dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用。本发明专利技术提供了小分子药物dbcAMP在制备原始卵泡激活的制剂中的应用。实验表明，dbcAMP可以在体外培养小鼠卵巢时提高PI3K/mTOR信号通路上关键蛋白的磷酸化水平，从而放大这一信号级联途径的作用，进一步促进原始卵泡的激活。同时，在体内卵巢原位注射dbcAMP也可以刺激原始卵泡的激活。活。

【技术实现步骤摘要】
dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用。

技术介绍

[0002]辅助生殖技术是现阶段最有效的助孕手段。传统辅助生殖技术的一个先决条件是成熟健康的卵母细胞，这就要求女性患者卵巢内必须存在能够对促性腺激素做出响应的生长卵泡。然而，卵巢早衰、多囊卵巢综合征和罹患癌症后放/化疗等患者卵巢内并没有足够的可对促性腺激素做出响应的生长卵泡，因而难以获得成熟的卵母细胞。
[0003]为解决这一问题，必须改善传统辅助生殖技术。实际上，这部分患者卵巢内还是具有一定数目的原始卵泡资源的，因此能否利用这部分原始卵泡帮助她们生育后代引起了人们的关注。
[0004]近年来借助转基因小鼠等模型，已有多项研究证实两细胞两通路在原始卵泡激活中的关键作用，即卵母细胞中的PTEN
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PI3K/AKT信号通路以及前颗粒细胞中的mTORC1信号通路在激活的过程中均发挥了关键的作用。以现有的有关原始卵泡激活的机制为基础，经过临床转化应用研究，一种新的体外辅助生殖技术诞生了，即：原始卵泡体外激活技术(英文缩写为in vitro activation,IVA)。
[0005]IVA通过有效手段，利用药物体外激活原始卵泡，待其生长至可以响应激素的阶段，再进行传统的辅助生殖，这一技术已成功帮助部分不孕不育患者成功孕育出下一代。但是，在现有的IVA临床策略中，相关药物的安全性及成功率还是一大隐患，同时病人需经过多次腹腔镜手术，手术时间长，增加了患者的痛苦。因此，开发更加高效的原始卵泡体外激活体系显得极为重要。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用，dbcAMP可以提高PI3K/mTOR信号通路上关键蛋白的磷酸化水平，进一步促进原始卵泡的激活。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了dbcAMP在制备mTOR激动剂和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白激动剂中的应用。
[0009]本专利技术还提供了dbcAMP在制备提高mTOR和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白的磷酸化水平的制剂中的应用。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述应用中所述mTOR和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白来源于卵巢。
[0011]本专利技术还提供了dbcAMP在制备原始卵泡体外激活的药物中的应用。
[0012]本专利技术还提供了dbcAMP在制备促进原始卵泡向初级卵泡转化的药物中的应用。
[0013]本专利技术还提供了dbcAMP在制备辅助生殖的药物中的应用，所述辅助生殖包括助
孕。
[0014]本专利技术还提供了原始卵泡体外激活的药物，包括dbcAMP以及可接受的辅料和/或助剂。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述药物中所述辅料和/或助剂包括Matrigel。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述药物中所述dbcAMP的含量包括1μmol/L～10μmol/L。
[0017]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述药物中所述dbcAMP的含量为10μmol/L。
[0018]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述药物中所述辅料和/或助剂包括黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、等渗调节剂、增溶剂、助溶剂、防腐剂、着色剂、助悬剂、润湿剂、乳化剂和/或表面活性剂。
[0019]本专利技术还提供了原始卵泡的激活方法，将上述药物注射进卵巢中。
[0020]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述原始卵泡的激活方法还包括将上述药物注射进卵巢囊中。
[0021]本专利技术还提供了原始卵泡体外激活方法，取卵巢组织于体外激活试剂中培养；
[0022]所述体外激活试剂包括dbcAMP。
[0023]本专利技术有如下效果：
[0024]1、添加dbcAMP体外培养小鼠卵巢能够促进其中存在的原始卵泡的激活。研究发现，小鼠卵巢组织中mTOR、PI3K/AKT信号通路关键蛋白水平的磷酸化形式提高，但其总蛋白均不变；添加dbcAMP培养新生小鼠卵巢过程中，其总的卵泡数不变但激活卵泡数增加；
[0025]2、dbcAMP能够通过卵巢原位注射在体内促进原始卵泡的激活，而不影响卵泡总数。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0027]图1示本专利技术实施例中新生2日龄小鼠卵巢添加10μmol/L的dbcAMP，一天后收集样本检测PI3K/AKT及mTOR信号通路上关键蛋白的表达；其中左边为所述关键蛋白的总蛋白；右边为磷酸化的所述关键蛋白；“Control”为不添加dbcAMP的对照组；结果显示：新生小鼠卵巢体外经过dbcAMP培养后结果发现dbcAMP虽然不影响这些分子总蛋白的表达量，但是却导致其活性形式均发生显著上调，提示dbcAMP促进原始卵泡的激活是通过PI3K/AKT、mTOR通路的活化引起；
[0028]图2示本专利技术中添加dbcAMP培养新生小鼠卵巢中卵泡的影响；其中A为卵巢组织切片；B为dbcAMP培养5天对卵泡总数以及激活生长卵泡数目的影响；C为dbcAMP在第3、5、7天对总卵泡数的影响；D为dbcAMP在第3、5、7天对卵泡激活比例的影响；研究发现添加dbcAMP培养新生小鼠卵巢过程中，其总的卵泡数没有显著差异但生长卵泡数增加，说明添加dbcAMP培养小鼠卵巢能够促进原始卵泡激活；新生小鼠卵巢体外培养3天、5天以及7天的结果分别进行统计，结果均发现：dbcAMP可显著促进原始卵泡激活，但不影响卵巢中的总卵泡数目；标尺：50μm；
[0029]图3示本专利技术实施例中23日龄小鼠卵巢原位注射dbcAMP两周后，收集卵巢组织进
行组织切片染色并统计各级卵泡数目；其中，A为卵巢组织切片；B为dbcAMP对体内总卵泡数的影响；C为dbcAMP对体内生长卵泡数的影响；结果显示：dbcAMP在体内也可显著促进原始卵泡的激活，而不影响卵泡总数；标尺：100μm。
具体实施方式
[0030]本专利技术公开了dbcAMP在制备原始卵泡体外激活剂中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0031]目前关于cAMP在雌性生殖系统中的作用多关注于其与物卵母细胞减数分裂进程的关系。处于生长卵泡中的卵母细胞胞质内高水平的cAMP可维持卵母细胞第一次减数分裂长期处于阻滞状态，只有当cAMP的合成被下调或其被降解时，卵母细胞才能恢复减数分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.dbcAMP在制备mTOR激动剂和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白激动剂中的应用。2.dbcAMP在制备提高mTOR和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白的磷酸化水平的制剂中的应用。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述mTOR和/或PI3K/AKT信号通路关键蛋白来源于卵巢。4.dbcAMP在制备原始卵泡体外激活的药物中的应用。5.dbcAMP在制备促进原始卵泡向初级卵泡转化的药物中的应用。6.dbcAMP在制备辅助生...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏国良，王超，郑文影，张拓，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：