哈茨木霉HB40609及其应用制造技术

本发明专利技术提供的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609，该菌株于2022年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.40142；本发明专利技术提供哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在防治番茄叶片枯萎病中、制备防治尖孢镰刀菌所致病害的生防制剂中、制备防治番茄叶片枯萎病的制剂中的均有应用；本发明专利技术提供的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609，可以有效抑制尖孢镰刀菌；经过处理的番茄幼苗表现出对尖孢镰刀菌较显著地抗病效果；同时，在测量叶片中叶绿素荧光相关参数以及激素含量后发现，哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609菌株能够保护番茄幼苗中光合系统II并可以诱导植株激素含量变化，以提高抗病性。以提高抗病性。以提高抗病性。

【技术实现步骤摘要】
哈茨木霉HB40609及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物和生物肥料
，具体涉及哈茨木霉HB40609及其应用。

技术介绍

[0002]尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum.)是引起番茄枯萎病的病原菌，传播范围广泛，难以根除。目前生产中主要使用大量化学药剂杀灭病原菌，但带来了农产品农药残留和危害生态环境的负面影响，同时使病原菌的抗药性提高。因此，寻求快速有效地生物防治番茄枯萎病的方法越来越受到人们的重视。
[0003]木霉菌是广泛存在于自然界的一种真菌。木霉菌(Trichoderma spp.)属于半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，丛梗孢科。木霉菌广泛存在于土壤、根围、叶围、种子等生态环境中，也是一种优良的生防菌。由于木霉菌的广泛适应性、广谱性和多机制性，因此该菌一直是植物病害生物防治研究的重点对象，但是目前并没有一种可显著抗番茄枯萎病并提高番茄产量的木霉菌应用。

技术实现思路

[0004]专利技术目的：本专利技术目的在于针对现有技术的不足，提供一种哈茨木霉(Trichodermaharzianum)及其应用，本专利技术的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)具有对尖孢镰刀菌的抑制作用，并且不仅可以保护番茄幼苗中光合系统II，提高植物的抗病性。
[0005]技术方案：本专利技术所述的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)，该菌株于2022年3 月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏编号为CGMCC No.40142。
[0006]本专利技术提供哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在防治番茄叶片枯萎病中的应用。
[0007]本专利技术提供哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在保护番茄植株光合系统的应用。
[0008]本专利技术提供哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在制备防治尖孢镰刀菌所致病害的生防菌剂的应用。
[0009]本专利技术提供哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在制备防治番茄叶片枯萎病的生防菌剂的应用。
[0010]本专利技术提供一种生防菌剂，包含有所述的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) HB40609。
[0011]本专利技术提供一种生防菌剂，所述菌剂的类型为分生孢子洗脱液。
[0012]本专利技术提供一种防治番茄叶片枯萎病的方法，将所述的分生孢子洗脱液于番茄幼苗移栽前进行蘸根。
[0013]进一步地，分生孢子洗脱液的活菌浓度为1x107个/ml。
[0014]本专利技术提供一种制备生防菌剂的方法，所述分生孢子洗脱液的制备方法如下，
[0015]步骤1、将哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609菌株接种在PDA平板上，培养条件：温度为25℃～28℃，光照条件下培养3d，得到单菌落；
[0016]步骤2、在所述单菌落的边缘取出菌丝块接种到PDA平板培养7d，培养条件为： 25℃、光照，得到分生孢子；
[0017]步骤3、添加含0.5％Tween
‑
20的无菌水后刮洗菌落表面的分生孢子，过滤菌丝，得到所述分生孢子洗脱液。
[0018]有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提供了一种具有生防作用的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609菌株；(2)本专利技术提供的哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)HB40609，可以有效抑制尖孢镰刀菌；经过哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)HB40609菌株与尖孢镰刀菌混合孢子液处理的番茄幼苗表现出对尖孢镰刀菌较显著地抗病效果；(3)同时，在测量叶片中叶绿素荧光相关参数以及激素含量后发现，哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609菌株能够保护番茄幼苗中光合系统II并可以诱导植株激素含量变化，以提高抗病性；(4)本专利技术提供的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609可以调节植株体内抗性激素变化，诱导番茄幼苗防御反应，提高抗病性，促进植株健壮生长。
附图说明
[0019]图1为哈茨木霉HB40609菌株与尖孢镰刀菌在PDA培养基上共同培养5天对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制作用；
[0020]图2为不同孢子洗脱液对番茄幼苗浸根后，番茄植株表型差异变化；
[0021]图3为不同孢子洗脱液对番茄幼苗浸根后，植株病情指数；
[0022]图4为不同孢子洗脱液对番茄幼苗浸根后，植株发病率；
[0023]图5为浸根后各处理番茄叶片叶绿素荧光含量差异。
[0024]图6为浸根后各处理番茄植株内防御性酶活性和H2O2含量变化；
[0025]图中Control表示清水处理，F.oxy表示尖孢镰刀菌处理，609&F.oxy表示哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)HB40609菌株和尖孢镰刀菌混合处理。
具体实施方式
[0026]下面通过附图对本专利技术技术方案进行详细说明，但是本专利技术的保护范围不局限于所述实施例。
[0027]实施例1哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609的分离、纯化、鉴定和保藏
[0028]1、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609的分离、纯化
[0029]从田间取回含有木霉的土壤，把采集的土样自然晾干后辗碎，过筛。称取10g土样置于盛有90mL无菌水的烧瓶中，用涡旋仪充分振荡.吸取10mL悬浮液于90mL无菌水中稀释，再从稀释的悬浮液中吸取10mL于90mL无菌水中稀释，如此类推，稀释至体积分数为10
‑3、10
‑4、10
‑5。用微量移液枪从各含量的土壤悬浮液中吸取0.1mL 悬浮液分散滴于马丁氏——孟加拉红平板上，再用灭菌的三角玻璃棒涂匀，静置20 min后于25℃的恒温培养箱中倒置培养，菌落形成后立即纯化。
[0030]将哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609菌株接种在PDA平板上培养，得到
单菌落，所述培养的温度优选为25℃，时间优选为3d。本专利技术对所述PDA平板的组成并没有特殊限定，优选利用本领域的常规平板培养基即可。
[0031]实施例中所用的PDA平板的配方包括：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉10g，补充蒸馏水至1000ml。在制备所述PDA平板时，本实施例将洗净后去皮的马铃薯切片，加水煮沸约半小时，用纱布滤去马铃薯，然后加入葡萄糖，将琼脂粉加水搅拌均匀，加入上述溶液中，再加水定容，搅拌溶解后分装灭菌。
[0032]短期保存的菌种于PDA斜面试管中，保存于4℃冰箱中；长期保存的菌种放置于
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609，该菌株的保藏编号为CGMCC No.40142。2.如权利要求1所述的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在防治番茄叶片枯萎病中的应用。3.如权利要求1所述的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在保护番茄植株光合系统的应用。4.如权利要求1所述的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HB40609在制备防治尖孢镰刀菌所致病害的生防菌剂的应用。5.如权利要求1所述的哈茨木霉(T...

【专利技术属性】
技术研发人员：张迎迎，王前程，陈捷，朱为民，刘雅慧，杨学东，张辉，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：