一种增强TIL功效的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种增强TIL功效的培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明专利技术利用一种重组白细胞介素10(rIL

A culture method to enhance til efficacy

【技术实现步骤摘要】
一种增强TIL功效的培养方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种增强TIL功效的培养方法。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤的发生、发展涉及一系列复杂的分子生物学机制，包括肿瘤细胞、间质细胞和宿主的炎症细胞之间的相互作用。免疫系统是重要的肿瘤防御系统，其影响肿瘤从生长开始到进展和扩散的所有阶段，在宿主抑制肿瘤发生及发展的过程中起着至关重要的作用。正常情况下，人体的免疫系统维持着相对平衡的状态，但一旦免疫细胞发生改变，这一平衡状态被打破，人体免疫机制对肿瘤细胞的作用将会减弱，加快肿瘤进展。在肿瘤发生、肿瘤进展和转移扩散的过程中，肿瘤细胞对免疫系统的有效逃避是必不可少的，其可以使机体的免疫细胞不能识别肿瘤细胞，从而使机体的免疫系统失去对肿瘤的监视和清除功能，并且此过程可能与肿瘤细胞对自身的抗原进行修饰以及改变肿瘤细胞外的微环境相关。免疫系统与癌细胞相互的复杂作用在控制和消除肿瘤方面起着至关重要的作用，并受到激活和抑制信号之间微妙平衡的调节。
[0003]肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)是浸润在肿瘤实质与间质内的一类特殊免疫细胞，它包括一系列免疫相关细胞，如细胞毒性CD8+T细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞和T辅助细胞，以及那些具有免疫抑制作用的细胞，包括B细胞和调节性CD4+T细胞，它们在癌细胞和淋巴细胞之间传递特殊信息，与癌细胞的增殖和消除密切相关。树突状细胞是一种免疫细胞，在肿瘤组织中含有癌细胞特有的抗原，并在T细胞移动到淋巴结后用抗原特异性激活。这些T细胞作为细胞毒性T细胞攻击癌细胞，癌细胞释放各种细胞因子抑制其免疫功能，逃避这种攻击。研究表明，调节性T细胞在癌症的免疫逃避机制中起着重要作用。调节性T细胞被认为参与维持免疫耐受，癌细胞可通过诱导调节性T细胞来抑制免疫系统，以促进自身的增殖，从而抑制宿主的过度免疫反应。
[0004]肿瘤浸润淋巴细胞回输治疗实体瘤，作为一种重要的过继性细胞疗法(ACT)，具有天然多靶点的肿瘤抗原特异性、高浸润性和副作用小等优势，愈受医药界的关注。TIL细胞主要是从恶性胸腹水、癌组织或癌旁组织中分离出的浸润淋巴细胞，因而受到个体肿瘤的差异性、肿瘤的大小、淋巴细胞的浸润程度和手术污染等条件限制，加上现有工艺水平的不利影响，导致其在体外难以稳定地大规模扩增。作为一种高度差异化、定制化和靶向性的免疫疗法，提高TIL疗法有效性和可及性的方法之一是增强TIL对肿瘤细胞的免疫功效。例如，专利CN202110468954.5公开了一种TIL细胞扩增培养基及其使用方法，该培养基包括灭活牛血清、白介素
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5、白介素
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9、白介素
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21、单克隆抗体、灵芝多糖、谷胱甘肽、卡拉胶、半乳糖醛酸、乙酰氨基酚和基础培养基，可促进细胞的增殖，并提高其杀伤活性。专利CN201910863394.6则公开了一种功能增强型TIL细胞的培养方法，包括：从肿瘤组织分离淋巴细胞，加入启动培养基，进行启动淋巴细胞培养，培养10天或14天获得启动TIL细胞，收获启动的TIL细胞冻存备用；用诱导培养基悬浮淋巴细胞，置于37℃、5％CO2孵箱进行TIL细胞诱导培养1天；用扩增培养基进行半量换液，进行扩瓶培养和扩袋培养，共培养13天或14天；
在培养第14天或第15天，收集TIL细胞，生理盐水洗涤，用功能增强培养基重悬TIL细胞后，孵育30分钟；收集TIL细胞，获得功能增强型TIL细胞；其所述的培养方法能获得具有更强的杀伤肿瘤细胞的活性、更高水平的抗肿瘤细胞因子分泌能力的功能增强型TIL细胞。
[0005]为了能够更好地提高TIL细胞对实体瘤细胞的杀伤效果，亟需提供一种操作简便、成本更低的增强TIL功效的培养方法。

技术实现思路

[0006]针对上述不足，本专利技术提供了一种增强TIL功效的培养方法。本专利技术利用一种重组白细胞介素10(rIL
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10)，重激活因在体外培养时间过长造成终末衰竭的TIL细胞，进一步增强其对癌症免疫的反应，从而提高TIL治疗的功效，对于肿瘤尤其是实体瘤的治疗具有巨大的临床意义和战略意义。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种重组白细胞介素10(rIL
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10)，所述的rIL
‑
10包括：
[0009](1)、SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的多肽A，SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽B和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的多肽C；
[0010]或者(2)、与(1)中的任一多肽相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的多肽；
[0011]或者(3)、与(1)中的任一多肽相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的多肽；所述的置换是保守置换。
[0012]具体地，所述的rIL
‑
10还包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9所示的氨基酸接头中的任意两种。
[0013]进一步具体地，所述的rIL
‑
10的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0014]另一方面，本专利技术提供了上述rIL
‑
10在激活、制备和/或培养TIL细胞中的应用。
[0015]又一方面，本专利技术提供了一种TIL细胞的激活方法，所述的方法包括以下步骤：采用上述rIL
‑
10培养TIL细胞，激活TIL细胞。
[0016]具体地，所述的方法包括以下步骤：取TIL细胞，离心取沉淀，用含有白细胞介素2(IL
‑
2)的培养基重悬，加入上述rIL
‑
10，置于培养箱中培养4
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120h，获得TIL细胞。
[0017]进一步具体地，所述的IL
‑
2的浓度为300
‑
8000IU/mL。
[0018]进一步具体地，所述的rIL
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10的浓度为10
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3200ng/mL。
[0019]在某些实施例中，所述的rIL
‑
10的浓度为100ng/mL。
[0020]在某些实施例中，所述的rIL
‑
10的浓度为200ng/mL。
[0021]在某些实施例中，所述的rIL
‑
10的浓度为400ng/mL。
[0022]在某些实施例中，所述的rIL
‑
10的浓度为800ng/mL。
[0023]在某些实施例中，所述的rIL
‑
10的浓度为1600ng/mL。
[0024]在某些实施例中，所述的rIL<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组白细胞介素10rIL
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10，其特征在于：所述的rIL
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10包括：(1)、SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的多肽A，SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽B和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的多肽C；或者(2)、与(1)中的任一多肽相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性的多肽；或者(3)、与(1)中的任一多肽相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合的多肽；所述的置换是保守置换。2.根据权利要求1所述的rIL
‑
10，其特征在于：所述的rIL
‑
10还包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9所示的氨基酸接头中的任意两种。3.根据权利要求2所述的rIL
‑
10，其特征在于：所述的rIL
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10的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。4.权利要求1
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3任一项所述的rIL
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10在制备和/或培养TIL细胞中的应用。5.一种TIL细胞的激活方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：采用权利要求1
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3任一项所述的rIL
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10培养TIL细胞，激活TIL细胞。6.一种TIL细胞的制备和/或培养方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：(1)TIL细胞纯化扩增；(2)采用权利要求1
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3任一项所述的rIL
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10重激活终末衰竭的TIL细胞。7.一种TIL细胞的制备和/或培养方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴延恒，顾文艺，廖续中，李雪，
申请(专利权)人：广州智瓴生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：