乳酸菌株及引物组制造技术

本发明专利技术公开了一种乳酸菌株及引物组，其中该乳酸菌株为Lactobacillusparacasei subsp.paracasei NTU 101，其寄存于德国微生物菌种保藏中心，寄存编号为DSM 28047，并且该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101具有SEQ ID NO:1的一核苷酸序列。本发明专利技术提供了乳酸菌株L.paracasei subsp.paracasei NTU 101的核苷酸序列及其引物组，使得相关技术人员于L.paracaseisubsp.paracasei NTU 101的菌株鉴别上可以有所依据；并且，进一步地，相关技术人员还可通过DNA分子识别标记来快速地鉴定NTU 101菌株，而不需要培养分离菌株或者培养活菌。活菌。活菌。

【技术实现步骤摘要】
乳酸菌株及引物组
[0001]本申请是中国国家申请号为201410468601.5、申请日为2014年09月15 日、专利技术名称为“乳酸菌株及引物组”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种乳酸菌株，尤指关于Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101的一种乳酸菌株及引物组。

技术介绍

[0003]「乳酸菌」是指能够代谢醣类，并产生50％以上乳酸的细菌，例如：乳酸 杆菌(Lactobacillus)、键球菌(Streptococcus)、念球菌(Leuconostoc)等。人类饮用 酦酵乳品历史非常悠久，所以，乳酸菌一直被认为是非常安全的菌种(GRAS, generally recognized as safe)，是最具代表性的肠内有益菌。人类饮用酦酵乳 品历史非常悠久，所以，乳酸菌一直被认为是非常安全的菌种(GRAS,generallyrecognized as safe)，是最具代表性的肠内有益菌。
[0004]乳酸菌是「益生菌」中最重要的一群，益生菌的定义为「某一种或多种微 生物当喂食予人类时可增进人类肠内菌丛的质量」。其中，乳酸菌能增进肠内 菌丛质量的作用机转有以下几种：
[0005](1)生产有机酸、降低肠pH；
[0006](2)和有害菌竞争养份；
[0007](3)附着于肠粘膜上皮，减少有害菌增殖场所；以及
[0008](4)产生抗菌物质。
[0009]目前国内许多酦酵乳产品，皆实施大规模人体饮用实验，证明其产品增进 肠道有益菌的效果，且通过保健食品认证。
[0010]Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101由中国台湾大学微生物 与生化学研究所所长潘子明教授及其研发团队所研发的一个优良的本土乳酸 菌株。目前，许多文献已证实L.paracasei subsp.paracasei NTU 101具有改善 肠胃道菌相、降血压、降血脂、降胆固醇、抗过敏等多种保健功效，深具市场 潜力，已有多种产品上市或准备上市。
[0011]虽然，L.paracasei subsp.paracasei NTU 101已成功商品化，但是仍缺乏 菌株鉴别与申请专利保护所需的DNA分子识别标记。DNA分子识别标记为 可供鉴别特定菌株的DNA序列或是DNA多型性图谱。相较于传统的生化测 试，以DNA分子识别标记来鉴定菌株具有以下优点：具有不需要培养分离菌 株、不需要培养活菌、以及适用于加工制品。

技术实现思路

[0012]在下文中给出关于本专利技术的简要概述，以便提供关于本专利技术的某些方面的 基本理解。应当理解，这个概述并不是关于本专利技术的穷举性概述。它并不是意 图确定本专利技术的
关键或重要部分，也不是意图限定本专利技术的范围。其目的仅仅 是以简化的形式给出某些概念，以此作为稍后论述的更详细描述的前序。
[0013]本专利技术的主要目的，在于提供关于L.paracasei subsp.paracasei NTU 101 的一种乳酸菌株及引物组，使得相关技术人员于L.paracasei subsp.paracaseiNTU 101的菌株鉴别上可以有所依据；并且，进一步地，相关技术人员还可通 过DNA分子识别标记来快速地鉴定NTU 101菌株，而不需要培养分离菌株 或者培养活菌。
[0014]因此，为了达成上述本专利技术的主要目的，本专利技术的专利技术人提出一种乳酸菌 株，为Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101，且其寄存于德国微生 物菌种保藏中心，寄存编号为DSM 28047，其中该Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101具有SEQ ID NO:1的一核苷酸序列。其中，该乳酸菌株可 进一步制成一纯乳酸菌粉或一复合乳酸菌粉，且成人每天摄取至少4克的该 纯乳酸菌粉或该复合乳酸菌粉有助于改善肠内至少一细菌的菌相、减低胃黏膜 损伤面积、减低胃黏膜损伤指数、以及降低胃黏膜中组织胺浓度。
[0015]进一步地，该核苷酸序列通过逢机增殖多型性DNA(Random Amplificationof Polymorphic DNA,RAPD)以及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)的技术进而增幅多条引物增幅而得。
[0016]进一步地，该多条引物包括具有SEQ ID NO:2的一核苷酸片段与具有SEQID NO:3的一核苷酸片段。
[0017]进一步地，通过将该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101与 一碳源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillusparacasei subsp.paracasei NTU 101会产生乳酸。
[0018]进一步地，该碳源可为下列任一种：葡萄糖、半乳糖、D
‑
核糖、木糖、果 糖、α
‑
乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、肌醇、山梨糖醇、D
‑
甘露糖 醇、柠檬酸、糊精、淀粉、以及糖蜜。
[0019]进一步地，通过将该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101与 一氮源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillusparacasei subsp.paracasei NTU 101会产生乳酸。
[0020]进一步地，该氮源为下列任一种：酵母萃取物、牛肉膏、蛋白胨、大豆胨、 胰蛋白、玉米浆、酪蛋白、尿素、柠檬酸铵、以及硫酸铵。
[0021]并且，为了达成上述本专利技术的主要目的，本专利技术的专利技术人提出一种用以鉴 别前述的Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101乳酸菌株的引物组， 该引物组为：(1)A3
‑
5F3 CGCCGAACGCGACTTACATC(SEQ ID NO:4)；或 (2)A3
‑
5R3 GGCAAATTTAAACTTGCCTTCAACG(SEQ ID NO:4)。其中，通 过逢机增殖多型性DNA以及聚合酶链式反应的技术可将该A3
‑
5F3引物增幅 制成具有SEQ ID NO:1的该核苷酸序列。与现有技术相比，本专利技术的有益效 果是：
[0022]本专利技术提供了L.paracasei subsp.paracasei NTU 101的一种乳酸菌株及引 物组，使得相关技术人员于L.paracasei subsp.paracasei NTU 101的菌株鉴别 上可以有所依据；并且，进一步地，相关技术人员还可通过DNA分子识别标 记来快速地鉴定NTU 101菌株，而不需要培养分离菌株或者培养活菌。
附图说明
[0023]为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
28047，并具有SEQ ID NO:1的一核苷酸序列；并且，该核苷酸序列通过逢机增殖多型性DNA(Random Amplification of Polymorphic DNA,RAPD)以及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的技术进而增幅多条引物增幅而得。12.如权利要求11所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，该多条引物包括具有SEQ ID NO:2的一核苷酸片段与具有SEQ ID NO:3的一核苷酸片段。13.如权利要求10所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，通过将该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101与一碳源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101会产生乳酸。14.如权利要求13所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，该碳源可为下列任一种：葡萄糖、半乳糖、D
‑
核糖、木糖、果糖、α
‑
乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、肌醇、山梨糖醇、D
‑
甘露糖醇、柠檬酸、糊精、淀粉、以及糖蜜。15.如权利要求10所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，通过将该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101与一氮源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101会产生乳酸。16.如权利要求15所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，该氮源为下列任一种：酵母萃取物、牛肉膏、蛋白胨、大豆胨、胰蛋白、玉米浆、酪蛋白、尿素、柠檬酸铵、以及硫酸铵。17.如权利要求11所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，该多条引物为：(1)A3
‑
5F3 CGCCGAACGCGACTTACATC(SEQ ID NO:4)；或(2)A3
‑
5R3 GGCAAATTTAAACTTGCCTTCAACG(SEQ ID NO:5)。18.如权利要求17所述的乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善肠内菌相的乳酸菌粉的用途，其特征在于，通过逢机增殖多型性DNA以及聚合酶链式反应的技术可将该A3
‑
5F3引物增幅制成具有SEQ ID NO:1的该核苷酸序列。19.一种乳酸菌株Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101于制造改善胃粘膜损伤的乳酸菌粉的用途，其其特征在于：所述乳酸菌粉包括由所述乳酸菌Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NTU 101制成的纯乳酸菌粉，并包含活菌数量介于3x10
9 CFU/g至1x10
11
CFU/g之间的Lactobacillus paracasei subsp.paracasei N...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘子明，林志辉，施宗伟，
申请(专利权)人：晨晖生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：