丁酸及其盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了丁酸及其盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术要求保护丁酸或丁酸盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。本发明专利技术还要求保护丁酸或丁酸盐在制备诱导线粒体凋亡的制剂中的应用。本发明专利技术通过CCK8实验、EdU荧光实验、Transwell实验、划痕实验、蛋白印迹分析、细胞流式分析、ROS免疫荧光、TUNEL实验、CytC荧光实验和ROS流式分析表明，丁酸及其盐通过激活线粒体依赖的凋亡途径抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移。侵袭和迁移。侵袭和迁移。

Application of butyric acid and its salts in the preparation of drugs for the treatment of cervical cancer

【技术实现步骤摘要】
丁酸及其盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及丁酸及其盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌(cervical cancer，CC)是全球女性第四大常见癌症，每年新增57万例，死亡相关31.1万例，严重威胁女性患者的生命和健康。由于宫颈癌早期症状不明显，大多数患者在诊断时处于中晚期，5年生存率较低。目前宫颈癌的治疗主要以手术为主，辅以化疗和其他治疗，例如放疗，免疫和靶向治疗，这些都可能会给患者的身体带来永久性的损害。宫颈癌患者的治疗效果有限是由于人们对其发病机制的了解不完全。
[0003]研究宫颈癌细胞系的凋亡途径，开发抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移的药物，对于治疗宫颈癌具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供丁酸及其盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，丁酸可以通过激活线粒体依赖的凋亡途径来抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供丁酸或丁酸盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。
[0007]进一步地，所述丁酸或丁酸盐通过激活线粒体依赖的凋亡途径抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移。
[0008]进一步地，所述丁酸盐包括丁酸钠。
[0009]本专利技术还提供丁酸或丁酸盐在制备诱导线粒体凋亡的制剂中的应用。
[0010]进一步地，所述线粒体为内源性线粒体。
[0011]本专利技术还提供一种用于诱导线粒体凋亡或治疗宫颈癌的药物，以丁酸或丁酸盐为主要成分。
[0012]本专利技术公开了以下技术效果：
[0013]本专利技术通过CCK8实验、EdU荧光实验、Transwell实验、划痕实验、蛋白印迹分析、细胞流式分析、ROS免疫荧光、TUNEL实验、CytC荧光实验和ROS流式分析表明，丁酸及其盐通过激活线粒体依赖的凋亡途径抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1为丁酸钠抑制人宫颈癌细胞的增殖，用细胞计数试剂盒测定5mM丁酸钠作用12、24、48和72小时后Hela(A)和Caski(B)细胞的增殖情况；EdU荧光染色检测Hela(C)和Caski(E)细胞系中的凋亡细胞；D为C中红色荧光强度的定量分析；F为E中红色荧光强度的定量分析；G和I为流式细胞术分析Hela细胞的细胞周期分布，CON：对照组；NaB：5mM丁酸钠治疗48小时组；H为S期Hela细胞的定量分析；所有上述数据均表示为平均值
±
标准差；*P＜0.05，***P＜0.001；
[0016]图2为丁酸钠减少宫颈癌细胞的侵袭和迁移，划痕实验用于测定Hela(A)和Caski(C)细胞经5mM丁酸钠处理12、24、48小时后的迁移情况；B为Hela组伤口愈合率的定量分析；D为Caski组伤口愈合率的定量分析；E为采用Transwell法检测丁酸钠对Hela细胞侵袭和迁移的影响；F为采用Transwell法检测丁酸钠对Caski细胞侵袭和迁移的影响；CON：对照组，NaB：5mM丁酸钠治疗48小时组；数据表示为平均值
±
标准差；**P＜0.01，***P＜0.001；
[0017]图3为丁酸钠促进宫颈癌细胞凋亡，采用TUNEL(A)和Annexin
‑
V/PI(B为CON组，C为NaB组)染色对Hela细胞凋亡进行定性和定量分析；D为蛋白印迹分析检测凋亡相关蛋白的表达；E为CON和NaB组蛋白表达的定量分析；CON：对照组，NaB：5mM丁酸钠治疗48小时组；数据表示为平均值
±
标准差；NS表示无显著性差异，***P＜0.001；
[0018]图4为丁酸钠激活了宫颈癌线粒体依赖性凋亡途径；A为蛋白印迹分析定量检测Caspase 8、9和12；B为Caspase 8、9和12蛋白质表达的定量分析；D为蛋白印迹分析定量检测Apaf
‑
1、BCL
‑
2和BAX；E为Apaf
‑
1、BCL
‑
2和BAX蛋白质表达的定量分析；C为免疫荧光检测细胞色素C表达；F为免疫荧光检测活性氧的表达；G
‑
J为流式细胞术定量检测0
‑
48h的活性氧含量，其中G
‑
J依次为0h、12h、24h和48h；CON：对照组，NaB：5mM丁酸钠治疗48小时组；数据表示为平均值
±
标准差；NS表示无显著性差异，**P＜0.01。
具体实施方式
[0019]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0020]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0021]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0022]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0023]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即
意指包含但不限于。
[0024]实施例1
[0025]一、材料与方法
[0026]1.1试剂和抗体
[0027]丁酸钠(纯度＞98％)购自于aladdin，将丁酸钠溶于培养基中配制成100mM原液，并用0.22μm过滤膜过滤，保存在
‑
20℃。半胱天冬酶3(Caspase 3，AC0301)和甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶(glyceraldehyde
‑3‑
phosphate dehydrogenase，GA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丁酸或丁酸盐在制备治疗宫颈癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁酸或丁酸盐通过激活线粒体依赖的凋亡途径抑制宫颈癌细胞系的增殖、侵袭和迁移。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丁酸盐包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭君萍，王方岩，张珂，季夏薇，
申请(专利权)人：杭州市五云山医院杭州市健康促进研究院，
类型：发明
国别省市：