用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物、试剂和试剂盒及制备方法，涉及免疫检测领域。该抗体组合物能够实现NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2、GABA

【技术实现步骤摘要】
用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，特别是涉及一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物及其应用

技术介绍

[0002]自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE)是一组主要累及中枢神经系统的自身免疫性疾病。自身免疫性脑炎在儿童、青少年、成人均可发生。临床上，自身免疫性脑炎主要表现为急性或亚急性起病的以记忆力下降、癫痫发作、精神症状、运动障碍等症状为特征的脑炎综合征,病情严重者可出现癫痫持续状态、中枢性低通气等情况危及生命，有研究表明部分重症自免脑患者需住重症监护病房，病死率为4.0％
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5.2％。因此早期诊断及治疗对自身免疫性脑炎至关重要。
[0003]自身免疫性脑炎通常包括两大类，典型的副肿瘤性边缘脑炎(limbic encephalitis，LE)，与抗神经元细胞内抗原的自身抗体(如Hu，Yo，Ma2等)相关；另一类是是与神经元表面或突触抗原自身抗体相关的新型自身免疫性脑炎，一般属于致病性抗体，这种自身抗体与其靶点结合导致不可逆性的神经元功能障碍。自2007年Dalmau等人发现抗N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体(NMDAR)抗体以来，已鉴定出十多种新型自身抗体。这些自身抗体大多与特异性和特征性的症状有关，而这些自身抗体的检测证实了诊断。自2010年我国引进并建立抗NMDAR抗体诊断试验以来，已有数百例自身免疫性脑炎患者被诊断和治疗，改变了我国脑炎治疗的临床方法。
[0004]根据中国自免脑炎诊治专家共识，把新型的自免脑分为三个大组，把抗NMDAR脑炎单独分出来作为独立的一组，第二类是以精神行为异常,癫痫发作和近记忆力下降为主要临床表现的边缘性脑炎,可以合并或者不合并肿瘤，最常见的与这类边缘性脑炎相关的抗体有LGI1抗体，GABAb抗体以及AMPA抗体；第三类是其他一些特殊的临床综合征，包括与Caspr2抗体介导的Morvan综合征，多巴胺受体抗体介导的基底节脑炎，以及甘氨酸受体介导的PERM等。
[0005]然而，在中国，用于识别这类自身抗体资源十分有限，国内大多数实验室采用商业上可买到的基于细胞的检测方法(CBA，Euromimun，Germany)来诊断神经元细胞表面自身抗体，由于缺乏实验室资源，自身免疫性脑炎的及时诊断往往受到阻碍。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，本专利技术提供一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物，能够实现NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2、GABA
B
R六种抗体联合检测，大幅提高自身免疫性脑炎诊断的灵敏度和特异性，可用于自身免疫性脑炎的临床定性以及抗体滴度测定。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物，包括抗NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2和GABA
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R的自身抗体。
[0008]本专利技术人在研究过程中发现，基于组织的检测(tissue
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based assay，TBA)、基于
细胞的检测(cell
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based assay,CBA)以及基于活体海马或皮质神经元的间接免疫荧光法和免疫沉淀法可用于细胞内和细胞表面或突触抗体检测。在TBA中，患者血清或脑脊液中的抗体通过小鼠或大鼠脑切片的间接免疫荧光检测，是一种很好的筛选方法，但需要通过更具体的技术来证实。关于肿瘤神经抗体(如Hu、Ma2、Ri等)的检测，用重组蛋白对最常见的自身抗体进行商业免疫印迹是广泛可用的。另一方面，神经元表面自身抗体检测的金标准是CBA，在CBA中，表达适当抗原的细胞(例如人类胚胎肾293细胞)与患者的血清/脑脊液一起孵育，抗体通过间接免疫荧光来识别。这种方法具有高度敏感性和特异性，提高了抗体的检出率。
[0009]NMDAR脑炎是目前报道例数最多的自身免疫性脑炎，年轻人多见，且病情危重者较多，很多患者合并有畸胎瘤，影响患者预后。其他诸如LGI1抗体脑炎，CASPR2脑炎，GABA
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R脑炎，AMPAR脑炎报道相对较多。LGI1脑炎癫痫发作多以各形式颞叶癫痫常见，有患者合并顽固性低钠血症，增加治疗难度。GABA
B
R脑炎常表现为严重且难治的癫痫发作，可进展为癫痫持续状态，影响患者后期脑功能恢复，且约50％GABA
B
R脑炎患者合并小细胞肺癌。因此，抗体的检测对于自身免疫性脑炎的诊断和分型具有重要意义。除了对疾病诊断的意义之外，其滴度和(或)浓度的变化对疾病的进展和疗效具有重要的监测价值。本专利技术选择包括NMDAR、LGI1及GABA
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R在内的上述6个抗体进行检测，从而覆盖绝大部分(90％)自身免疫性脑炎患者可能出现的抗体，为患者后续治疗方案及肿瘤筛查提供方向，临床应用价值高。
[0010]一般情况，细胞表面抗原抗体采用ELISA等方法存在较为明显的假阳性和假阴性，且与临床症状符合度较差。而NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2、GABA
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R属于细胞表面抗原，其空间构象对抗体识别非常重要。我们采用基于细胞过表达的间接免疫荧光法(CBA)，可以维持抗原的自身构象，其特异度和灵敏度均具有优势。
[0011]在其中一个实施例中，所述自身抗体来源于血液或脑脊液。
[0012]本专利技术还提供了所述的抗体组合物在制备用于检测自身免疫性脑炎的试剂中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种用于检测自身免疫性脑炎的试剂盒，该试剂盒包括用于与所述抗体组合物发生反应的抗原组合。
[0014]在其中一个实施例中，所述试剂盒包括：
[0015]固定相，所述固定相上结合有所述抗原组合；以及
[0016]第二抗体，所述第二抗体可与所述自身抗体结合。
[0017]上述试剂盒通过所述抗原组合和所述自身抗体反应，将抗NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2和GABA
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R的自身抗体固定于固定相上，然后通过第二抗体识别并结合被固定的自身抗体，进而实现自身免疫性脑炎的临床定性以及抗体滴度测定。
[0018]在其中一个实施例中，所述第二抗体为抗人抗体。
[0019]在其中一个实施例中，所述第二抗体选自：山羊抗人抗体、大鼠抗人抗体、小鼠抗人抗体、猪抗人抗体、驴抗人抗体、绵羊抗人抗体、鸡抗人抗体、马抗人抗体、兔抗人抗体、仓鼠抗人抗体、狗抗人抗体或牛抗人抗体。
[0020]在其中一个实施例中，所述第二抗体为山羊抗人抗体。
[0021]在其中一个实施例中，所述第二抗体的类型选自：IgG、IgA、IgM、IgG(Fc)或IgG(ab
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)2。
[0022]在其中一个实施例中，所述第二抗体的类型为IgG。
[0023]在其中一个实施例中，所述抗原组合通过以下方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物，其特征在于，包括抗NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2和GABA
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R的自身抗体。2.权利要求1所述的抗体组合物在制备用于检测自身免疫性脑炎的试剂中的应用。3.一种用于检测自身免疫性脑炎的试剂盒，其特征在于，包括用于与权利要求1所述的抗体组合物发生反应的抗原组合。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：固定相，所述固定相上结合有所述抗原组合；以及第二抗体，所述第二抗体可与所述自身抗体结合。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原组合通过以下方法制备得到：制备质粒：分别构建含有NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2或GABA
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R基因的质粒；制备细胞：将所述质粒转染到细胞中，使细胞表达所述抗原组合，即得。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述固定相通过以下方法制备得到：将所述细胞固定于玻片上，即得。7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第二抗体上连接有标记物，所述标记物选自：荧光素或酶。8.权利要求3
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【专利技术属性】
技术研发人员：施福东，金薇娜，李敏淑，魏常娟，郭爱，郑培，李治国，陈京山，章雷，李浩，
申请(专利权)人：天津天海新域生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：