一种透明质酸钠双相凝胶及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种透明质酸钠双相凝胶，所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠构成。本发明专利技术还提供了所述透明质酸钠双相凝胶在无透明带受精卵或胚胎的培养中的应用，以及一种哺乳动物无透明带受精卵或胚胎的培养方法。本发明专利技术提供的透明质酸钠双相凝胶能有效维持无透明带受精卵或胚胎发育潜能和稳定性，使无透明带受精卵或胚胎能正常发育。所述培养方法具有操作上更加简单、有效和便利的优点。便利的优点。便利的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸钠双相凝胶及其应用


[0001]本专利技术属于胚胎培养
，具体涉及一种透明质酸钠双相凝胶及其应用。

技术介绍

[0002]卵细胞的发育在滤泡中进行，当第一层滤泡细胞层完全包被住卵细胞后，在卵细胞的外方开始形成非细胞的膜，称为透明带。受精卵在不断的卵裂过程中，其发育潜能的维持需要确保卵裂球之间保持相互的联系以及一定的空间结构。而透明带在维持卵裂间相互联系和空间结构中起着非常关键的作用。在辅助生殖技术实施过程中，会存在透明带缺失或异常的现象；另外在体外操作过程中，透明带结构也存在脱落的现象。缺乏透明带的受精卵利用常规的胚胎培养方法，会导致细胞分裂后卵裂球平铺生长，从而影响胚胎的后期发育潜能。
[0003]针对无透明带胚胎，目前也有文献报道使用悬滴法和琼脂糖凝胶等方法进行培养获得成功的案例。但在使用中均存在一定的缺陷：悬滴法操作比较复杂，而且培养液的量非常少，很难保证胚胎培养环境的稳定，故其最终所获得的可用胚胎效率仍然较低；使用琼脂糖或其他凝胶状物质虽然可以在一定程度上起到维持胚胎发育空间结构的作用，但由于其本身不透气性，并且强度很难控制，导致胚胎发育效果的稳定性较差，而且琼脂糖等凝胶成分对胚胎发育以及后期着床方面的负面影响也很难评估。
[0004]因此，急需开发一种能有效维持无透明带受精卵或胚胎发育潜能和稳定性的产品和培养方法。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的在于提供一种透明质酸钠双相凝胶，其能有效维持无透明带受精卵或胚胎发育潜能和稳定性，使无透明带受精卵或胚胎在培养过程中能正常发育。
[0006]具体技术方案如下。
[0007]一种透明质酸钠双相凝胶，所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠构成。
[0008]在一些实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～6)。
[0009]在一些实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～4)。
[0010]在优选的实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.5～3.5)。
[0011]在更优选的实施例中，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(2～3.5)。
[0012]在一些实施例中，所述交联透明质酸钠由选自丁二醇缩水甘油醚、二乙烯基砜、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯、3,3
′‑
二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯、4,4
′
二硫双磺基琥珀酰亚
胺丁酸酯中的至少一种的交联剂制备而成。
[0013]在优选的实施例中，所述交联剂选自丁二醇缩水甘油醚。
[0014]本专利技术还提供了上述透明质酸钠双相凝胶在无透明带受精卵或胚胎的培养中的应用。
[0015]本专利技术还提供了一种哺乳动物无透明带受精卵或胚胎培养方法，包括以下步骤：(1)向培养皿中加入上述透明质酸钠双相凝胶，然后依次在所述透明质酸钠双相凝胶上面覆盖培养液以及矿物油；(2)将所述培养皿置于培养箱中，使所述透明质酸钠双相凝胶的pH值与所述培养液的pH值相同；(3)取出所述培养皿，用拉细的胚胎转移管将哺乳动物无透明带受精卵或胚胎嵌入所述透明质酸钠双相凝胶中，然后将培养皿放入培养箱中继续培养。
[0016]在一些实施例中，所述培养液选自胚胎培养液、受精液培养液、卵裂胚培养液、囊胚培养液、体外操作培养液中的至少一种。
[0017]在优选的实施例中，所述培养液选自胚胎培养液。
[0018]在一些实施例中，所述哺乳动物为小鼠、大鼠、兔、猪、猴、牛、羊、狗或马。
[0019]本专利技术提供了一种可以有效维持无透明带受精卵或胚胎发育潜能和稳定性的透明质酸钠双相凝胶，所述透明质酸钠双相凝胶可作为无透明带受精卵或胚胎发育的“支架”，替代透明带对受精卵或胚胎形成约束作用，使其分裂过程能以正常的细胞排列方式进行，有效解决了无透明带受精卵或胚胎在发育过程中由于无法维持空间结构而导致胚胎发育潜能差的难题，从而使无透明带受精卵或胚胎能正常发育。进一步地，专利技术人还发现，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的比例会对培养效果产生明显的影响，并优化获得了两者合适的比例，使得所述透明质酸钠双相凝胶既能满足对无透明带受精卵或胚胎的束缚作用，又能满足营养物质交换的需要，从而取得好的培养效果。
[0020]本专利技术还提供了利用所述透明质酸钠双相凝胶对哺乳动物无透明带受精卵或胚胎进行培养的方法，所述方法具有操作上更加简单、有效和便利的优点。
附图说明
[0021]图1为对比例4培养的正常小鼠受精卵的发育状态。
[0022]图2为本专利技术实施例1所述透明质酸钠双相凝胶培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
[0023]图3为对比例3中常规方法培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
[0024]图4为本专利技术实施例4所述透明质酸钠双相凝胶培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
[0025]图5为本专利技术实施例5所述透明质酸钠双相凝胶培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
[0026]图6为对比例1中培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
[0027]图7为对比例2中培养的小鼠无透明带受精卵的发育状态。
具体实施方式
[0028]本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0029]除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。
[0030]本专利技术的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
[0031]本专利技术提供了一种透明质酸钠双相凝胶，所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠构成。
[0032]透明质酸钠状态包括包括液相和固相。未交联的透明质酸钠是液态的，用交联剂将游离的透明质酸钠连接起来形成网状结构，使透明质酸钠的物理性质发生变化，变成果冻状的固态，即为交联透明质酸钠。既含有交联透明质酸钠又含有游离状态透明质酸钠的凝胶称为透明质酸钠双相凝胶。交联透明质酸钠具有一定的硬度和结构，并且透明质酸钠本身是细胞外基质的主要成分组成，因此其对胚胎发育本身是没有负面作用的。制备交联透明质酸钠使用的交联剂可选自但不限于以下交联剂：丁二醇缩水甘油醚(BDDE)、二乙烯基砜(DVS)、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯(BS3)、3,3
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二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯(DTSSP)、4,4
′<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸钠双相凝胶，其特征在于，所述透明质酸钠双相凝胶由交联透明质酸钠和游离透明质酸钠构成。2.如权利要求1所述的透明质酸钠双相凝胶，其特征在于，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～6)。3.如权利要求1所述的透明质酸钠双相凝胶，其特征在于，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.2～4)。4.如权利要求1所述的透明质酸钠双相凝胶，其特征在于，所述透明质酸钠双相凝胶中交联透明质酸钠和游离透明质酸钠的重量比为1：(1.5～3.5)，更优选为1：(2～3.5)。5.如权利要求1～4任一项所述的透明质酸钠双相凝胶，其特征在于，所述交联透明质酸钠由选自丁二醇缩水甘油醚、二乙烯基砜、双磺基琥珀酰亚胺辛二酸酯、3,3
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二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯、4,4
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二硫双磺基琥珀酰亚胺丁酸酯中的至少一种的交联剂制备而成。6.如权利要求5所述的透明质...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴克良，陈子江，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：