降低pH，有效的抑制有害杂菌的生长或产生，可降低干物质损失，可降低氨态氮/总氮比值，增加了干物质含量、乳酸含量和粗蛋白含量，有氧变败时间长，具有耐冻融性和耐酸性，对环境的适应性佳，提高了青贮发酵品质，达到长期保存青贮饲料的效果。
[0030]在青贮开窖时，采用本专利技术短乳杆菌248处理的青贮饲料可避免二次发酵。
[0031]本专利技术短乳杆菌248可作为高寒地区(例如：青藏高原地区)燕麦青贮饲料的候选菌株，应用于制备抑菌制剂、制备青贮饲料添加剂、制备青贮饲料，能发酵出品质优良并可以长期贮存的青贮饲料。
附图说明
[0032]图1 37℃条件下乳酸菌生长曲线；
[0033]图2 20/
‑
5℃条件下乳酸菌生长曲线；
[0034]图3 37℃条件下乳酸菌产酸曲线；
[0035]图4 20/
‑
5℃条件下乳酸菌产酸曲线；
[0036]图5乳酸菌系统发育树。
具体实施方式
[0037]为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明。
[0038]燕麦具有较高的粗蛋白含量、营养成分高、缓冲能低，青贮后的营养品质要高于青干草,但是附生乳酸菌的数量较少，低于5log10cfu/gFM。加之，高寒地区，例如青藏高原地区冷季昼夜温差大，燕麦青贮存在反复冻融现象，容易出现以下结果：一、发酵不足：附生乳酸菌量较少，在发酵初期难以成为优势菌群、底物竞争力差；二、发酵不稳定：由于附生乳酸菌数量少，难以迅速形成酸性环境，无法有效抑制霉菌和腐败菌的大量繁殖，容易出现霉变，营养品质层次不齐；
[0039]三、二次发酵；青贮开窖后真菌、霉菌大量滋生，容易发生二次发酵，进而导致短时间内有氧变败，难以储存。
[0040]所以浮生乳酸菌的种类和数量以及环境温差是影响高寒地区(例如：青藏高原地区)燕麦青贮的主要难题。
[0041]基于上述问题，本专利技术提供一种短乳杆菌248及其应用，根据低pH生长和高乳酸产
量的潜力，本专利技术短乳杆菌248从青贮燕麦中分离得到。
[0042]实施例提供了短乳杆菌248对燕麦发酵品质、营养品质和有氧稳定性的影响。
[0043]所述短乳杆菌248根据生理、生化特征和16S rRNA测序分析，鉴定为短乳杆菌。
[0044]所述短乳杆菌248处理的青贮饲料有氧稳定性较好，可降低pH，可降低干物质损失，可降低氨态氮/总氮比值，增加了干物质含量、乳酸含量和粗蛋白含量，耐冻融性和耐酸性佳，对环境的适应性佳。
[0045]所述短乳杆菌248在20/
‑
5℃条件培养下，本专利技术植物短乳杆菌248生长和产酸无明显的迟缓期，能达到快速产酸以实现较低pH的效果。
[0046]在青贮开窖时，采用所述短乳杆菌248处理的青贮饲料可避免二次发酵。
[0047]所述短乳杆菌248可作为高寒地区(例如：青藏高原地区)燕麦青贮饲料的候选菌株，应用于制备抑菌制剂、制备青贮饲料添加剂、制备青贮饲料，能发酵出品质优良并可以长期贮存的青贮饲料。
[0048]实施例1
[0049]一、菌株的分离筛选
[0050]样品于2021年1月到4月底在青海省海北、海东、海南和西宁地区采集，共从19个采样地采取了57份青贮样品和1份牧民自制酸奶样品(样品采集地信息如表1所示)。
[0051]采样后，从青贮样品中分别称取20g于180mL无菌蒸馏水中在4℃下震荡1h，再在无菌蒸馏水中连续稀释10
‑1至10
‑5，分别取原液，10
‑3、10
‑5倍样品稀释液涂布在固体MRS培养基(陆桥科技有限公司，北京，中国)上培养48h。挑选出生长速度快的乳酸菌将其接种到液体MRS培养基中37℃培养48h后，进行不断划线纯化，对乳酸菌进行分离。为了确保更真实的反应原料和青贮中乳酸菌群落结构，从每种样品固体MRS培养基中随机抽取10株左右菌株，共收集437株菌，通过革兰氏染色试验确定其中437株为乳酸菌，将437株乳酸菌放入加有甘油的保藏管中
ꢀ‑
20℃保存。
[0052]对挑选出的437株乳酸菌进行初次筛选，分别在0℃24h、先
‑
5℃12h后20℃ 12h、先20℃12h后
‑
5℃12h培养，然后测其pH值和OD值，从中筛选出生长效率最高、产酸能力最强(pH值小且OD大)的菌株作为候选菌株，共挑选出15株菌，再对这15株菌的进行革兰氏染色、菌落形态和葡萄糖产气试验。糖发酵试验采用试剂盒方法(陆桥科技有限公司，北京，中国)。
[0053]表1供试材料信息
[0054][0055][0056](1)耐温试验：将筛选的15株菌接种至MRS液体培养基中，分别置于5、 10、15、20、30、50℃培养箱中，培养2d后测定各组发酵液的OD600nm值，每个处理重复3次。
[0057](2)耐酸试验：用经过无菌处理的HCl溶液和NaOH溶液调整MRS液体培养基pH，将上述菌株分别接种至pH为3.0、3.5、4.0、5.0、6.0的MRS液体培养基中，分为两组，分别在37℃和10℃的培养箱中培养2d，测定培养基OD600nm 值。
[0058](3)耐盐试验：将上述活化的乳酸菌接入NaCl溶液体积分数为3.0％和6.5％的MRS液体培养基中，分为两组，分别在37℃和10℃的培养箱中培养2d，于 600nm处测定培养基OD值。OD600nm<0.05代表不生长(
‑
)，OD600nm小于 0.3表示微弱生长(W)，OD600nm在0.3
–
0.5之间表示生长(+)，OD600nm>0.5 代表生长良好(++)。
[0059]对筛选出的15株菌进行基因组提取。将15株乳酸菌置于37℃中过夜培养， 10,000g离心5min，用TE缓冲液在15mL离心管中洗涤2次后再离心。DNA提取采用TIANamp细菌DNA试剂盒(DP302
‑
02，天根，北京，中国)。DNA使用前保存在
‑
20℃。对15株乳酸菌16S rRNA序列进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种短乳杆菌(Levilactobacillusbrevis)248，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23167。2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂的活性成分包括权利要求1所述的短乳杆菌248。3.一种青贮饲料添加剂，其特征在于，所述青贮饲料添加剂的活性成分包括权利要求1所述的短乳杆菌248。4.权利要求3所述的青贮饲料添加剂，其特征在于，所述青贮添加剂为燕麦青贮添加剂。5.一种青贮饲料，其特征在于，所述青贮饲料中含有权利要求3所述的青贮饲料添加剂。...

【专利技术属性】
技术研发人员：关皓，李海萍，周青平，贾志锋，刘文辉，马祥，刘勇，汪辉，陈仕勇，魏小星，鲍根生，梁国玲，
申请(专利权)人：青海省畜牧兽医科学院，
类型：发明
国别省市：