一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用，所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，命名为LJS19051

【技术实现步骤摘要】
一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]猪增生性回肠炎(Porcine proliferative enteropathy,PPE)是由胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis,LI)感染引起、在世界各地猪场中普遍存在的一种肠道疾病，以生长育肥猪生长发育缓慢，料肉比下降为主要特征，给养猪业带来严重经济损失。据报道，美国每年因PPE造成的经济损失高达2000万美元。据美国学者Moller报道，回肠炎对每头感染猪的经济损失至少为1.531美元。
[0003]临床上对于PPE的防控，目前主要依赖疫苗免疫预防和药物治疗。研究表明，高剂量的泰妙菌素、泰乐菌素、金霉素、林可霉素和喹乙醇等药物对LI有效。迄今为止，全球共有2种商品化PPE疫苗，一种为勃林格殷格翰公司生产的弱毒疫苗另一种为默克动物保健公司生产的灭活疫苗Ileitis。已有研究表明，两种疫苗对预防PPE均有一定的免疫保护效果。Jacobs等通过对Lawsonia有效性进行评价，发现该疫苗无论单独使用，还是与PCV M Hyo混合免疫接种，均能够提高猪群日增重、降低粪便排菌数量、减轻组织病理损伤等，对猪群具有较好的免疫保护作用。
[0004]在国内，由于国外PPE商品化疫苗价格昂贵，加之PPE为一种慢性损耗性疾病，猪群感染后多呈亚临床症状，死亡率低，因此并未引起养殖户的高度重视，从而限制了商品化疫苗在中国的使用，而抗菌药物已成为国内兽医或养殖户控制该病的首选方法。研究表明，对LI有效的药物可在短时间内控制PPE，但由于LI为严格胞内寄生菌，无法在体外无细胞培养基上生长，导致其分离培养极其困难。因此，当爆发PPE时，很难像其他细菌一样，在短时间内通过药敏试验筛选出对LI敏感的药物。此外，随着农业农村部禁抗减抗政策的实施，无抗饲养将成为未来养猪业发展的必然趋势。因此，研制安全、有效的具有自主知识产权的PPE疫苗对于PPE的有效防控具有重要意义。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对上述技术问题，本专利技术提供了一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用，制备的胞内劳森菌弱毒疫苗，为猪场PPE有效防控奠定基础。
[0006]技术方案：为了达到上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0007]一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株，所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，命名为LJS19051
‑
P80，保藏日期为2022年5月12日，保藏编号为CCTCC NO：V202239。
[0008]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防动物感染胞内劳森菌的药物中的应用。
[0009]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防猪感染胞内劳森菌的药物中的应用
[0010]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防猪增生性回肠炎的药物中的应用。
[0011]本专利技术还提供了一种胞内劳森菌弱毒疫苗，其有效成分为所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株。
[0012]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0013](1)LJS19051传代致弱；
[0014](2)评价不同代次LJS19051致弱效果，选择第80代LJS19051；
[0015](3)利用上述第80代LJS19051，制备所述胞内劳森菌弱毒疫苗。
[0016]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗在制备预防动物感染胞内劳森菌的药物中的应用。
[0017]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗在制备预防猪感染胞内劳森菌的药物中的应用
[0018]所述的胞内劳森菌弱毒疫苗在制备预防猪增生性回肠炎的药物中的应用。
[0019]本专利技术制备了一种胞内劳森菌弱毒疫苗，并在小鼠体内评价了该疫苗免疫保护效果，为猪场PPE的有效防控奠定基础。
[0020]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下优势：
[0021]1、本专利技术制备了一种胞内劳森菌弱毒疫苗，通过体外传代致弱，发现第80代的候选菌株对小鼠的毒力最小，且比德国商品化弱毒疫苗更加安全；
[0022]2、本专利技术制备的弱毒疫苗，可通过口服免疫方式对动物进行免疫，无需佐剂，且无需多次注射即可达到较好的免疫保护效果，此外，与其他类型疫苗相比，它所需抗原剂量小，还能够诱导机体产生黏膜免疫应答；
[0023]3、本专利技术所得胞内劳森菌弱毒疫苗。后续该疫苗还可用于免疫猪，为猪回肠炎的有效防控奠定基础。
附图说明
[0024]图1为不同代次LJS19051对小鼠生长速度的影响；
[0025]图2为不同代次LJS19051攻毒后粪便排菌量测定结果；
[0026]图3为不同代次LJS19051攻毒后21天小鼠回肠组织H&E染色结果；
[0027]图4为不同代次LJS19051攻毒后21天小鼠回肠组织免疫荧光染色结果；
[0028]图5为PPEV对小鼠生长速度的影响；
[0029]图6为PPEV对小鼠粪便中LI排菌量的影响；
[0030]图7为PPEV对小鼠血清中特异性IgG抗体水平的影响；
[0031]图8为PPEV对小鼠回肠组织病理病变观察结果；
[0032]图9为PPEV对小鼠回肠组织LI定植情况测定结果；
[0033]图10为PPEV对小鼠回肠组织中sIgA含量测定结果；
[0034]图11为PPEV对小鼠血清中IFN
‑
γ含量测定结果；
[0035]图12为PPEV对小鼠肠黏膜屏障功能的影响，其中，A为PPEV对小鼠肠屏障通透性的影响；B为qPCR分析PPEV免疫攻毒后对ZO
‑
1和Occludin基因转录水平的影响；C为蛋白免疫印迹分析PPEV对攻毒小鼠回肠Occludin和MUC2蛋白表达水平的影响。数据表示为means
±
SEM，试验重复3次，通过方差分析，与阳性攻毒对照组相比，*P＜0.05和**P＜0.01；
[0036]图13为PPEV攻毒后对小鼠肠道抗氧化能力的影响，其中，A为SOD活性测定结果；B为MDA含量测定结果。数据表示为means
±
SEM，试验重复3次。通过方差分析，与阳性攻毒对
照组相比，*P＜0.05表示差异显著；
[0037]图14为PPEV对小鼠回肠组织中消化、吸收酶活性的影响，其中，A为α
‑
AMS活性测定结果；B为LPS活性测定结果；C为AKP活性测定结果。数据表示为means
±
SEM，试验重复3次。通过方差分析，与阳性攻毒对照组相比，*P＜0.05和**P＜0.01。
具体实施方式
[0038]为了使本专利技术更加容易理解，下面结合具体实例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株，其特征在于，所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，命名为LJS19051
‑
P80，保藏日期为2022年5月12日，保藏编号为CCTCC NO：V202239。2.权利要求1所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防动物感染胞内劳森菌的药物中的应用。3.权利要求1所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防猪感染胞内劳森菌的药物中的应用。4.权利要求1所述的胞内劳森菌弱毒疫苗菌株在制备预防猪增生性回肠炎的药物中的应用。5.一种胞内劳森菌弱毒疫苗，其特征在于，其有效成分为权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：范红结，肖宁，周红，李剑男，蔺辉星，
申请(专利权)人：南京昌吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：