基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法技术

本发明专利技术公开了基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，涉及质谱检测技术领域。本发明专利技术包括如下步骤：步骤S1：取粪便1克，加入正己烷和异丙醇组成的混合溶液中，分离萃取硫脑苷脂；步骤S2：蒸干提纯的硫脑苷脂，加入0.1N氢氧化钠300μL，于恒温箱中皂化10min，使之变成氢化硫脑苷脂；步骤S3：利用高精度单头滤过装置洗脱其他脂类，提纯氢化硫脑苷脂；步骤S4：用甲醇溶解高精度单头滤过装置中提纯的氢化硫脑苷脂并加入固定量的羟化硫脑苷脂；步骤S5：利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪完成氢化硫脑苷脂质与量的分析；步骤S6：完成。本发明专利技术方法通过将取样改采血为粪便进行测定的方式，能够实现无创测定，安全性及适应性加强。安全性及适应性加强。安全性及适应性加强。

【技术实现步骤摘要】
基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法


[0001]本专利技术涉及质谱检测
，特别是涉及基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法。

技术介绍

[0002]硫脑苷脂是一种在人体中大量存在的糖脂，它作为神经系统的重要组成成分，许多研究结果表明硫脑苷脂在其所在的组织和器官中具有重要的生理功能，随着硫脑苷脂检测手段的发展以及硫脑苷脂相关研究的进展，发现硫脑苷脂不仅在神经系统发挥着独特的作用，而且在其它系统的病理生理的发生机制中同样具有不可替代的作用，飞行质谱的全称是表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术，在飞行质谱的检测系统中，信号由高速的模拟数字转化器传化并记录，被测定的脂质以一系列峰的形式呈现，这些特异的峰可看成此类疾病的指纹，一种脂质在谱图上的位置取决于飞行时间，seldi携有特有的软件，能快速处理、分析大量的信息，可以进行定量测定，利用飞行质谱能发现过去无法分离检测的新的疾病蛋白谱图；
[0003]目前对于飞行质谱法与硫脑苷脂的测定在实际操作中结合度差，可控性不佳，并且在取样时通常采取血液标本，需要进行有创测定，适应性不足；因此，我们提出基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，解决上述背景中提出的问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]本专利技术为基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，包括如下步骤：
[0007]步骤S1：取粪便1g，加入正己烷和异丙醇组成的混合溶液中，分离萃取硫脑苷脂；
[0008]步骤S2：利用离心蒸发干燥机蒸干提纯的硫脑苷脂，加入0.1N氢氧化钠300μL，于恒温箱中皂化10min，切断硫脑苷脂的脂肪酸长链，使之变成氢化硫脑苷脂；
[0009]步骤S3：利用高精度单头滤过装置洗脱其他脂类，提纯氢化硫脑苷脂；
[0010]步骤S4：用甲醇溶解高精度单头滤过装置中提纯的氢化硫脑苷脂并加入固定量的羟化硫脑苷脂，将其收集试管中进行干燥；
[0011]步骤S5：利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪完成氢化硫脑苷脂质与量的分析；
[0012]步骤S6：完成基于飞行质谱法对粪便脑硫苷脂的测定。
[0013]所述步骤S1中正己烷和异丙醇的使用比例为3﹕2；
[0014]所述步骤S2中恒温箱的设定温度为150℃；
[0015]所述步骤S3中高精度单头滤过装置为MonoTip C18；
[0016]所述步骤S5中用α
‑
氰基
‑4‑
羟基肉桂酸和水配置成的溶解液3μL溶解干燥的氢化
硫脑苷脂，将混合溶液置于样本分析盘中，干燥后放入基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪的激光发射口处；
[0017]把基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪的激光光束调整为氮离子光束，采用阴离子模板作为反射模板；
[0018]以标准的氢化硫脑苷脂d18:1，即[M
‑
H]‑
,540.2843和羟化硫脑苷脂d18:0，即[M
‑
H]‑
,584.3105校准测定仪，采用每秒50次的激光离子化样本，在解离图谱中测定氢化硫脑苷脂的质与量；
[0019]所述α
‑
氰基
‑4‑
羟基肉桂酸和水的配置比例为1﹕1；
[0020]所述氮离子光束的波长为337nm。
[0021]本专利技术具有以下有益效果：
[0022]一、本专利技术基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，通过将取样改采血为粪便进行测定的方式，能够实现无创测定，操作安全性及适应性加强。
[0023]二、本专利技术基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，测定方案快捷高效，测定结果精度高，可控性强，推广价值高。
[0024]当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为本专利技术基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法流程图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]请参阅图1所示：本专利技术为基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，包括如下步骤：
[0029]步骤S1：取少量粪便(大约1克)加入Hexane(正己烷):isopropanol(异丙醇)(3:2)组成的混合溶液中分离萃取硫脑苷脂；
[0030]步骤S2：利用离心蒸发干燥机蒸干提纯的硫脑苷脂，加入0.1N氢氧化钠300微升于150摄氏度恒温箱中皂化十分钟，切断硫脑苷脂的脂肪酸长链，使之变成氢化硫脑苷脂；
[0031]步骤S3：利用高精度单头滤过装置(MonoTip C18)洗脱其他脂类，提纯氢化硫脑苷脂；
[0032]步骤S4：用Methanol(甲醇)溶解高精度单头滤过装置中提纯的氢化硫脑苷脂，加入固定量的羟化硫脑苷脂，并将其收集试管中进行干燥；
[0033]步骤S5：利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪完成氢化硫脑苷脂质与量的
分析：
[0034]用alpha
‑
cyano
‑4‑
hydroxycinnamic acid：水(1：1)配置成的溶解液3微升溶解干燥的氢化硫脑苷脂，将混合溶液置于样本分析盘中，干燥后放入基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪的激光发射口处；把基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪的激光光束调整为氮离子光束(337nm)，采用阴离子模板作为反射模板；以标准的氢化硫脑苷脂d18:1([M
‑
H]‑
,540.2843)和羟化硫脑苷脂d18:0([M
‑
H]‑
,584.3105)校准测定仪；采用每秒50次的激光离子化样本，在解离图谱中测定氢化硫脑苷脂的质与量；
[0035]步骤S6：完成测定。
[0036]本方案中，飞行时间质谱仪中质量分析器是一个离子漂移管，由离子源产生的离子加速后进入无场漂移管，并以恒定速度飞向离子接收器，离子质量越大，到达接收器所用时间越长，离子质量越小，到达接收器所用时间越短，基于此，能够把不同质量的离子按m/z值大小进行分离。
[0037]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1：取粪便1g，加入正己烷和异丙醇组成的混合溶液中，分离萃取硫脑苷脂；步骤S2：利用离心蒸发干燥机蒸干提纯的硫脑苷脂，加入0.1N氢氧化钠300μL，于恒温箱中皂化10min，切断硫脑苷脂的脂肪酸长链，使之变成氢化硫脑苷脂；步骤S3：利用高精度单头滤过装置洗脱其他脂类，提纯氢化硫脑苷脂；步骤S4：用甲醇溶解高精度单头滤过装置中提纯的氢化硫脑苷脂，并加入固定量的羟化硫脑苷脂，将其收集试管中进行干燥；步骤S5：利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪完成氢化硫脑苷脂质与量的分析；步骤S6：完成基于飞行质谱法对粪便脑硫苷脂的测定。2.根据权利要求1所述的基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，其特征在于，所述步骤S1中正己烷和异丙醇的使用比例为3﹕2。3.根据权利要求1所述的基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，其特征在于，所述步骤S2中恒温箱的设定温度为150℃。4.根据权利要求1所述的基于飞行质谱法测定粪便脑硫苷脂的方法，其特征在于，所述步骤S3中高精度单头滤过装置为MonoTip C18。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，
申请(专利权)人：河北省人民医院，
类型：发明
国别省市：