本发明专利技术公开了一种测定吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的方法，其包括下述步骤：(1)采用液相色谱串联三重四极杆检测包括吡虫啉和氟虫胺及其代谢物中至少一种的液体样品，其中液相色谱中采用的流动相分别为水相A：含0.5～4mM甲酸铵和0.005～0.02％甲酸的水溶液；有机相B：含0.5～4mM甲酸铵和0.005～0.02％甲酸的甲醇溶液；(2)根据各个化合物的标准曲线确定各个化合物的含量。该方法取样量少，前处理简单，有机试剂使用量少，能够同时检测吡虫啉和氟虫胺两种农药及其代谢物共10种化合物。两种农药及其代谢物共10种化合物。
【技术实现步骤摘要】
测定吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的方法
[0001]本专利技术属于分析化学领域，涉及一种测定吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的方法，尤其涉及一种使用LC
‑
MS/MS测定土壤中吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的方法。
技术介绍
[0002]农药残留是指使用农药后，残留在植物体内、土壤和环境中的农药及其有毒代谢物的量。吡虫啉和氟虫胺是常用的硝基亚甲基类杀虫剂，具毒性，易残留在植物体内并通过食物链累积，从而导致环境污染并危害人体健康。为了保证环境安全及食品安全，建立快速可靠检测吡虫啉和氟虫胺方法对于保障人民健康，具有重要意义。
[0003]现有的土壤中吡虫啉和氟虫胺残留物检测方法中，前处理取样量大，一般需取10g土，所用提取溶剂多，一般需用20mL以上，才能提取土壤中的吡虫啉和氟虫胺及其代谢产物，费时费力。
技术实现思路
[0004]为了快速简便地筛查环境(如土壤中)两种农药吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的残留含量的质谱检测方法，为环境评估提供可靠依据，专利技术人对于吡虫啉和氟虫胺及其代谢物的检测方法进行了探索和尝试，寻找到一种样品取样量小、溶剂尤其是有机溶剂消耗量小的技术。具体而言，本专利技术包括如下技术方案。
[0005]一种测定吡虫啉(IMI)、氟虫胺(DIN)或它们代谢物的方法，其包括下述步骤：
[0006](1)采用液相色谱串联三重四极杆质谱(LC
‑
MS/MS)检测包括吡虫啉(IMI)和氟虫胺(DIN)及其代谢物中至少一种的液体样品；
[0007]其中液相色谱中采用的流动相分别为，水相A：含0.5～4mM、优选1～3.5mM、优选1.2～3.2mM、优选1.5～3mM、优选1.8～2.5mM、最优选大约2mM甲酸铵和0.005～0.02％、优选0.008～0.015％、最优选大约0.01％甲酸的水溶液；有机相B：含0.5～4mM、优选1～3.5mM、优选1.2～3.2mM、优选1.5～3mM、优选1.8～2.5mM、最优选大约2mM甲酸铵和0.005～0.02％、优选0.008～0.015％、最优选大约0.01％甲酸的甲醇溶液；
[0008]质谱检测中，每个化合物选用两个离子通道，一个是定量离子通道，另一个是定性离子通道，其中吡虫啉的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 256＞209和m/z 256＞175；氟虫胺的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 203＞113和m/z 203＞157；
[0009](2)根据各个化合物的标准曲线确定各个化合物的含量。
[0010]优选地，上述步骤(1)中水相A为：含大约2mM甲酸铵和大约0.01％甲酸的水溶液；有机相B为：含大约2mM甲酸铵和大约0.01％甲酸的甲醇溶液。
[0011]吡虫啉的代谢物选自下述化合物：1
‑
[(6
‑
氯吡啶
‑3‑
基)甲基]‑1‑
硝基胍、吡虫啉
‑
胍盐酸盐、吡虫啉烯烃、吡虫啉脲、6
‑
羟基烟酸、6
‑
氯烟酸；氟虫胺的代谢物选自下述化合物：1
‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]脲、1
‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]二氢胍盐。
[0012]其中，1
‑
[(6
‑
氯吡啶
‑3‑
基)甲基]‑1‑
硝基胍的定量离子通道和定性离子通道分别
为m/z230＞186和m/z 230＞148；
[0013]吡虫啉
‑
胍盐酸盐的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 211＞126和m/z 211＞90；
[0014]吡虫啉烯烃的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 254＞205和m/z 254＞171；
[0015]吡虫啉脲的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 212＞128和m/z 212＞99；
[0016]6‑
羟基烟酸的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 140＞122和m/z 140＞78；
[0017]6‑
氯烟酸的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 158＞122和m/z 160＞122；
[0018]1‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]脲的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 159＞102和m/z 159＞67；
[0019]1‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]二氢胍盐的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 158＞102和m/z 158＞57。
[0020]上述的液体样品的来源可以选自下组：植物体比如水稻、土壤、水环境。
[0021]在一种实施方式中，待检测的液体样品的来源是土壤，该液体样品的提取例如可以包括下述步骤：
[0022](a)配制乙腈:水(v/v)＝1:0.5～1.5、优选1:0.8～1.2、优选1:0.9～1.2、最优选大约1:1的混合溶剂，并加入3～8％、优选3.5～7％、优选4～6％、最优选5％甲酸，得到提取溶剂；
[0023](b)按照大约2mL/1g的体积/质量比，将步骤(a)中得到的提取溶剂加入到冻干后的土壤中，涡旋混合，得悬浊液；
[0024](c)将悬浊液离心，取上清，加入等体积纯水，得到液体样品。
[0025]例如，提取溶剂体积可以大约为0.4mL，土壤样本大约为0.2g。即，仅需0.2g左右的土壤，仅消耗大约0.2mL的乙腈，即可进行土壤中吡虫啉和氟虫胺及其代谢物含量的定量分析。
[0026]在建立上述步骤(2)中所述的各个化合物的标准曲线时，分别以不含农药残留的土壤为原料，按照如下方法配制基质溶剂：称取冻干后土壤0.2g，加入400μL提取溶剂(乙腈:水＝1:1v/v，含5％甲酸)，涡旋1min，震荡10min，离心10min，取上清，加入相同量的纯水，混匀后离心10min，取上清，得到基质溶剂。
[0027]按照如下方法配制空白溶剂：乙腈:水＝1:3(v/v)溶液为空白溶剂。
[0028]分别用上述溶剂配制各种化合物浓度分别为0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的混合基质溶剂标准溶液(基质标)和空白溶剂标准溶液(溶剂标)，进LC
‑
MS/MS检测，记录峰面积，拟合基质标准曲线和空白溶剂标准曲线，用基质标准曲线的斜率除以空白溶剂标准曲线的斜率，得到各个化合物的基质效应(ME)
[0029]本领域技术人员容易理解，当化合物的含量超出标准曲线的线性范围时，可采用梯度稀释或者倍数稀释的办本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种测定吡虫啉、氟虫胺或它们代谢物的方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)采用液相色谱串联三重四极杆质谱(LC
‑
MS/MS)检测包括吡虫啉和氟虫胺及其代谢物中至少一种的液体样品；其中液相色谱中采用的流动相分别为水相A：含0.5～4mM甲酸铵和0.005～0.02％甲酸的水溶液；有机相B：含0.5～4mM甲酸铵和0.005～0.02％甲酸的甲醇溶液；质谱检测中，每个化合物选用两个离子通道，一个是定量离子通道，另一个是定性离子通道，其中吡虫啉的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 256＞209和m/z 256＞175；氟虫胺的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 203＞113和m/z 203＞157；(2)根据各个化合物的标准曲线确定各个化合物的含量。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中水相A为：含2mM甲酸铵和0.01％甲酸的水溶液；有机相B为：含2mM甲酸铵和0.01％甲酸的甲醇溶液。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，吡虫啉的代谢物选自下述化合物：1
‑
[(6
‑
氯吡啶
‑3‑
基)甲基]
‑1‑
硝基胍、吡虫啉
‑
胍盐酸盐、吡虫啉烯烃、吡虫啉脲、6
‑
羟基烟酸、6
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氯烟酸；氟虫胺的代谢物选自下述化合物：1
‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]脲、1
‑
甲基
‑3‑
[(3
‑
四氢呋喃)甲基]二氢胍盐。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：1
‑
[(6
‑
氯吡啶
‑3‑
基)甲基]
‑1‑
硝基胍的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z230＞186和m/z 230＞148；吡虫啉
‑
胍盐酸盐的定量离子通道和定性离子通道分别为m/z 2...
【专利技术属性】
技术研发人员：王姗姗，徐晓燕，胡文利，
申请(专利权)人：中国科学院分子植物科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：
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