一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法。本发明专利技术提供的一种CdTe量子点标记氟虫腈抗原的方法，包括如下步骤：向氟虫腈抗原溶液中加入EDC和NHS，静置，然后加入CdTe量子点，放置反应；所述CdTe量子点的粒径范围为5

【技术实现步骤摘要】
一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，具体涉及一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法。

技术介绍

[0002]食品中有毒物质的痕量、快速检测一直是食品质量安全领域的研究热点。毒鸡蛋产生的原因是饲料的原料在生产及贮藏过程中使用氟虫腈杀虫，造成饲料中的氟虫腈超标，通过食物链蓄积在鸡蛋中，带来了重大食品安全危害。氟虫腈，是一种广谱苯基吡唑类新型杀虫剂，对害虫以胃毒作用为主，兼有触杀和一定的内吸作用，在动植物体中可代谢生成毒性与氟虫腈相当或毒性更高的砜化物或亚砜化合物，被列为C类致癌物。虽然氟虫睛已经被禁限用，但由于其对蚜虫、叶蝉、飞虱、鳞翅目幼虫、蝇类和鞘翅目等重要害虫有很高的杀虫活性，所以在种植以及养殖过程中仍然会使用，存在违规现象，2018年德国再次发现荷兰氟虫腈超标的“毒鸡蛋”。畜禽产品蓄积氟虫腈可能的原因是经牧草、饲料或环境中土壤、水源等环节摄入，因此需要可靠的方法来确定氟虫腈及其代谢物在这些基质中的残留。
[0003]国内外研究学者开发的方法主要是实验室定量分析方法和现场定性及半定量即时检测两大类。其中实验室定量分析方法主要依靠液相色谱串联质谱法和气相色谱串联质谱法：如利用气相色谱
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质谱联用技术对鸡蛋中的氟虫腈及其代谢物残留量进行检测，检测限和定量限为0.2
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0.5ng/g、0.5
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1ng/g。上述定量方法需经一系列复杂的前处理净化过程，繁琐费时，从样品预处理到得出检测结果至少需要2天时间，同时需要大型专门的仪器设备和专业技术人员操作，一般实验室不能满足配置要求，因此十分有必要开发新的高灵敏的定量分析方法来加强对氟虫腈及其代谢物残留监督。基于此Aparicio和Yin分别开发了胶束电动毛细管色谱法和电化学分析法，同样实现了鸡蛋中氟虫腈的残留检测，其中Yin使用新型纳米材料ZnO@g
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C3N4修饰玻碳电极，由于这种电化学免疫传感器具有分析速度快、灵敏度高、特异性好等优点，使得检测灵敏度更是达到了1.5nmol/L。现场定性及半定量即时检测主要依靠胶体金免疫层析技术，如市售酶联免疫试剂盒和胶体金试纸条检出限约为3
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10μg/kg和10
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20μg/kg，但此类物质存在易受光学干扰，仅能定性或半定量分析的缺陷，不能满足动物性食品中违禁药物残留限度的要求，限制了传统免疫层析方法的应用。
[0004]为此，本专利技术提出了一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法，填补荧光免疫分析方法检测氟虫腈的空白，为食品安全检测的进一步发展提供了强有力的技术支持。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术要解决的技术问题在于提出了一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法。
[0006]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0007]一种CdTe量子点标记氟虫腈抗原的方法，包括如下步骤：向氟虫腈抗原溶液中加
入EDC溶液和NHS溶液，静置，然后加入CdTe量子点溶液，放置反应；所述CdTe量子点的粒径范围为5
‑
8nm。
[0008]可选的，取浓度范围为0.1
‑
8.5mg/mL氟虫腈抗原溶液0.1
‑
0.6mL，加入浓度范围为0.02
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0.2mol/L的EDC溶液0.02
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0.2mL，和加入浓度范围为0.02
‑
0.2mol/L的NHS溶液0.02
‑
0.2mL，室温静置10
‑
30min，然后加入浓度为0.075
×
10
‑3mol/L
‑
5.0
×
10
‑3mol/L的CdTe量子点溶液0.05
‑
0.25ml，加入缓冲液定容至2.0
‑
5.0mL，然后在温度为0
‑
6℃下放置36
‑
48h；
[0009]可选的，取浓度为5.0mg/mL氟虫腈抗原溶液0.4mL，加入浓度0.10mol/L的EDC溶液0.2ml，和加入浓度为0.10mol/L的NHS溶液0.2ml，20℃静置15min，然后加入浓度为0.150
×
10
‑3mol/L的CdTe量子点溶液0.1ml，加入pH7.4的PBS缓冲液定容至3mL，然后在温度为4℃下放置48h；
[0010]可选的，当CdTe量子点粒径是5nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.10mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为2mg/mL，加入的体积0.1ml，EDC溶液的浓度为0.04mol/L，加入的体积为0.04mL，NHS溶液的浓度为0.04mol/L，加入的体积为0.04mL；
[0011]可选的，当CdTe量子点粒径是6nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.10mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为2mg/mL，加入的体积为0.15mL，EDC溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为40μL，NHS溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为40μL；
[0012]可选的，当CdTe量子点粒径是8nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.1mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为4mg/mL，加入的体积为0.1mL，EDC溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为20μL，NHS溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为20μL。
[0013]所述的方法得到的CdTe量子点标记氟虫腈抗原在检测氟虫腈中的用途。
[0014]一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法，包括如下步骤：
[0015]包被：将氟虫腈抗体作为包被原，用包被缓冲液稀释包被原得到的包被液，然后包被酶标板、洗涤；
[0016]封闭：用封闭液封闭包被后的酶标板，洗涤；
[0017]绘制标准曲线：向封闭后的酶标板中加入系列标准浓度的氟虫腈标准溶液和CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液稀释液进行间接竞争反应，同时设置不添加氟虫腈的对照溶液，洗板，然后检测荧光度值，氟虫腈标准溶液浓度的lg值作为横坐标，以结合率为纵坐标，绘制标准曲线；所述CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液为权利要求1
‑
2任一项所述的方法标记得到；所述结合率＝氟虫腈标准溶液的荧光度值/不添加氟虫腈的对照溶液的荧光度值
×
100％；
[0018]测定：向封闭后的酶标板中加入待测样品和CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液稀释液进行间接竞争反应，洗板，然后检测荧光度值，计算待测样品的结合率，将所得结合率代入所述标准曲线计算得到待测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CdTe量子点标记氟虫腈抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：向氟虫腈抗原溶液中加入EDC溶液和NHS溶液，静置，然后加入CdTe量子点溶液，放置反应；所述CdTe量子点的粒径范围为5
‑
8nm。2.根据权利要求1所述的CdTe量子点标记氟虫腈抗原的方法，其特征在于，取浓度范围为0.1
‑
8.5mg/mL氟虫腈抗原溶液0.1
‑
0.6mL，加入浓度范围为0.02
‑
0.2mol/L的EDC溶液0.02
‑
0.2mL，和加入浓度范围为0.02
‑
0.2mol/L的NHS溶液0.02
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0.2mL，室温静置10
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30min，然后加入浓度为0.075
×
10
‑3mol/L
‑
5.0
×
10
‑3mol/L的CdTe量子点溶液0.05
‑
0.25ml，加入缓冲液定容至2.0
‑
5.0mL，然后在温度为0
‑
6℃下放置36
‑
48h；可选的，取浓度为5.0mg/mL氟虫腈抗原溶液0.4mL，加入浓度0.10mol/L的EDC溶液0.2ml，和加入浓度为0.10mol/L的NHS溶液0.2ml，20℃静置15min，然后加入浓度为0.150
×
10
‑3mol/L的CdTe量子点溶液0.1ml，加入pH7.4的PBS缓冲液定容至3mL，然后在温度为4℃下放置48h；可选的，当CdTe量子点粒径是5nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.10mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为2mg/mL，加入的体积0.1ml，EDC溶液的浓度为0.04mol/L，加入的体积为0.04mL，NHS溶液的浓度为0.04mol/L，加入的体积为0.04mL；可选的，当CdTe量子点粒径是6nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.10mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为2mg/mL，加入的体积为0.15mL，EDC溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为40μL，NHS溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为40μL；可选的，当CdTe量子点粒径是8nm时，CdTe量子点溶液的浓度为0.15
×
10
‑3mol/L，加入的体积为0.1mL，氟虫腈抗原溶液的浓度为4mg/mL，加入的体积为0.1mL，EDC溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为20μL，NHS溶液的浓度为0.08mol/L，加入的体积为20μL。3.权利要求1
‑
2任一项所述的方法得到的CdTe量子点标记氟虫腈抗原在检测氟虫腈中的用途。4.一种利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法，其特征在于，包括如下步骤：包被：将氟虫腈抗体作为包被原，用包被缓冲液稀释包被原得到的包被液，然后包被酶标板、洗涤；封闭：用封闭液封闭包被后的酶标板，洗涤；绘制标准曲线：向封闭后的酶标板中加入系列标准浓度的氟虫腈标准溶液和CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液稀释液进行间接竞争反应，同时设置不添加氟虫腈的对照溶液，洗板，然后检测荧光度值，氟虫腈标准溶液浓度的lg值作为横坐标，以结合率为纵坐标，绘制标准曲线；所述CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液为权利要求1
‑
2任一项所述的方法标记得到；所述结合率＝氟虫腈标准溶液的荧光度值/不添加氟虫腈的对照溶液的荧光度值
×
100％；测定：向封闭后的酶标板中加入待测样品和CdTe量子点标记的氟虫腈抗原溶液稀释液进行间接竞争反应，洗板，然后检测荧光度值，计算待测样品的结合率，将所得结合率代入所述标准曲线计算得到待测样品的浓度。5.根据权利要求4所述的利用CdTe量子点检测氟虫腈的荧光免疫分析方法，其特征在于，所述包被缓冲液为0.005
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0.05mol/L的pH7.0
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7.8的PBS、0.01
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0.06mol/L的pH8.4
‑
9.6的CBS、0.005
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0.02mol/L的pH7.0
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9.6的Tris
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HCl或0.005
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【专利技术属性】
技术研发人员：张金艳，熊艳，赖艳，刘丽，张志芳，李思明，彭立军，张大文，陈智辉，彭西甜，肖勇，万伟杰，彭茂民，魏益华，邱素艳，严寒，余应梅，邓贤荣，邱慧，
申请(专利权)人：江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所，
类型：发明
国别省市：