包含IL-7变体的双功能分子制造技术

本发明专利技术涉及IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含IL
‑
7变体的双功能分子


[0001]本专利技术涉及免疫治疗领域。本专利技术提供了一种包含IL
‑
7变体的双功能分子。

技术介绍

[0002]白介素7是IL
‑
2超家族的免疫刺激细胞因子成员，通过促进免疫应答在适应性免疫系统中发挥重要作用。这种细胞因子通过T细胞和B细胞的存活和分化，淋巴细胞的存活，自然杀伤(NK)细胞活性的刺激来激活免疫功能。IL
‑
7还通过淋巴组织诱导(LTi)细胞来调节淋巴结的发育，并促进初始T细胞或记忆T细胞的存活和分裂。此外，IL
‑
7通过促进IL
‑
2和干扰素
‑
γ的分泌来增强人的免疫应答。IL
‑
7的受体是异二聚体，且由IL
‑
7Rα(CD127)和共有的γ链(CD132)组成。γ链在所有造血细胞类型上表达，而IL
‑
7Rα主要由淋巴细胞表达(包括B和T淋巴前体、初始T细胞和记忆T细胞)。相比于表达更高水平的效应/初始T细胞，在调节性T细胞上观察到IL
‑
7Rα的低表达。因此，将CD127用作表面标志物以区分这两个群体。IL
‑
7Rα也在先天性淋巴细胞NK和肠道相关淋巴组织(GALT)衍生的T细胞上表达。IL
‑
7Rα(CD127)链与TSLP(肿瘤基质淋巴细胞生成素)共享，CD132(γ链)与IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
9、IL
‑
15和白介素21共享。通过CD127/CD132的(1)Janus激酶/STAT通路(即Jak
‑
Stat
‑
3和5)和(2)磷酸肌醇
‑
3激酶通路(即PI3K
‑
Akt)来诱导两条主要信号传导通路。IL
‑
7施用在患者中具有良好的耐受性，并导致CD8和CD4细胞扩增以及CD4+T调节性细胞的相对减少。已在临床上测试了重组裸IL
‑
7或与抗体Fc的N端结构域融合的IL
‑
7，其原理是通过Fc结构域的融合来增加IL
‑
7的半衰期并提高治疗的长期持续效率。
[0003]重组IL
‑
7细胞因子的药代动力学性质较差，限制了其在临床中的应用。注射后，重组IL
‑
7迅速分布和消除，导致在人体中(范围从6.8至9.5小时)(Sportes等，Clin Cancer Res.2010Jan 15；16(2):727
‑
35)或在小鼠中(2.5小时)(Hyo Jung Nam等，Eur.J.Immunol.2010.40:351
‑
358)IL
‑
7的糟糕的半衰期。IgG Fc结构域与IL
‑
7的融合延长了其半衰期，因为IgG可以结合新生儿Fc受体(FcRn)并参与分子的转胞吞作用和内体循环。观察到IL
‑
7Fc融合分子的循环半衰期延长(t1/2＝13h)，在小鼠中施用后8天仍保持在可检测水平(200pg/mL)(Hyo Jung Nam等，Eur.J.Immunol.2010.40:351
‑
358)。尽管与Fc结构域融合的IL
‑
7细胞因子的半衰期增加，但该分子需要频繁的体内注射才能产生生物学效应。在免疫细胞因子分子的情况下，细胞因子与抗体融合(例如，靶向癌抗原、免疫检查点阻断、共刺激分子等)，以优先将细胞因子集中到靶向的抗原表达细胞。然而，IL
‑
7细胞因子对其CD127/CD132受体的亲和性(纳摩尔至皮摩尔范围)可能高于抗体对其靶点的亲和性。因此，由于靶点介导的药物处置(TMDD)机制，细胞因子将驱动产物的药代动力学，导致体内可用药物的快速消耗。已针对免疫细胞因子如IL
‑
2或IL
‑
15阐述了这种快速消除，表明融合蛋白的药代动力学性质可能直接影响药物性能(List et Neri Clin Pharmacol.2013；5(Suppl 1):29
–
45)。
[0004]因此，本领域仍然非常需要新的和改进的IL
‑
7变体，其允许改善IL
‑
7产物的分布并减少IL
‑
7产物的消除，特别是包含IL
‑
7的双功能分子。本专利技术已经在本文公开的专利技术方
面向前迈出了重要一步。

技术实现思路

[0005]专利技术人提供了IL
‑
7突变和优化的Fc骨架，以改善双功能分子的分布和消除，从而增强体内生物效应。专利技术人观察到IL
‑
7突变；特别是与IgG同种型和接头长度结合使用时，允许双功能分子更好的分布和更长的体内半衰期。
[0006]本文提供的双功能分子特别显示出良好的体内药代动力学和药效学，特别是与包含IL
‑
7野生型的双功能分子相比。此外，有利的和预料不到的性质与这些新分子有关，如在具体实施方式的介绍中和在实施例中所详述的。
[0007]在第一个方面中，本专利技术涉及一种双功能分子，其包含与结合部分缀合的白介素7(IL
‑
7)变体，其中：
[0008]‑
所述结合部分结合至免疫细胞表面上特异性表达的靶点，
[0009]‑
所述IL
‑
7变体存在与野生型人IL
‑
7(wth
‑
IL
‑
7)至少75％同一性，所述野生型人IL
‑
7包含或由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成，其中所述变体包含至少一个氨基酸突变，其i)与wth
‑
IL
‑
7对IL
‑
7R的亲和性相比，降低所述IL
‑
7变体对IL
‑
7受体(IL
‑
7R)的亲和性，和ii)与包含wth
‑
IL
‑
7的双功能分子相比，改善包含所述IL
‑
7变体的所述双功能分子的药代动力学。
[0010]特别地，至少一个突变是选自以下的氨基酸取代或一组氨基酸取代：(i)C2S
‑
C141S和C47S
‑
C92S、C2S
‑
C141S和C34S
‑
C129S，或者C47S
‑
C92S和C34S
‑
C129S，(ii)W142H、W142F或W142Y，(iii)D74E、D74Q或D74N，iv)Q11E、Y12F、M17L、Q22E和/或K81R；或其任何组合(即，所述氨基酸编号如SEQ ID NO:1中所示)。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双功能分子，其包含与结合部分缀合的白介素7(IL
‑
7)变体，其中：
‑
所述结合部分结合至免疫细胞表面上特异性表达的靶点，
‑
所述IL
‑
7变体存在与野生型人IL
‑
7(wth
‑
IL
‑
7)至少75％同一性，所述野生型人IL
‑
7包含或由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成，其中所述变体包含至少一个选自以下的氨基酸突变：(i)W142H、W142F或W142Y，(ii)C2S
‑
C141S和C47S
‑
C92S、C2S
‑
C141S和C34S
‑
C129S，或者C47S
‑
C92S和C34S
‑
C129S，(iii)D74E、D74Q或D74N，iv)Q11E、Y12F、M17L、Q22E和/或K81R；或其任何组合，所述氨基酸编号如SEQ ID NO:1中所示，其i)与wth
‑
IL
‑
7对IL
‑
7R的亲和性相比，降低所述IL
‑
7变体对IL
‑
7受体(IL
‑
7R)的亲和性，和ii)与包含wth
‑
IL
‑
7的双功能分子相比，改善包含所述IL
‑
7变体的所述双功能分子的药代动力学。2.根据权利要求1所述的分子，其中所述IL
‑
7变体包含选自以下的氨基酸取代：W142H、W142F和W142Y，所述氨基酸编号如SEQ ID NO:1中所示。3.根据权利要求1或权利要求2所述的分子，其中所述IL
‑
7变体包含选自以下的氨基酸取代：C2S
‑
C141S和C47S
‑
C92S、C2S
‑
C141S和C34S
‑
C129S以及C47S
‑
C92S和C34S
‑
C129S，所述氨基酸编号如SEQ ID NO:1中所示。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的分子，其中所述IL
‑
7变体包含选自以下的氨基酸取代：D74E、D74Q和D74N，所述氨基酸编号如SEQ ID NO:1中所示。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的分子，其中所述IL
‑
7变体包含或由SEQ ID NO:2
‑
15中所示的氨基酸序列组成。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的分子，其中所述结合部分包含人IgG1的重链恒定结构域，优选地Fc结构域，其任选地具有选自以下的取代或取代的组合：T250Q/M428L；M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F；E233P/L234V/L235A/G236A+A327G/A330S/P331S；E333A；S239D/A330L/I332E；P257I/Q311；K326W/E333S；S239D/I332E/G236A；N297A；L234A/L235A；N297A+M252Y/S254T/T256E；K322A和K444A，优选地选自N297A任选地与M252Y/S254T/T256E和L234A/L235A的组合。7.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的分子，其中所述结合部分包含人IgG4的重链恒定结构域，优选地Fc结构域，其任选地具有选自以下的取代或取代的组合：S228P；L234A/L235A、S228P+M252Y/S254T/T256E.17和K444A。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的分子，其中所述免疫细胞是T细胞，优选耗竭的T细胞。9.根据权利要求8所述的分子，其中所述靶点由T细胞表达，并且所述结合部分结合至选自以下的靶点：PD
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1、CD28、CD80、CTLA
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4、BTLA、TIGIT、CD160、CD40L、ICOS、CD27、OX40、4
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1BB、GITR、HVEM、Tim
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1、LFA
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1、TIM3、CD39、CD30、NKG2D、LAG3、B7
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1、2B4、DR3、CD101、CD44、SIRPG、CD28H、CD38、CXCR5、CD3、PDL2、CD4和CD8。10.根据权利要求8所述的分子，其中所述靶点由T耗竭的...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法公司，
类型：发明
国别省市：