黄曲霉毒素B1的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术揭示了一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体及其应用。所述核酸适配体包含SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。所述核酸适配体可以通过SELEX法筛选获得。本发明专利技术提供的黄曲霉毒素B1的核酸适配体能够高效特异地结合黄曲霉毒素B1，尤其是与黄曲霉毒素B1作用后有明显的荧光增强效果，而且基于所述黄曲霉毒素B1核酸适配体所设计的黄曲霉毒素B1的检测试剂盒、传感器、检测系统及检测方法等操作简单方便，成本低廉，能实现定性、定量检测，检测结果准确性高，检测精度好，在食品污染物检测等领域有广阔的应用前景。阔的应用前景。阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
黄曲霉毒素B1的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术涉及一种核酸适配体(aptamer)，具体涉及一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体、其筛选方法及其应用，例如在检测黄曲霉毒素B1中的用途，属于生物


技术介绍

[0002]核酸适配体是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)从人工合成的核酸文库中在体外筛选得到的与特定靶分子能够高亲和力结合的单链寡核苷酸(单链DNA或RNA)。适配体可以形成特定的二级或者三级结构，如发夹结构(hairpin)、茎环结构(stem
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loop)、G四链体(G
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quadruplex)等，主要是通过氢键，形状的匹配，芳香环的堆积作用，静电和疏水相互作用以及范德华力等各种相互作用特异性地识别靶标分子。1990年，Tuerk和Gold以及Ellington和Szostak几乎同时报道了SELEX技术，经过近30年的发展，目前已有数千种靶标的适配体被筛选出来，包括金属离子，有机分子，氨基酸，蛋白质，病毒，细菌和完整的细胞等。这些适配体已广泛应用于生物分析、食品安全和环境监测、诊断和临床治疗等领域。
[0003]黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的剧毒的次生代谢产物。据报道，黄曲霉毒素是高度稳定的天然霉菌毒素。黄曲霉毒素进入人体或动物体内后显示出强烈的毒性，并可能导致出血、脂肪变性、胆管增生和肝癌。因此，食品中黄曲霉毒素的检测已成为研究人员的研究热点。在各种黄曲霉毒素中，黄曲霉毒素B1(AFB1)最常见，因为它具有阻断细胞RNA合成的能力，并大大增加了人和动物肝硬化、坏死和致癌的风险。世界卫生组织(WHO)的国际癌症研究机构(IARC)将其归类为I类致癌物。黄曲霉毒素B1主要污染花生、玉米、大米、小麦、花生油以及其他谷物和油类。例如，根据中国的规定，玉米、花生和花生油中黄曲霉毒素B1的限量标准为20μg/kg。研究者们已经开发了许多用于定量检测黄曲霉毒素B1的技术，例如高效液相色谱(HPLC)，液相色谱与质谱联用(LC
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MS)和薄层色谱(TLC)。尽管这些方法非常成熟，但由于操作繁琐，检测周期长，样品预处理复杂，设备昂贵以及携带不便等原因而阻碍应用。近年来，研究者们已经开发了基于抗体的免疫吸附测定法检测黄曲霉毒素的方法。然而，这些使用抗体作为识别分子的方法价格昂贵，不稳定并且容易产生假阳性检测结果。因此，开发低成本、高灵敏度的方法来检测食品和相关产品等实际样品中的黄曲霉毒素B1尤为紧迫和重要。
[0004]随着生物技术的最新发展，核酸适配体已被广泛用于生物传感器中。在分析和诊断领域，核酸适配体与传统抗体相比具有许多优势，包括制备方便，特异性强，稳定性高，易于修饰，亲和力强和靶分子范围广。作为新兴的生物标志物探针和识别分子，它被广泛用于生物传感器的构建，并且在疾病的诊断和治疗，蛋白质组学研究，生物传感和毒素传感，微生物检测等其他领域均有应用。随着与适配体的不断结合和改进，快速的生物毒素检测技术将更加便携、稳定和高效，具有巨大的优势。适配体传感器被认为是一种定量检测黄曲霉毒素B1的新兴方法，具有很高的选择性和灵敏度。目前利用这种方法进行检测已有一些相关报道，但是制约其发展的关键仍然是满足实际应用要求的核酸适配体太少。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体及其应用，以克服现有技术中的不足。
[0006]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0007]本专利技术实施例提供了一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体，其包含SEQ ID No.3所示的序列。
[0008]本专利技术实施例还提供了一种用于检测黄曲霉毒素B1的探针对，其包括荧光素标记的第一探针和淬灭剂标记的第二探针，所述第一探针包含SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述第二探针包含与第一探针的部分核苷酸序列反向互补的核苷酸序列，并且当所述第一探针与第二探针杂交时，所述淬灭剂能够将荧光素的荧光淬灭。
[0009]本专利技术实施例还提供了一种检测试剂或试剂盒，其包括所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对。
[0010]本专利技术实施例还提供了一种荧光生物传感器，其包括所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对。
[0011]本专利技术实施例还提供了一种检测系统，其包括：
[0012]所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对；以及
[0013]荧光检测设备，其至少用于检测所述黄曲霉毒素B1的核酸适配体或所述用于检测黄曲霉毒素B1的探针对在与含有黄曲霉毒素B1的待测样品共同孵育前后的荧光强度变化。
[0014]本专利技术实施例还提供了一种黄曲霉毒素B1的检测方法，其包括：将所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对与待测样品共同孵育，并检测共同孵育前后的荧光强度变化，从而实现对待测样品所含黄曲霉毒素B1的检测。
[0015]本专利技术实施例还提供了一种筛选所述黄曲霉毒素B1的核酸适配体的方法。
[0016]与现有技术相比，本专利技术以上实施例所提供的技术方案的优点至少包括：
[0017]1)筛选出的一种黄曲霉毒素B1核酸适配体能够高效特异的结合靶分子黄曲霉毒素B1，尤其是与黄曲霉毒素B1作用后有明显的荧光增强效果；
[0018]2)基于所述黄曲霉毒素B1核酸适配体所设计的黄曲霉毒素B1的检测试剂盒、传感器、检测系统及检测方法操作简单方便，成本低廉，能实现定性和定量检测，检测结果准确性高，检测精度好。
附图说明
[0019]图1是本专利技术一典型实施方式中利用SELEX方法筛选黄曲霉毒素B1的核酸适配体的示意图；
[0020]图2是本专利技术一典型实施方式中基于黄曲霉毒素B1的核酸适配体设计的黄曲霉毒素B1检测传感器的原理示意图；
[0021]图3是本专利技术实施例1中所筛选的一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体AF11
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1对黄曲霉毒素B1荧光作用的亲和力数据图；
[0022]图4是本专利技术实施例2中一种荧光生物传感器与黄曲霉毒素B1作用的荧光响应曲线图；
[0023]图5a是本专利技术实施例2中一种荧光生物传感器检测黄曲霉毒素B1的响应荧光强度图；
[0024]图5b是本专利技术实施例2中一种荧光生物传感器检测黄曲霉毒素B1的线性关系图；
[0025]图6是本专利技术实施例2中一种荧光生物传感器检测黄曲霉毒素B1及其他霉菌毒素的效果比较图。
具体实施方式
[0026]如前所述，鉴于现有技术存在的诸多缺陷，本案专利技术人经长期研究和大量实践，得以提出了本专利技术的技术方案，如下将予以更为具体的说明。
[0027]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本说明书使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄曲霉毒素B1的核酸适配体，其特征在于：它包含SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体，其特征在于：它具有SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的序列。3.一种用于检测黄曲霉毒素B1的探针对，其特征在于包括荧光素标记的第一探针和淬灭剂标记的第二探针，所述第一探针包含SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述第二探针包含与第一探针的部分核苷酸序列反向互补的核苷酸序列，并且当所述第一探针与第二探针杂交时，所述淬灭剂能够将荧光素的荧光淬灭。4.根据权利要求3所述地用于检测黄曲霉毒素B1的探针对，其特征在于：所述第一探针、第二探针分别具有SEQ ID No.4、SEQ ID No.5所示的核苷酸序列。5.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者权利要求3或4所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对。6.一种荧光生物传感器，其特征在于包括权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者权利要求3或4所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对。7.一种检测系统，其特征在于包括：权利要求1或2所述的黄曲霉毒素B1的核酸适配体或者权利要求3或4所述的用于检测黄曲霉毒素B1的探针对；以及荧光检测设备，其至少用于检测所述黄曲霉毒素B1的核酸适配...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文静，裴一安，王金娥，
申请(专利权)人：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所，
类型：发明
国别省市：