一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA及其应用制造技术

本发明专利技术属于免疫疾病和感染类疾病治疗领域，具体的涉及一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA及其应用。所述鼠源lncRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明专利技术在细胞水平阐释了其抑制炎性巨噬细胞活化的功能及相关机制，并在人源巨噬细胞中验证了其抗炎作用，结果为HTNV等病毒感染所致细胞因子风暴的临床治疗提供了新思路。床治疗提供了新思路。床治疗提供了新思路。

A murine lncrna that negatively regulates the activation of inflammatory macrophages and its application

【技术实现步骤摘要】
一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA及其应用


[0001]本专利技术属于免疫疾病和感染类疾病治疗领域，具体的涉及一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA及其应用。

技术介绍

[0002]急性病毒感染所致的新发/再发传染性疾病(emerging/re
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emerging infectious disease,EID/REID)以其发病迅速、传播广泛、死亡率高等特点严重威胁世界公共卫生安全。汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)经由啮齿类动物传播，其感染小鼠并不致病，但感染人体可引起重症肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)，死亡率高达15％。目前针对HTNV感染所致的HFRS尚无特异性治疗药物。细胞因子风暴及继发免疫病理损伤是导致HFRS疾病进展及重症患者死亡的主要原因。阻断细胞因子风暴发生是HFRS的临床治疗策略之一，但尚不清楚何种因素决定急性病毒感染后机体免疫应答的程度和走向。
[0003]巨噬细胞具有高度的可塑性和异质性，近期研究表明不同活化模式的巨噬细胞对机体炎症应答的转归具有重要调控作用。M1型巨噬细胞(炎性巨噬细胞)可产生TNFα、IL
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1β等炎性细胞因子，促进炎症反应进程并导致机体免疫病理损伤，其中NF
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κB信号是介导M1活化的关键分子机制；M2型巨噬细胞则通过分泌IL
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10、TGFβ等抑炎因子阻断炎症反应，促进组织损伤修复。炎性巨噬细胞活化失控诱导机体细胞因子风暴，该过程是HFRS发病的病理基础。研究炎性巨噬细胞活化的调控机制对HFRS临床防治具有重要意义。长链非编码RNA(long non
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coding RNA,lncRNA)是基因转录产生的长度大于200nt且不具有编码蛋白功能的RNA分子，近年来越来越来的研究表明lncRNA对巨噬细胞活化模式具有关键的调控作用。
[0004]炎性巨噬细胞过度活化是介导细胞风暴发生的重要免疫因素，也是推动HFRS疾病进展的关键环节。NF
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κB信号是促进炎性巨噬细胞活化、介导TNFα及IL
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1β等炎性细胞因子产生的关键信号通路；以NF
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κB信号为靶点调控巨噬细胞活化，对以过度炎症反应为病理特征的疾病，如脓毒症等，具有潜在的治疗作用。既往研究提示炎性刺激可以诱导机体多种负向调控分子的表达，如VEGFR
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3、A20等升高，这些分子发挥重要的内源性保护作用；然而，这些负向调控分子在炎症进展过程中已经处于较高的表达水平，外源性补充上述分子起到的保护作用有限。探索物种特异性抗炎分子及相关机制可为新型抗炎药物的研发提供思路。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA及其应用。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]第二方面，本专利技术提供一种过表达载体，其含有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。
[0008]第三方面，本专利技术提供一种重组慢病毒，含有所述的过表达载体。
[0009]第四方面，本专利技术提供所述的鼠源lncRNA或所述的过表达载体或所述的重组慢病
毒在制备抑制炎性巨噬细胞活化的药物中的应用。
[0010]第五方面，本专利技术提供所述的鼠源lncRNA或所述的过表达载体或所述的重组慢病毒在制备治疗炎性巨噬细胞过渡活化所致疾病的药物中的应用。
[0011]第六方面，本专利技术提供一种药物，其含有所述的鼠源lncRNA或所述的过表达载体或所述的重组慢病毒，所述药物具有如下功能的至少一种：
[0012]1)抑制炎性巨噬细胞活化；
[0013]2)治疗炎性巨噬细胞过渡活化所致疾病。
[0014]本专利技术具有如下有益效果：
[0015]本专利技术鉴定出一种鼠源特异性lncRNA分子(人体不存在该lncRNA同源的分子)lncRNA 30740.1，因其发挥“免疫刹车”功能，即通过抑制NF
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κB信号关键转录因子p65磷酸化来负向调控炎性巨噬细胞活化，以下或称为Lnc
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ip65。在人或鼠巨噬细胞中过表达Lnc
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ip65可阻断HTNV感染或者LPS(脂多糖，诱导脓毒症)所致的炎性巨噬细胞活化，在小鼠中敲除Lnc
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ip65可加重其感染HTNV后的免疫病理损伤。以Lnc
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ip65为核心的干预策略将为HFRS，及其他以炎症反应失控为病理特征的疾病(急性感染所致脓毒症，如细菌性或病毒性脓毒症等；自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等)治疗提供新思路。
附图说明
[0016]图1 RIP实验验证随着感染时间增加，p65与Lnc
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ip65的结合。
[0017]图2为HTNV感染后Lnc
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ip65与内源性p65的位置关系。
[0018]图3为不同刺激条件下Lnc
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ip65与内源性p65的位置关系。
[0019]图4为GFP
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p65的亚细胞定位变化。
[0020]图5为炎性巨噬细胞活化相关信号通路的变化。
[0021]图6为构建的p65截短体(A)及其对应位置(B)，并通过WB验证其过表达水平(C)，通过RIP实验检测不同p65截短体与Lnc
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ip65结合情况(D)。
[0022]图7为在mBMDM中电转Lnc
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ip65与p65不同截短体，通过RNAScope检测的Lnc
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ip65与p65截短体的位置关系。
[0023]图8为在mBMDM中电转p65截短体(401
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500)，电转24h后以MOI＝1感染HTNV，在36hpi通过WB检测内源性p65的磷酸化水平(A),通过RNAScope检测Lnc
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ip65、内源性及外源性p65亚细胞定位(B)并进行统计分析(C)。
[0024]图9为过表达Lnc
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ip65后以MOI＝1感染HTNV的hMDM相关信号通路的活化情况。
[0025]图10为过表达Lnc
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ip65后以MOI＝1感染HTNV的hMDM的TNFα(A)、IL
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10(B)及IFNα(C)的浓度。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0027]实施例1
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种负向调控炎性巨噬细胞活化的鼠源lncRNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种过表达载体，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。3.一种重组慢病毒，其特征在于，含有权利要求2所述的过表达载体。4.权利要求1所述的鼠源lncRNA或权利要求2所述的过表达载体或权利要求3所述的重组慢病毒在制备抑制炎性巨噬细胞活化的药物中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宏炜，张芳琳，雷迎峰，思越，杨永恒，李梦云，叶伟，张亮，程林峰，刘赫，徐志凯，张惠，乜铁建，张西京，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：