一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条及其制备方法，在所述底板的一端自左至右顺次搭接有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述结合垫为喷涂有Cyfra21

【技术实现步骤摘要】
一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条及其制备方法。

技术介绍

[0002]2020年全球新发586202例甲状腺癌病人，居全球癌症新发病例第9位，甲状腺癌是最常见的头颈部及内分泌系统恶性肿瘤。除与接触放射性物质有明确关联外，绝大部分甲状腺癌发病机理不清，最好的治疗办法就是早期发现、早期诊断与早期治疗，这是提高甲状腺癌临床诊疗水平的关键。其中，95％的甲状腺癌为甲状腺乳头状癌，60％
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80％的甲状腺乳头状癌病人初次就诊时即伴随着颈部淋巴结肿大，多项研究表明甲状腺人太杂早期局部淋巴结转移率高达40％
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60％。而淋巴结转移是导致甲状腺癌术后复发最重要的危险因素之一，部分患者会经历2次或者多次手术，给患者带来生理心理以及经济上的沉重负担。当前临床上检测淋巴结癌细胞转移方式为术中冰冻切片和术后组织病理学检查，由于术中冰冻切片假阴性率较高、检测样本数量受限及术后组织病理学耗时长等因素极大地影响了甲状腺癌手术效率，因此临床亟需一种术中客观检测甲状腺淋巴结癌细胞转移状态的方法。
[0003]肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。多数甲状腺癌患者组织中可发现分子标志物表达明显升高，正常淋巴结中不表达或低表达，且与疾病的相关性已得到认可，所以肿瘤标志物检查对甲状腺乳头状癌淋巴结转移方面具有重要的意义。
[0004]BRAF基因位于染色体7q34，参与RasRAF
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MAPK、细胞外信号调节激酶
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MAPK途经的信号传导，常见于密码子600的突变，导致BRAF激酶持续激活，是MAPK下游传导通路高表达，从而细胞过度增殖，恶化。BRAF V600E在检测甲状腺癌中有着极高的特异性，因BRAF突变常发生于PTC中，并且在良性结节中几乎并不存在，是PTC的特征性分子事件，并且该基因表达与肿瘤的进展、复发、甲状腺的外浸润、淋巴结转移和晚期肿瘤有着密切关系。多项国内外回顾性研究也表明，在BRAF突变阳性患者更容易发生中央区淋巴结转移。
[0005]细胞角蛋白来缘于单侧或者复层上皮基底细胞，是形成表皮细胞的构成细胞骨架一种中间丝状物，细胞角蛋白19(Cytokeratin 19，CK19)是一种低分子量的细胞角蛋白，存在于各种上皮及正常上皮来源的肿瘤，在肌肉组织(平滑肌、心肌、骨骼肌等)、结缔组织(血液、骨、脂肪)和神经组织中均不表达。既往多项观察及回顾性研究表明，在DTC中，CK19呈高表达，在甲状腺的良性肿瘤中呈低表达甚至不表达。Cyfra21
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1是细胞角蛋白19片段抗原21
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1 (cytokeratin 19fragment antigen 21
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1)的英文缩写，1992年BODENMULER等釆用杂交瘤技术制备出BM19.21和KS19.1两株单克隆抗体，经配对组成免疫测定方法，可特异性的识别细胞角蛋白19的片段抗原。在正常情况下细胞角蛋白 19在外周血、骨髓、淋巴结中无表达或低表达，而在恶性上皮癌中，激活的蛋白酶加速了细胞的降解，使得大量可溶性的Cyfra21
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1被释放，造成血液中 Cyfra21
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1浓度升高。Cyfra21
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1作为一种新的上皮来源性
质的肿瘤标志物，近几年来在肿瘤临床的应用越来越广泛，在许多上皮性癌如肺癌、鼻咽癌等都有不同程度的检出率；最新的研究表明，血清Cyfra21
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1水平与甲状腺癌的远处转移和肿瘤进展相关。Lee等测量了130枚淋巴结FNA穿刺洗脱液中Cyfra21
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1含量，发现以Cyfra21
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1来判定淋巴结转移，良性和恶性淋巴结中之间几乎没有重叠，并其诊断临界值不受手术影响。因此通过检测淋巴结中Cyfra21
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1及Braf V600E 含量，可以推测淋巴结中癌细胞转移情况。

技术实现思路

[0006]针对上述技术背景中的问题，本专利技术目的是提供一种方便、快捷、准确度高的检测淋巴结中Cyfra21
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1/Braf V600E含量的胶体金层析试纸条及其制备方法。
[0007]为了实现以上目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0008]一种用于快速检测淋巴结中Cyfra21
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1/Braf V600E含量的胶体金层析试纸条，该层析试纸条包括底板，在所述底板的一端自左至右顺次搭接有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述结合垫为喷涂有Cyfra21
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1/Braf V600E捕获抗体
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胶体金复合物的聚酯膜，所述硝酸纤维膜上包被检测T线和质控C线，所述检测T线位于所述质控C线的左侧，所述检测T线内抗体为Cyfra21
‑
1/BrafV600E单抗，所述质控C线为羊抗鼠IgG。
[0009]进一步地，所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600单抗的浓度为 0.1
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3mg/mL，包被参数为10
‑
20μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为 0.5
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2mg/mL，包被参数为15
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20/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为2
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5mm。
[0010]更进一步地，所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600单抗的浓度为 2
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3mg/mL，包被参数为15
‑
20μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为 0.5
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1mg/mL，包被参数为18
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20μL/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为2
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3mm。
[0011]更进一步地，所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600E单抗的浓度为 2mg/mL，包被参数为15μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为1mg/mL，包被参数为18μLμL/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为 2mm。
[0012]进一步地，所述层析试纸条还包括卡壳，所述层析试纸条置于所述卡壳内，所述卡壳上开有显色区和加样孔，加样孔对准所述样品垫所在区域，显色区对准所述检测T线和质控C线所在区域。
[0013]本专利技术的另一目的在于，提供一种上述用于快速检测淋巴结中Cyfra21
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1及 Braf V600E含量的胶体金层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
[0014](1)制备结合垫：
[0015]颗粒直径为20<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条，该层析试纸条包括底板，在所述底板的一端自左至右顺次搭接有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；其特征在于：所述结合垫为喷涂有Cyfra21
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1/Braf V600E捕获抗体
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胶体金复合物的聚酯膜，所述硝酸纤维膜上包被检测T线和质控C线，所述检测T线位于所述质控C线的左侧，所述检测T线内抗体为Cyfra21
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1/Braf V600E单抗，所述质控C线为羊抗鼠IgG。2.根据权利要求1所述的一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条，其特征在于：所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600单抗的浓度为0.1
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3mg/mL，包被参数为10
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20μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为0.5
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2mg/mL，包被参数为15
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20/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为2
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5mm。3.根据权利要求2所述的一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条，其特征在于：所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600单抗的浓度为2
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3mg/mL，包被参数为15
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20μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为0.5
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1mg/mL，包被参数为18
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20μL/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为2
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3mm。4.根据权利要求3所述的一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条，其特征在于：所述检测T线包被的Cyfra21
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1/Braf V600E单抗的浓度为2mg/mL，包被参数为15μL/cm；所述质控线C线包被的蛋白的浓度为1mg/mL，包被参数为18μL/cm；所述层析试纸条的检测T线与质控C线之间的距离为2mm。5.根据权利要求1所述的一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条，其特征在于：所述层析试纸条还包括卡壳，所述层析试纸条置于所述卡壳内，所述卡壳上开有显色区和加样孔，加样孔对准所述样品垫所在区域，显色区对准所述检测T线和质控C线所在区域。6.一种用于快速检测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的胶体金层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)制备结合垫：颗粒直径为20
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴开乐，沈兵，陈珊宇，许利杰，
申请(专利权)人：安徽医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：