缺氧血液储存和病原体灭活方法技术

本公开涉及一种用于减少血液制品病原体的方法，其包括：i)从血液制品中除去氧气；ii)从所述血液制品中减少血液病原体t：添加氨司他林(amustaline)(S

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】缺氧血液储存和病原体灭活方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月31日提交的美国临时申请第62/928,714号的优先权。该申请的全部内容通过引用并入本文。


[0003]本公开涉及改善用于输血医学的血液和血液制品的质量和安全性的方法。

技术介绍

[0004]血液和血液成分用于输血是目前医学中的常见做法，但是由于暴露于免疫原性和致病性污染物的潜在可能性而给患者带来风险。将收集的血液和血液成分储存长达数周的做法加剧了这种风险。通常通过过滤处理全血以除去白细胞(白细胞减少)，然后离心以分离血浆、血小板和红细胞的3种主要血液成分。然后通常将白细胞减少的包装红细胞(LRpRBC)悬浮在添加剂溶液中，如美国的AS
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1()、AS
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3()、AS
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5()和AS
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7()，或欧盟的SAGGM或PAGGSM，以延长冷藏期间的存储寿命，使其长达42天。血浆通常在静脉切开和分离后24小时内冷冻(“新鲜冷冻血浆
”‑‑
FFP或FP24)。FFP在使用前解冻，必须在解冻后5天内使用。通过单采血液成分术或通过汇集从多个全血单位分离的血小板(PLT)级分来收集PLT。通过单采血液成分术收集的PLT通常悬浮在添加剂溶液中，例如欧盟(在美国内尚不存在)的()或PAS
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F()。PLT在室温下保持搅拌以防止PLT活化，并且必须在收集后5至7天内使用。虽然由于储存条件，所有血液成分都易受供体病毒和细菌污染，但PLT比其他血液成分更容易受到细菌污染和增殖的影响。
[0005]本领域的最新进展已经提供了通过利用UV光在储存之前用光敏剂照射血液成分来灭活细菌和病毒病原体(参见例如基于补骨脂素的系统、基于核黄素的系统)，也可以不使用光敏剂(UV
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血小板系统)。这些系统交联并灭活致病物种中的DNA，从而降低它们对患者造成的风险。系统使用氨托沙林HCl(一种合成的补骨脂素)和以3J/cm2的辐爆量传递的UV
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A光来交联病原体DNA，并在处理后除去或减少残留的氨托沙林和光产物。系统使用核黄素和位于313nm附近的UV光来靶向核黄素
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核苷酸复合物的吸收。没有光敏剂的系统通常使用254nm的UV
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C光。一些光敏剂和光产物在这些系统中的长期影响仍有待确定。
[0006]本领域的其他进步包括使用S
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303(Cerus公司，康科德，加州)，一种基于氮芥喹吖因的烷基化剂，其包括易碎的锚定基团，以交联核酸并灭活感染性细菌和其他病原体(参见Henschler等人，“开发用于红细胞浓缩物的S
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303病原体灭活技术(Development of the S
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303pathogen inactivation technology for red blood cell concentrates)”,《输血医学与血液疗法(Transfus Med Hemother)》,38:33
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42(2011)(“Henschler 2011”))。不受理论限制，认为有两种反应形成S
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303病原体灭活过程的基础。第一反应是通过与S
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303分子反应形成共价DNA和RNA加合物。该第一反应约在30分钟内完成。第二反应是将过量的S
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303降解为毒性较小的副产物S
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300。该分解与加合物反应同时发生，并在16
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18小时内完成。
[0007]虽然不限于任何特定理论，但认为与S
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303形成共价DNA和RNA加合物是基于分子与核酸聚合物(例如DNA或RNA)的嵌入。如目前所理解的，当将S
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303添加到RBC中时，由于其两亲性特征，它迅速(在数秒至数分钟内)通过膜(包括细胞和病毒包膜的膜)，并插入核酸的螺旋区域。假设分子上易碎锚的存在通过分子上带正电的胺基吸引DNA或RNA的核酸链中的负电荷而有助于插入过程。紧密接近的S
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303分子允许快速发生热环加成反应，将S
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303分子共价键合到DNA或RNA上。据信共价连接阻止了复制或翻译过程的发生，并进一步阻止了其他病原体的产生。在形成共价加合物的过程中，通过水解除去易碎锚，产生毒性较小的化合物S
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300。
[0008]S
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303自发分解为毒性较低的S300是病原体灭活过程中的第二反应。通常将过量的S
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303(约0.2mM)添加到RBC中以提供足够的试剂以与样品中的所有DNA和RNA完全反应。但是，S
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303是一种有毒化合物，因此为了安全地输送所得产品，必须除去残留的S
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303。在Cerus病原体灭活过程中，这主要通过使S
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303降解为S
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300(一种毒性显着较低的化合物)来实现。降解过程通过水解发生；当S
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303试剂最初与RBC混合时，S
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303的水解由pH从低变高的转变触发。残留S
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303的分解动力学在高于10nM/L的浓度下快速进行，半衰期为约20分钟。
[0009]减少红细胞悬液中残留S
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303的标准程序是使S
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303降解18
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24小时。然后，将红细胞悬液离心以除去残留的S
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303分子。最后，将红细胞组合物重新悬浮在红细胞储存溶液(即添加剂溶液，包括SAGM)中。用新鲜的添加剂溶液替换含有S
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303的储存溶液的最后一步称为“体积交换步骤”。该最后的体积交换步骤进一步减少了残留的S
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303。在该体积交换步骤不存在的情况下，很难在所有红细胞产品中始终获得低于1nmol的残留量。
[0010]如目前所理解，S
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303还具有与RBC单元中的其它亲核试剂反应的潜力，所述RBC单元包括小分子(如磷酸盐)、水和大分子(如蛋白质)。虽然不限于任何特定理论，但为了减少与蛋白质的这些非特异性相互作用，在病原体灭活过程中将20mM谷胱甘肽(GSH)同时添加到RBC中。(参见Henschler 2011)。谷胱甘肽(GSH)是天然存在的抗氧化剂，存在于大多数细胞中，细胞内浓度为约5mM。如目前所理解的，GSH仅在细胞外血浆空间中分布，而S
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303在膜上扩散并在细胞内外平衡。这允许GSH淬灭S
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303的细胞外反应而对病原体灭活没有显着影响(参见Olcina等人，“缺氧和DNA损伤反应(Hypoxia and the DNA damage response)”《癌症药物发现和开发中的缺氧和癌症(Hypoxia and本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于减少血液制品病原体的方法，其包括：从血液制品中除去氧气以制备氧气减少的血液制品；从所述血液制品中减少血液病原体以制备氧气减少病原体减少的血液制品，其包括：添加氨司他林(amustaline)(S
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303)至最终浓度为0.2毫摩尔(mM)；以及添加谷胱甘肽(GSH)至浓度为20mM；以及将S
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303降低至低于1nmol/L的浓度，其包括在氧气减少的条件下将包括所述S
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303和GSH的所述氧气减少的血液制品孵育6小时或更短时间。2.根据权利要求1所述的方法，其还包括在缺氧条件下储存所述氧气减少病原体减少的血液制品。3.根据权利要求1所述的方法，其还包括从所述血液制品中减少二氧化碳。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述血液制品是全血、白细胞减少的全血或包装红细胞。5.根据权利要求1所述的方法，其还包括在所述添加S
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303以形成包装红细胞之前离心所述血液制品。6.根据权利要求5所述的方法，其还包括将所述包装红细胞与选自由AS
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1、AS
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3、AS
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5、AS
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7、SAGM和PAGGSM组成的组的添加剂溶液混合。7.根据权利要求5所述的方法，其还包括将所述包装红细胞与添加剂溶液5(AS
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5)混合。8.根据权利要求1所述的方法，其中血液病原体减少了60％至100％。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述从所...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里，
申请(专利权)人：希玛奈克斯特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：