一种喜树碱的新用途及抑制禽腺病毒血清型4药品制造技术

一种喜树碱的新用途，包括喜树碱在制备用于治疗感染FAdV

【技术实现步骤摘要】
一种喜树碱的新用途及抑制禽腺病毒血清型4药品


[0001]本专利技术涉及禽类医疗领域，具体是一种喜树碱的新用途及抑制禽腺病毒血清型4药品。

技术介绍

[0002]包涵体肝炎
‑
心包积水综合征(HHS)是一种由禽腺病毒血清型4(FAdV
‑
4)引起的重要家禽传染病。2015年以来，山东、河南、福建、陕西等省多地出现HHS疫情，受感染家禽的特征性病变为肝脏肿大、表面散在出血点、心包内有大量稻草黄色液体，病死率为30％～80％。FAdV
‑
4的宿主范围很广，不仅感染蛋鸡和肉鸡，还感染鸭、鹅和各种野生鸟类。FAdV
‑
4感染宿主的多样性增加了跨宿主传播的潜在风险，使疾病的科学防控更加困难。此外，FAdV
‑
4不仅可以通过呼吸道水平传播，还可以垂直传播，给家禽业造成巨大的经济损失。目前，尚未报道有效对抗该病毒的抗病毒药品，迫切需要新的治疗方法来防控FAdV
‑
4。因此，迫切需要开发对FAdV
‑
4感染有效的抗病毒药品。
[0003]喜树碱是一种具有抗病毒和抗肿瘤活性的植物生物碱它对多种病毒具有抗病毒活性，包括腺病毒2型(ADV2)单纯疱疹病毒2(HSV
‑
2)和肠道病毒71(EV71)。喜树碱已被证明对各种病毒具有抗病毒活性然而，尚未研究喜树碱对FAdV
‑
4的抗病毒作用，其作用机制仍有待探究。

技术实现思路

[0004]为此，需要提供一种喜树碱的新用途，包括喜树碱在制备用于治疗感染FAdV
‑
4的禽类的药品中的用途，并通过喜树碱抑制FAdV
‑
4复制，以对感染FAdV
‑
4的禽类进行保护。
[0005]作为本专利技术的进一步改进：所述禽类包括鸡、鸭或鹅。
[0006]作为本专利技术的进一步改进：所述喜树碱对LMH细胞的增殖有抑制作用。
[0007]作为本专利技术的进一步改进：所述喜树碱以剂量依赖性方式降低LMH细胞的病毒滴度和FAdV
‑
4拷贝数。
[0008]一种抑制禽腺病毒血清型4药品，包括喜树碱，所述喜树碱在所述抑制药品中发挥如前述的新用途，以用于对感染FAdV
‑
4的禽类的治疗。
[0009]作为本专利技术的进一步改进：所述禽类包括鸡、鸭或鹅。
[0010]作为本专利技术的进一步改进：所述抑制禽腺病毒血清型4药品通过喜树碱抑制感染FAdV
‑
4的禽类的体内的FAdV
‑
4的感染。
[0011]作为本专利技术的进一步改进：所述抑制禽腺病毒血清型4药品通过喜树碱抑制感染FAdV
‑
4的禽类的体内FAdV
‑
4在复制阶段的感染。
[0012]作为本专利技术的进一步改进：所述抑制禽腺病毒血清型4药品为肌肉注射。
[0013]作为本专利技术的进一步改进：所述抑制禽腺病毒血清型4药品以剂量依赖性方式降低LMH细胞的病毒滴度和FAdV
‑
4拷贝数。
[0014]区别于现有技术，上述技术方案:
[0015]1、通过在感染FAdV
‑
4鸡体内病毒复制阶段添加喜树碱，显著降低了FAdV
‑
4DNA水平，从而抑制FAdV
‑
4复制。
[0016]2、FAdV
‑
4感染出现HHS的典型组织病理学变化，包括肝细胞脂肪变性，肝细胞出现嗜碱性核包涵体，用喜树碱处理的FAdV
‑
4感染鸡的肝脏仅表现出轻微的病理变化，这表明喜树碱处理保护了鸡的肝脏免受FAdV
‑
4感染造成的损害，表明喜树碱对感染FAdV
‑
4鸡具有保护作用。
附图说明
[0017]图1为喜树碱对LMH细胞的细胞毒作用；
[0018]图2为喜树碱对FAdV
‑
4感染的剂量依赖性抑制；
[0019]图3为喜树碱对FAdV
‑
4的附着、侵入、复制和释放的影响；
[0020]图4为喜树碱在体内抑制FAdV
‑
4感染；
[0021]图5为FAdV
‑
4感染鸡喜树碱治疗后肝脏和肾脏的组织病理学病变。
具体实施方式
[0022]为详细说明技术方案的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
[0023]请参阅图1～5，本实施例中，一种喜树碱的新用途，通过在感染FAdV
‑
4的鸡的FAdV
‑
4复制阶段添加一定量的喜树碱来降低FAdV
‑
4DNA水平抑制FAdV
‑
4复制，从而达到对感染FAdV
‑
4的鸡的保护作用。
[0024]1.材料与方法
[0025]1.1细胞、病毒和试剂
[0026]鸡肝癌细胞(LMH)(ATCC CRL
‑
2117)、胎牛血清(FBS)购自Gibco、DMEM/F12培养基购自Gibco、FAdV
‑
4分离株由本实验室保存。喜树碱(纯度>99％)购自上海纯优生物科技有限公司、DAPI和DMSO购自北京索莱宝科技有限公司。
[0027]1.2喜树碱的细胞毒作用
[0028]喜树碱在LMH细胞中的细胞毒作用采用CCK
‑
8法测定，以消除喜树碱浓度对细胞生长变化的干扰。将LMH细胞以1
×
104个细胞/孔的密度添加到96孔板中，并在37℃下孵育。待LMH细胞形成单层，则弃去培养基并用含有不同浓度的喜树碱(0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM、10μM和50μM)的DMEM/F12新鲜培养基补充。孵育48h后，每孔加入10μL CCK
‑
8溶液，37℃孵育1h。随后，使用酶标仪在450nm处测量OD值。
[0029]1.3喜树碱体外抗FAdV
‑
4感染
[0030]将LMH细胞接种在12孔板中，以研究喜树碱对FAdV
‑
4的抗病毒作用。在LMH细胞的培养基中加入连续稀释的喜树碱(0μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM和10μM)。DMSO(终浓度为0.1％)用作阴性对照，然后将FAdV
‑
4(MOI＝1)添加到细胞中，并将培养物在37℃下孵育48小时。间接免疫荧光测定法(IFA)用于检查喜树碱对LMH细胞中FAdV
‑
4感染的影响。然后将细胞用4％多聚甲醛固定15分钟，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，然后在37℃下用0.1％Trition X
‑
100(生工生物工程(上海)股份有限公司)作用15分钟。将处理过的细胞与实验室制备的抗Hexon单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种喜树碱的新用途，其特征在于：包括喜树碱在制备用于治疗感染FAdV
‑
4的禽类的药品中的用途，并通过喜树碱抑制FAdV
‑
4复制，以对感染FAdV
‑
4的禽类进行保护。2.根据权利要求1的所述喜树碱的新用途，其特征在于：所述禽类包括鸡、鸭或鹅。3.根据权利要求1的所述喜树碱的新用途，其特征在于：所述喜树碱对LMH细胞的增殖有抑制作用。4.根据权利要求1的所述喜树碱的新用途，其特征在于：所述喜树碱以剂量依赖性方式降低LMH细胞的病毒滴度和FAdV
‑
4拷贝数。5.一种抑制禽腺病毒血清型4药品，其特征在于：所述抑制禽腺病毒血清型4药品包括喜树碱，所述喜树碱在所述抑制药品中发挥如权利要求1
‑
4所述的新用途，以用于对感染FAdV
‑
4的禽类的治...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷冬冬，戴银，赵瑞宏，潘孝成，尹磊，王洁茹，胡晓苗，沈学怀，周学利，侯宏艳，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：