一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株和应用制造技术

本发明专利技术提供了一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株和应用，属于植物保护技术领域。一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株为镰刀菌(Fusariumsp.)菌株1

A fungal strain promoting the germination of Dendrobium from Jinsha River and its application

【技术实现步骤摘要】
一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株和应用


[0001]本专利技术属于植物保护
，具体涉及一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株和应用。

技术介绍

[0002]金沙江石斛(Dendrobium wangliangii)是金沙江干热河谷极小种群植物的典型代表，是认识兰科植物在干热河谷物种形成与演化的窗口植物，在药用及观赏方面均具有重要的潜在价值。分布区域狭窄、气候异常以及人为采集等因素的叠加，使金沙江石斛目前处于濒临灭绝的境地，亟待保护。
[0003]通过提高种子萌发率增加种群个体数量，是开展原生境保护的重要措施。成熟的兰科植物种子极其微小，没有贮存营养的胚乳组织，需要通过与兰科菌根真菌(Orchid mycorrhiza fungi,OMF)所形成的菌丝圈(Pelotons)获取营养，从而萌发分化出子叶和胚根，最终形成幼苗。因此，获得最适促萌发真菌是珍稀濒危兰科植物保护的关键步骤。利用金沙江石斛种子与其原生境的基质共生萌发形成原球茎，再从原球茎中分离纯化并鉴定共生真菌，最后将共生真菌分别与金沙江石斛种子回接，筛选出金沙江石斛最适促萌发真菌。从而为高效生产菌根化幼苗提供必要条件，为开展金沙江石斛野外回归和原生境保护奠定基础。
[0004]目前，兰科菌根真菌虽然与金沙江石斛种子共生萌发，但萌发率不高，这大大阻碍了金沙江石斛幼苗的培育进程。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株1
‑1‑
2，与其他类型真菌相比，该菌株能够大大提高金沙江石斛的萌发率。
[0006]本专利技术提供了一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株，所述真菌菌株为镰刀菌(Fusarium sp.)菌株1
‑1‑
2，保藏编号为CCTCC NO：M2020553。
[0007]优选的，所述镰刀菌菌株1
‑1‑
2的ITS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0008]本专利技术提供了一种所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株的培养方法，包括以下步骤：
[0009]将促进金沙江石斛萌发的真菌菌株接种至PDA培养基上进行培养。
[0010]本专利技术提供了所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株在促进金沙江石斛种子萌发中的应用。
[0011]优选的，所述促进金沙江石斛种子萌发的方法，将金沙江石斛种子和所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株接种至萌发培养基中进行共培养，获得萌发的金沙江石斛。
[0012]优选的，所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株先接种至萌发培养基中进行预培养一周后再接入金沙江石斛种子。
[0013]优选的，所述金沙江石斛种子以悬浮液的形式添加到萌发培养基中，所述悬浮液
的种子密度为700～900粒/ml。
[0014]优选的，所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株的接种量为直径0.8cm的菌块/培养皿。
[0015]优选的，所述萌发培养基是燕麦琼脂培养基。
[0016]优选的，所述共培养的温度为23～27℃；
[0017]所述共培养的时间为30～45d。
[0018]本专利技术提供的促进金沙江石斛萌发的真菌菌株，经形态学和分子生物学鉴定为镰刀菌菌株1
‑1‑
2，保藏编号为CCTCC NO：M2020553。将所述镰刀菌菌株1
‑1‑
2与成熟金沙江石斛种子共培养，结果表明，与1
‑1‑
2菌株共生培养的金沙江石斛种子，除了萌发阶段2与萌发阶段3，略低于与2
‑1‑
2菌株共生培养的金沙江石斛外，其他各萌发阶段的萌发比例及萌发率都显著高于其他菌株共培养的金沙江石斛。可见本专利技术提供的镰刀菌菌株1
‑1‑
2较其他常规真菌菌株相比，在促进金沙江石斛萌发方面具有明显优势，能显著提高该种子萌发率，从而为高效生产菌根化幼苗提供必要条件，为进一步开展原生境保护工作提供了基础。
附图说明
[0019]图1为金沙江石斛迁地共生萌发图；
[0020]图2为镰刀菌属1
‑1‑
2菌株形态图，其中图2A为菌落形态图；图2B为分生孢子图；
[0021]图3为菌株1
‑1‑
2基于ITS序列构建的系统发育树图；
[0022]图4为菌株1
‑1‑
2及其他菌株与金沙江石斛种子共生萌发对比图；
[0023]图5为菌株1
‑1‑
2与金沙江石斛种子于OMA培养基上共生萌发图，其中图5A.阶段1，吸水膨胀；图5B.阶段2，种胚突破种皮，原球茎形成；C.阶段3，出现原生分生组织，原球茎发育，视为萌发；D.阶段4，长出幼叶，幼苗形成。
[0024]生物材料保藏信息
[0025]镰刀菌(Fusarium sp.)菌株1
‑1‑
2，于2020年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学校内(武汉大学第一附属小学对面)，中国典型培养物保藏中心211室，其保藏编号为CCTCC NO：M2020553。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株，所述真菌菌株为镰刀菌(Fusarium sp.)菌株1
‑1‑
2，保藏编号为CCTCC NO：M2020553。
[0027]在本专利技术中，所述镰刀菌菌株1
‑1‑
2从金沙江石斛原球茎中分离而得。将镰刀菌菌株1
‑1‑
2接种至PDA培养基上培养，观察菌落形态特征(培养4d)：菌丝为乳白色，气生，菌落形态规则，呈圆形，每两天生长速度为2.000
±
0.255cm，培养时间较短，7天左右铺满9cm的平板，初期为白色短绒状菌丝，后期可见次级代谢产物颜色为淡黄色。在光学显微镜下观察分生孢子，分生孢子有两种形态，小型分生孢子卵圆形至柱形，有1～3个隔膜；大型分生孢子镰刀形或长柱形，散生于气生菌丝上，分隔数多为3
‑
10分隔，有的分隔数更多，隔膜也不一样，有的分隔明显，而有的分隔不明显。未观察到厚垣孢子。同时将镰刀菌菌株1
‑1‑
2进行分子生物鉴定，PCR扩增ITS基因片段，得到所述镰刀菌菌株1
‑1‑
2的ITS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1(CTGATCCGAGGTCAACATTCAGAAGTTGGGGGTTTAACGGCATGGCCGCACCGCGTTCCAGT
TGCGAGGTGTTAGCTACTACGCAATGGAGGCTGCAGTGAGACCGCCACTAGATTTAGGGGGCGGCTGGTCCTAAGACTCGCCGATCCCCAACACCAAACCCGGGGGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCAC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株促进金沙江石斛萌发的真菌菌株，其特征在于，所述真菌菌株为镰刀菌(Fusarium sp.)菌株1
‑1‑
2，保藏编号为CCTCC NO：M2020553。2.根据权利要求1所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株，其特征在于，所述镰刀菌菌株1
‑1‑
2的ITS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。3.一种权利要求1或2所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将促进金沙江石斛萌发的真菌菌株接种至PDA培养基上进行培养。4.权利要求1或2所述促进金沙江石斛萌发的真菌菌株在促进金沙江石斛种子萌发中的应用。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述促进金沙江石斛种子萌发的方法，将金沙江石斛种...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵大克，张雪，王后平，牟宗敏，陈穗云，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：