对糖基化的LAG3特异的抗体及其使用方法技术

本申请提供了相对于未糖基化的LAG3选择性结合糖基化的LAG3的抗体。在一些方面，本申请还提供了包含糖基化的氨基酸位置的LAG3多肽。本申请还提供了制备和使用此类抗体和多肽的方法(例如，用于治疗癌症)。用于治疗癌症)。用于治疗癌症)。

Antibody specific for glycosylated Lag3 and its application method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对糖基化的LAG3特异的抗体及其使用方法
序列表
[0001]本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子地提交并特此通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2020年9月22日，名称为24258_0014P1_Sequence_Listing.txt，并且大小为12,288字节。


[0002]本专利技术整体上涉及医学、分子生物学和肿瘤学领域。更具体地说，它涉及用于治疗癌症的抗体。专利技术背景
[0003]T细胞活化的持续性已经极大地重塑了广谱恶性癌症的治疗。例如，伊匹单抗(一种CTLA
‑
4特异性抗体和首个FDA批准的靶向T细胞应答的检查点阻断剂)的开发，使得治疗转移性黑色素瘤成为可能(Hodi等人,The New England Journal of Medicine 363,711
‑
723(2010))。
[0004]尽管CTLA
‑
4和PD1
‑
PDL1靶向癌症免疫疗法产生了令人印象深刻的影响，但大部分患有多种肿瘤类型的患者都没有应答。因此，焦点已转移到肿瘤微环境中的靶向替代抑制受体(IR)和抑制性机制。
[0005]IR的上调表达对于平衡共刺激受体活性和限制T细胞活化从而防止自身免疫、自身炎症和组织损伤至关重要。然而，肿瘤可以劫持这些所谓的免疫检查点机制，作为针对由CD4+和CD8+T细胞引发的抗肿瘤免疫应答的保护。首先在慢性病毒环境中描述，耐受的抗原特异性T细胞在肿瘤微环境中显示出IR的升高表达，对应于通过减少增殖和细胞因子释放来测量的功能性无应答。随着调节性T细胞的募集，产生的免疫耐受为有效消除肿瘤创造了多重障碍。因此，最近的癌症免疫治疗方法旨在通过靶向IR“以释放刹车”，使细胞毒性T细胞重新活跃起来以攻击肿瘤，从而逆转这种枯竭状态。
[0006]淋巴细胞活化基因
‑
3(LAG3；CD223)可能是很有前途的co
‑
IR，抑制T细胞活化和细胞因子分泌，从而确保免疫稳态状态。LAG
‑
3对各种类型的淋巴细胞发挥不同的抑制作用。同时，LAG
‑
3可以有效预防自身免疫性疾病的发生。LAG
‑
3信号传导和与其他免疫检查点相互作用的确切分子机制大多尚不清楚。然而，LAG
‑
3在多种环境中显示出与PD
‑
1的显著协同作用以抑制免疫应答。LAG3也可以被广泛糖基化。Long等人，“The promising immune checkpoint LAG
‑
3:from tumor microenvironment to cancer immunotherapy,”Genes&Cancer,Vol.9(5
‑
6),May 2018。
[0007]基于此，糖基化的LAG3特异性抗体可能在癌症疗法中有价值。

技术实现思路

[0008]本文提供了选择性结合糖基化的LAG3的分离的单克隆抗体(本文中的抗glycLAG3抗体)。在一些方面，抗体相对于未糖基化的LAG3选择性地结合在位置N188、N250、N256和/或N343处糖基化的LAG3。在某些方面，抗体增加IFN
‑
γ和/或IL
‑
2的分泌。在一些方面，抗体
NO:3的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的V
H
结构域和/或与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的VL结构域。这些抗glycLAG3抗体可以是嵌合抗体并且包含人恒定结构域，例如来自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定结构域。
[0016]在一个实施方案中，特异性和优先结合糖基化的LAG3的抗glycLAG3抗体包含V
H
结构域，所述V
H
结构域包含分别具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Chothia CDR 1
‑
3；包含分别具有SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的AbM CDR 1
‑
3；包含分别具有SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Kabat CDR 1
‑
3；或包含分别具有SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的Contact CDR 1
‑
3，或其组合。在一个实施方案中，抗glycLAG3抗体与包含V
H
结构域的抗体竞争特异性结合糖基化的LAG3，所述V
H
结构域包含分别具有SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的氨基酸序列的Chothia CDR 1
‑
3；包含分别具有SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的AbM CDR 1
‑
3；包含分别具有SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Kabat CDR 1
‑
3；或包含分别具有SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的Contact CDR 1
‑
3，或其组合。优选地，V
H
和V
L
结构域具有相同类别的CDR，即两者都具有Chothia、AbM、Kabat或Contact CDR。
[0017]在其他实施方案中，抗glycLAG3抗体具有包含CDR H1、CDR H2和CDR H3的V
H
结构域，所述CDR H1、CDR H2和CDR H3具有在以下的1、2或3个CDR中具有1、2、3、4或5个氨基酸置换的氨基酸序列：分别具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Chothia CDR，或分别具有SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的AbM CDR，或分别具有SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:8的氨基酸序列的Cabat CDR，或分别具有SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的Contact CDR。抗glycLAG3抗体可以具有在V
H
和V
L
结构域二者的CDR中的氨基酸置换。在一些实施方案中，氨基酸置换是保守置换。
[0018]优选地，前述抗体具有人框架区，即是STC1317的人源化形式，并且任选地包含人恒定结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的单克隆抗体，其相对于未糖基化形式的LAG3，选择性结合糖基化的LAG3。2.权利要求1所述的分离的抗体，其中抗体增加IFN
‑
γ和/或IL
‑
2的分泌或其中抗体增加T细胞增殖。3.权利要求1所述的分离的抗体，其中抗体阻断LAG3与Gal
‑
3、MHCII、LSECtin和CD3中的一种或多种的结合。4.权利要求1或3所述的分离的抗体，其中抗体相对于未糖基化的LAG3选择性地结合在位置N188、N250、N256、N343或其任何组合处糖基化的LAG3。5.权利要求1至4中任一项所述的分离的抗体，其中抗glycLAG3抗体对糖基化的LAG3的结合亲和力为0.1
‑
10nM，包括下限值和上限值。6.权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中抗体掩蔽LAG3在N188、N250、N256或N145中的一个或多个处的糖基化。7.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其与MAb STC1317竞争或交叉竞争与糖基化的LAG3的特异性结合。8.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其中V
H
结构域具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列并且V
L
具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列。9.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其中V
H
结构域具有与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％、95％或98％相同的氨基酸序列。10.权利要求1至6或9中任一项所述的分离的抗体，其中V
L
结构域具有与SEQ ID NO：5的氨基酸序列至少90％、95％或98％相同的氨基酸序列。11.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其具有V
H
结构域，所述V
H
结构域包含具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的Chothia CDR H1、具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR H2以及具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR H3。12.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其具有V
H
结构域，所述V
H
结构域包含具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的AbM CDR H1、具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的CDR H2以及具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR H3。13.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其具有V
H
结构域，所述V
H
结构域包含具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的Kabat CDR H1、具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR H2以及具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR H3。14.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其具有V
H
结构域，所述V
H
结构域包含具有SEQ ID NO：13的氨基酸序列的Contact CDR H1、具有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的CDR H2以及具有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的CDR H3。15.权利要求1至6或11至14中任一项所述的分离的抗体，其具有V
L
结构域，所述V
L
结构包含具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的CDR L1、具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列的CDR L2以及具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR L3。16.权利要求1至6或11至14中任一项所述的分离的抗体，其具有V
L
结构域，所述V
L
结构包含具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的Contact CDR L1、具有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的CDR L2以及具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的CDR L3。17.权利要求1至6中任一项所述的分离的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：斯特库比公司，
类型：发明
国别省市：