一种快速基因检测试剂盒及其基因检测方法技术

本发明专利技术公开了一种快速基因检测试剂盒及其基因检测方法，涉及生物技术领域，试剂盒包括以下组分：TE缓冲液，引物对1，引物对2，限制性内切酶或其同裂酶，该试剂盒在制备PCR扩增模板的步骤中，无需提取样本中的DNA，且采用特殊的引物体系，从整体上提升了多种目标基因检测的速度和准确率，对当前社会中的一些疫情防控工作具有重大意义。控工作具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
一种快速基因检测试剂盒及其基因检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种快速基因检测试剂盒及其基因检测方法。

技术介绍

[0002]在基因检测(诊断)和基因治疗的初始应用阶段，主要用于遗传病(宿主自带遗传物所决定的疾病)的诊断和治疗，基因是宿主体内携带有遗传信息的遗传物质(DNA\RNA)，基因检测是对宿主身上提取出的样本中的遗传物质序列进行检测的技术。遗传物质之所以能够决定这些疾病，通常是由于遗传物质改变所引起的，可能来自双亲的遗传，也可能不是，但这类疾病都会在宿主的遗传物质序列中有所体现，检测原理是：目前人类基因组基本已经破译，决定某些形状的基因片段序列(各种基因型)基本确定，当这些基因型中的碱基序列发生突变时，有一定概率导致该基因的表达出现问题，也就表现为遗传病，我们对一定的序列片段进行克隆(复制)后，通过对其进行检测，通常可以得知这一段序列是否发生突变，也就能够判断该宿主是否可能患有该基因片段决定的遗传病。
[0003]但近年来，随着基因检测技术的进步，以及多种传染病的广泛传播，基因检测，尤其是快速基因检测，对病毒感染类疾病(等由携带特殊遗传物质的病原体引发的疾病种类)的诊断渐渐被广泛应用，目前已经能够实现短时间大批量基因检测，但是目前的大部分基因检测在时效上还是不能达到应对短时间大规模检测的要求，主要原因有：样品采集和处理时间长、PCR扩增前需要复杂的裂解和DNA提取过程、PCR扩增程序受到多处限制而速度较慢。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供一种无需进行复杂样品前处理的、无需提取样品基因组的、PCR扩增程序时间短的快速基因检测试剂盒及其基因检测方法，具体方案如下；
[0005]首先，本专利技术提供一种快速基因检测试剂盒，包括以下组分：
[0006]TE缓冲液，引物对1，引物对2，限制性内切酶或其同裂酶。
[0007]优选地，所述引物对1为针对目标基因的普通PCR引物对。
[0008]优选地，所述引物对2为针对目标基因的巢式PCR引物对。
[0009]优选地，所述限制性内切酶为限制性核酸内切酶HinfI。
[0010]优选地，所述同裂酶指与所述限制性内切酶识别相同核苷酸靶序列的内切酶。
[0011]进一步优选地，所述同裂酶指与所述限制性内切酶剪切位点相同。
[0012]优选地，所述引物对1、引物对2，分别为针对同一目标基因的普通PCR 引物对和巢式PCR引物对。
[0013]进一步优选地，所述引物对1包括N组引物对，为针对N组目标基因的普通PCR引物对；所述引物对2同样包括N组引物对，为针对N组目标基因的巢式PCR引物对，二者相互对应；N为正整数。
[0014]优选地，所述试剂盒中还包括dd H2O，2
×
EasyTaq PCR SuperMix(+dye)。
[0015]优选地，所述试剂盒使用时的PCR体系，根据不同目标基因，可采取不同PCR体系。
[0016]第二，本专利技术还提供应用上述快速基因检测试剂盒的基因检测方法，包括以下步骤：
[0017]S1、制备PCR扩增模板；
[0018]S2、制备PCR扩增体系；
[0019]S3、设定PCR程序进行PCR扩增；
[0020]S4、PCR产物的酶切；
[0021]S5、酶切产物的回收和鉴定；
[0022]上述步骤采用的试剂，均来自快速基因检测试剂盒；S1所述制备PCR扩增模板，无需提取样本中的DNA。
[0023]优选地，S1所述制备PCR扩增模板，包括：将采集得到的样本分散于TE 中，离心干燥后，冻干，恢复到室温，用TE重悬。
[0024]优选地，所述离心干燥，包括4000r/min离心5min，弃上清。
[0025]所述用TE重悬，TE用量为50μL/样本。
[0026]优选地，S2所述PCR扩增体系，根据不同目标基因，可采取不同PCR体系。
[0027]优选地，S2所述PCR扩增体系，可选体系包括：dd H2O6.7μL，2
×
EasyTaqPCR SuperMix(+dye)12μL，引物对1各0.4μL，引物对2各0.4μL。
[0028]优选地，S3所述PCR程序，根据不同目标基因，可采取不同PCR程序。
[0029]优选地，S3所述PCR程序，可选程序包括：94℃、8min；94℃、30s，55℃、 30s，72℃、30s，35个循环；72℃、5min。所得产物可在4℃保存。
[0030]优选地，S4所述酶切，酶切体系包括：ddH2O 21μL、 10
×
FastDigestGreenBuffer 2μL、PCR产物5μL、限制性核酸内切酶HinfI或其同裂酶2μL。
[0031]优选地，S4所述酶切，酶切条件为37℃水浴，时间为10min，然后于65℃水浴保温20min。
[0032]优选地，S5所述酶切产物的回收和鉴定，包括：将S4所得酶切产物在2.5％琼脂糖凝胶电泳分离，通过电泳图确定酶切所得片段大小，与目标基因大小范围进行比对，从而确认样本中是否含有携带该目标基因的遗传物质。
[0033]有益效果
[0034]本专利技术的有益效果在于：
[0035]本专利技术提供的方法，样本处理方式简单，仅通过离心干燥、冻干重悬即可，无需进行时间较长的细胞裂解和DNA提取，节省了大量的检测时间；另外，本专利技术提供的方法，采用的检测引物体系能够保证高度特异性，避免阳性的漏检及假阴性；本专利技术提供的方案从整体上提升了多种目标基因检测的速度和准确率，对当前社会中的一些疫情防控工作具有重大意义。
具体实施方式
[0036]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实
施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。
[0037]除非特别指出，以下实施例和对比例为平行试验，采用同样的处理步骤和参数。
[0038]本专利技术所述2
×
EasyTaq PCR SuperMix(+dye)中包括直扩PCR酶。
[0039]实施例1：试剂盒的制备：
[0040]一种快速基因检测试剂盒，包括以下组分：
[0041]TE缓冲液，引物对1，引物对2，限制性内切酶。
[0042]所述引物对1为针对目标基因的普通PCR引物对。
[0043]所述引物对2为针对目标基因的巢式PCR引物对。
[0044]所述限制性内切酶为限制性核酸内切酶HinfI。
[0045]所述引物对1、引物对2，分别为针对同一目标基因的普通PCR引物对和巢式PCR引物对。
[0046]所述试剂盒中还包括dd H2O，2<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速基因检测试剂盒，其特征在于：包括以下组分：TE缓冲液，引物对1，引物对2，限制性内切酶或其同裂酶。2.根据权利要求1所述的快速基因检测试剂盒，其特征在于：所述引物对1为针对目标基因的普通PCR引物对；所述引物对2为针对目标基因的巢式PCR引物对。3.根据权利要求1所述的快速基因检测试剂盒，其特征在于：所述限制性内切酶为限制性核酸内切酶HinfI。4.根据权利要求1所述的快速基因检测试剂盒，其特征在于：所述引物对1、引物对2，分别为针对同一目标基因的普通PCR引物对和巢式PCR引物对。5.根据权利要求1所述的快速基因检测试剂盒，其特征在于：所述引物对1包括N组引物对，为针对N组目标基因的普通PCR引物对；所述引物对2同样包括N组引物对，为针对N组目标基因的巢式PCR引物对，二者相互对应；N为正整数。6.根据权利要求1所述的快速基因检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括dd H2O，2

【专利技术属性】
技术研发人员：张金银，巩赞博，巩赞斌，巩赞华，黄咏华，彭劼，
申请(专利权)人：深圳市华晨阳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：