使用融合蛋白进行TCR重编程的组合物和方法技术

本文提供了编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)和TCR恒定结构域的重组核酸、表达编码的分子的经修饰的T细胞及其用于治疗包括癌症在内的疾病的方法。本文描述了包含包括CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRγ、TCRδ、TCRα和TCRβ链的TCR亚基的融合蛋白的经修饰的T细胞，所述TCR亚基具有对细胞表面抗原特异的结合结构域，所述经修饰的T细胞具有克服现有方法的局限性的潜力。潜力。潜力。

Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用融合蛋白进行TCR重编程的组合物和方法
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月12日提交的美国临时申请第62/899,563号和2020年2月7日提交的美国临时申请第62/971,682号的权益，所述临时申请的每一项通过引用以其整体并入本文。
[0003]专利技术背景
[0004]大多数血液学恶性肿瘤或晚期实体瘤患者用标准疗法是无法治愈的。另外，常规治疗选项通常具有严重的副作用。已经进行了许多尝试来利用患者的免疫系统来排斥癌细胞，这种方法统称为癌症免疫疗法。然而，有几个障碍使其很难达到临床效果。虽然已经鉴定了数百种所谓的肿瘤抗原，但这些抗原通常来源于自身，因此可以针对健康组织实施癌症免疫治疗，或者免疫原性差。此外，癌细胞利用多种机制使其自身不可见或对癌症免疫疗法引发和传播的免疫攻击产生敌意。
[0005]使用嵌合抗原受体(CAR)修饰的自体T细胞疗法(其依赖于将遗传工程化的T细胞重定向至癌细胞上的合适的细胞表面分子)的最新进展显示出在利用免疫系统的力量治疗B细胞恶性肿瘤方面的有希望的结果(参见，例如，Sadelain等人，Cancer Discovery 3:388
‑
398(2013))。CD19特异性CAR T细胞(称为CTL019)的临床结果已显示患有慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的患者以及患有急性淋巴母细胞白血病(ALL)的儿童的完全缓解(参见，例如，Kalos等人，Sci Transl Med 3:95ra73(2011)，Porter等人，NEJM 365:725<br/>‑
733(2011)，Grupp等人，NEJM 368:1509
‑
1518(2013))。替代方法是使用针对肿瘤相关肽抗原选择的T细胞受体(TCR)α链和β链对自体T细胞进行遗传工程。这些TCR链将形成完整的TCR复合物，并为T细胞提供具有第二确定特异性的TCR。对于在滑膜癌患者中表达NY
‑
ESO
‑1‑
特异性TCRα链和β链的工程化的自体T细胞，获得了令人鼓舞的结果。
[0006]除了表达CAR或第二TCR的遗传修饰的T细胞在体外/离体识别并破坏各自靶细胞的能力以外，利用工程化的T细胞进行的成功患者疗法还可能要求T细胞能够强烈活化、扩增和随时间推移的持续性，并且在疾病复发的情况下，使得能够产生“记忆”反应。CAR T细胞的高且可控制的临床疗效目前仅限于CD19阳性B细胞恶性肿瘤和表达HLA
‑
A2的表达NY
‑
ESO
‑1‑
肽的滑膜肉瘤患者。

技术实现思路

[0007]显然有必要改进遗传工程化的T细胞，以更广泛地对抗各种人恶性肿瘤。
[0008]本文描述了包含TCR亚基(包括CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRγ、TCRδ、TCRα和TCRβ链)的融合蛋白的经修饰的T细胞，所述TCR亚基具有对细胞表面抗原特异的结合结构域，所述经修饰的T细胞具有克服现有方法的局限性的潜力。另外，这些经修饰的T细胞可能破坏内源TCR(例如，TCRα、β或两者)的功能。这些经修饰的T细胞可具有比CAR更高效地杀死靶细胞，但释放相当或更低水平的促炎细胞因子的能力。这些经修饰的T细胞及其使用方法可代表这些细胞相对于CAR的有利方面，因为这些细胞因子水平的升高与过继性CAR
‑
T疗法的剂量限制毒性相关。
[0009]本文提供了包含T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)和TCR恒定结构域的经修饰的T细胞，产生经修饰的T细胞的方法，及其用于治疗疾病的方法。本文所述的TCR恒定结构域可以是TCRα恒定结构域、TCRβ恒定结构域、TCRα恒定结构域和TCRβ恒定结构域、TCRγ恒定结构域、TCRδ恒定结构域或TCRγ恒定结构域和TCR恒定结构域。本文所述的TFP可以包含TCR亚基和抗体或其片段。本文所述的TFP可以包含TCR亚基和结合配体或其片段。TCR亚基可以源自诸如TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ε、CD3δ或CD3γ的TCR链中的任一种。抗体或其片段可以是鼠的、人的或人源化的。
[0010]一方面，本公开提供了重组核酸，所述重组核酸包含编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含TCR亚基，所述TCR亚基包含TCR胞外结构域的至少一部分，和跨膜结构域，和包含抗原结合结构域的抗体；以及编码一个或多个TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域或TCRδ恒定结构域，或编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述抗体可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。
[0011]另一方面，本公提供了重组核酸，所述重组核酸包含编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含TCR亚基，所述TCR亚基包含TCR胞外结构域的至少一部分，跨膜结构域，和结合配体或其片段，所述结合配体或其片段能够与抗体或其片段结合；以及编码TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域或TCRδ恒定结构域，或编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基和所述结合配体或其片段可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。
[0012]在一些实施方案中，TCR亚基还包含TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ的胞内结构域，或者包含来自CD3ε、CD3γ或CD3δ的胞内信号传导结构域的刺激结构域的胞内结构域。在一些实施方案中，TCR恒定结构域是TCRδ恒定结构域。在一些实施方案中，TCRδ恒定结构域包含SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:243或SEQ ID NO:265、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。在一些实施方案中，胞内结构域是TCRγ的胞内结构域。在一些实施方案中，编码TCRδ恒定结构域的序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码TCRδ恒定结构域的序列可操作地连接。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域或配体结合结构域与TFP的抗原结合结构域或配体结合结构域相同或不同。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域或配体结合结构域通过接头与编码TCRδ恒定结构域的序列可操作地连接。在一些实施方案中，TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域。在一些实施方案中，TCRγ恒定结构域包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:155、其功能性片段，或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。在一些实施方案中，胞内结构域是TCRδ的胞内结构域。在一些实施方案中，编码TCRγ恒定结构域的序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码TCRγ恒定结构域的序列可操作地连接。在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组核酸，所述重组核酸包含(a)编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含(i)TCR亚基，所述TCR亚基包含(1)TCR胞外结构域的至少一部分，和(2)跨膜结构域，和(ii)包含抗原结合结构域的抗体；以及(b)编码TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域或TCRδ恒定结构域，或编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述抗体可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。2.一种重组核酸，所述重组核酸包含(a)编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含(i)TCR亚基，所述TCR亚基包含(1)TCR胞外结构域的至少一部分，(2)跨膜结构域，和(ii)能够与抗体或其片段结合的结合配体或其片段；以及(b)编码TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域或TCRδ恒定结构域，或编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述结合配体或其片段可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。3.如权利要求1或权利要求2所述的重组核酸，其中所述TCR亚基还包含TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ的胞内结构域，或包含来自CD3ε、CD3γ或CD3δ的胞内信号传导结构域的刺激结构域的胞内结构域。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR恒定结构域是TCRδ恒定结构域。5.如权利要求4所述的重组核酸，其中所述TCRδ恒定结构域包含SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:243或SEQ ID NO:265、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。6.如权利要求3
‑
5中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内结构域是TCRγ的胞内结构域。7.如权利要求3
‑
5中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TCRδ恒定结构域的序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码所述TCRδ恒定结构域的序列可操作地连接。8.如权利要求7所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与所述TFP的所述抗原结合结构域或配体结合结构域相同或不同。9.如权利要求7所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域通过接头与编码所述TCRδ恒定结构域的序列可操作地连接。
10.如权利要求1
‑
3中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域。11.如权利要求10所述的重组核酸，其中所述TCRγ恒定结构域包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:155、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。12.如权利要求10或11所述的重组核酸，其中所述胞内结构域是TCRδ的胞内结构域。13.如权利要求8
‑
12中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TCRγ恒定结构域的所述序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码所述TCRγ恒定结构域的所述序列可操作地连接。14.如权利要求13所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与所述TFP的所述抗原结合结构域或配体结合结构域相同或不同。15.如权利要求13所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域通过接头与编码所述TCRγ恒定结构域的序列可操作地连接。16.如权利要求1
‑
3中任一项所述的重组核酸，其中所述重组核酸包含编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列。17.如权利要求16所述的重组核酸，其中所述TCRγ恒定结构域包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:155、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。18.如权利要求16或17的重组核酸，其中编码TCRγ恒定结构域的所述序列还编码TCRγ可变结构域，从而编码完整TCRγ结构域。19.如权利要求18所述的重组核酸，其中所述完整TCRγ结构域是γ9或γ4。20.如权利要求18或19所述的重组核酸，其中所述完整TCRγ结构域包含SEQ ID NO:255、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。21.如权利要求16
‑
20中任一项所述的重组核酸，其中所述TCRδ恒定结构域包含SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:243或SEQ ID NO:265、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。22.如权利要求16
‑
21中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TCRδ恒定结构域的所述序列还编码TCRδ可变结构域，从而编码完整TCRδ结构域。23.如权利要求22所述的重组核酸，其中所述完整TCRδ结构域是δ2或δ1。24.如权利要求22或23所述的重组核酸，其中所述完整TCRδ恒定结构域包含SEQ ID NO:256、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。25.如权利要求16
‑
24中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内信号传导结构域是CD3ε、CD3γ或CD3δ。26.如权利要求16
‑
25中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内信号传导结构域是CD3ε。27.如权利要求1
‑
26中任一项所述的重组核酸，所述重组核酸还包含至少一个前导序列和至少一个接头。28.如权利要求27所述的重组核酸，所述重组核酸还包含TCRα恒定结构域的一部分、TCRβ结构域的一部分或两者。29.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述序列从5
’
至3
’
包含第一前导序列、抗原结合结构域序列、接头、TRDC基因序列、可切割接头序列、第二前导序列和TRGC基因序列。
30.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述序列从5
’
至3
’
包含第一前导序列、TRDC基因序列、可切割接头序列、第二前导序列、抗原结合结构域序列、接头序列和TRGC基因序列。31.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述序列从5
’
至3
’
包含第一前导序列、抗原结合结构域序列、第一接头序列、TRDC基因序列、可切割接头、第二前导序列、第二抗原结合结构域序列、第二接头序列和TRGC基因序列。32.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述序列从5
’
至3
’
包含第一前导序列、TRDC基因序列、第一可切割接头序列、第二前导序列、TRGC基因序列、第二可切割接头序列、第三前导序列、抗原结合结构域序列、接头序列和CD3ε基因序列。33.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述序列从5
’
至3
’
包含第一前导序列、第一抗原结合结构域序列、第一接头序列、TRDC基因序列或其片段、TRAC基因序列或其片段、可切割接头序列、第二前导序列、第二抗原结合结构域序列、第二接头序列、TRGC基因序列或其片段以及TRBC基因序列或其片段。34.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码如SEQ ID NO:1中所示的多肽。35.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码如SEQ ID NO:2中所示的多肽。36.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码如SEQ ID NO:3中所示的多肽。37.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码如SEQ ID NO:4中所示的多肽。38.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码如SEQ ID NO:5中所示的多肽。39.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:242的序列。40.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:244的序列。41.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:245的序列。42.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:246的序列。43.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:248的序列。44.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:250的序列。45.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:252的序列。46.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:257的序列。47.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:263的序
列。48.如权利要求1
‑
33中任一项所述的重组核酸，其中所述序列编码SEQ ID NO:264的序列。49.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体能够结合所述抗体的Fc结构域。50.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体能够选择性结合IgG1抗体。51.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体能够特异性结合IgG4抗体。52.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述抗体或其片段与细胞表面抗原结合。53.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述抗体或其片段是鼠的、人的或人源化的。54.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述抗体或其片段与肿瘤细胞表面上的细胞表面抗原结合。55.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体包括单体、二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体或十聚体。56.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体不包括抗体或其片段。57.如权利要求56所述的重组核酸，其中所述结合配体包括CD16多肽或其片段。58.如权利要求56所述的重组核酸，其中所述结合配体包括CD16结合多肽。59.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述结合配体是人的或人源化的。60.如权利要求1所述的重组核酸，所述重组核酸还包含编码能够被所述结合配体结合的抗体或其片段的核酸序列。61.如权利要求60所述的重组核酸，其中所述抗体或其片段能够从细胞分泌。62.一种重组核酸，所述重组核酸包含(a)编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含(i)TCR亚基，所述TCR亚基包含(1)TCR胞外结构域的至少一部分，和(2)跨膜结构域，和(ii)抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含与在细胞表面上表达的受体或多肽结合的配体或其片段；以及(b)编码TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域或TCRδ恒定结构域；或编码TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述抗原结合结构域可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。63.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述TCR亚基还包含TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ的胞内结构域或包含来自CD3ε、CD3γ或CD3δ的胞内信号传导结构域的刺激结构域的胞内结构域。64.如权利要求1
‑
63中任一项所述的重组核酸，所述重组核酸还包含至少一部分编码TCRα恒定结构域、TCRβ恒定结构域或TCRα恒定结构域和TCRβ恒定结构域的部分序列的序列。65.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域包含配体。66.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述配体与细胞的所述受体结合。
67.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述配体与在细胞表面上表达的所述多肽结合。68.如权利要求62所述的重组核酸，其中在细胞表面上表达的所述受体或多肽包括应激反应受体或多肽。69.如权利要求62所述的重组核酸，其中在细胞表面上表达的所述受体或多肽是MHC I类相关糖蛋白。70.如权利要求69所述的重组核酸，其中所述MHC I类相关糖蛋白选自由以下组成的组：MICA、MICB、RAET1E、RAET1G、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4及其组合。71.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域包括单体、二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体或十聚体。72.如权利要求71所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域包括配体或其片段的单体或二聚体。73.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述配体或其片段是单体、二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体或十聚体。74.如权利要求73所述的重组核酸，其中所述配体或其片段是单体或二聚体。75.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域不包括抗体或其片段。76.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域不包括可变区。77.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域不包括CDR。78.如权利要求62所述的重组核酸，其中所述配体或其片段是天然杀伤2D组(NKG2D)配体或其片段。79.如权利要求1
‑
78中任一项所述的重组核酸，其中当在T细胞中表达时，所述TCR恒定结构域掺入功能性TCR复合物中。80.如权利要求1
‑
79中任一项所述的重组核酸，其中当在T细胞中表达时，所述TCR恒定结构域掺入到与掺入了所述TFP的功能性TCR复合物相同的功能性TCR复合物中。81.如权利要求1
‑
80中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TFP的所述序列和编码一个或多个所述TCR恒定结构域的所述序列包含在同一核酸分子中。82.如权利要求1
‑
81中任一项所述的重组核酸，其中所述编码的TFP与所述编码的TCR恒定结构域通过第一接头序列可操作地连接。83.如权利要求82所述的重组核酸，其中所述第一接头包含蛋白酶切割位点。84.如权利要求83所述的重组核酸，其中所述蛋白酶切割位点是2A，例如T2A或P2A切割位点。85.如权利要求1
‑
84中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TFP的所述序列和编码所述TCR恒定结构域的所述序列包含在不同的核酸分子中。86.如权利要求1
‑
85中任一项所述的重组核酸，其中所述TFP的所述TCR亚基和所述抗体结构域、所述抗原结合结构域或所述结合配体或其片段通过第二接头序列可操作地连接。87.如权利要求86所述的重组核酸，其中所述第二接头序列包含(G4S)
n
，其中n＝1至4。88.如权利要求1
‑
87中任一项所述的重组核酸，其中所述跨膜结构域是来自CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRδ或TCRγ的TCR跨膜结构域。
89.如权利要求3
‑
61和63
‑
88中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内结构域仅源自CD3ε、仅源自CD3γ、仅源自CD3δ、仅源自TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ。90.如权利要求1
‑
89中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR亚基包含(i)TCR胞外结构域的至少一部分，(ii)TCR跨膜结构域，和(iii)TCR胞内结构域，其中(i)、(ii)和(iii)中的至少两个来自同一TCR亚基。91.如权利要求1
‑
90中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR胞外结构域包含选自由TCRγ链、TCRδ链、CD3εTCR亚基、CD3γTCR亚基、CD3δTCR亚基组成的组的蛋白质的胞外结构域或其部分、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。92.如权利要求91所述的重组核酸，其中所述TCR亚基包含(i)TCR胞外结构域的至少一部分，(ii)TCR跨膜结构域，和(iii)TCRγ链或TCRδ链的TCR胞内结构域。93.如权利要求92所述的重组核酸，其中所述TCR胞外结构域包含TCRγ链或TCRδ链的恒定结构域的胞外部分、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。94.如权利要求92或93所述的重组核酸，其中所述TCR亚基包含(i)TCR胞外结构域的至少一部分、(ii)TCR跨膜结构域和(iii)TCR胞内结构域是或包含δ恒定结构域或其片段。95.如权利要求94所述的重组核酸，其中所述δ恒定结构域具有SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:243或SEQ ID NO:265的序列、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。96.如权利要求92或93所述的重组核酸，其中包含(i)TCR胞外结构域的至少一部分、(ii)TCR跨膜结构域和(iii)TCR胞内结构域的所述TCR亚基是或包含γ恒定结构域。97.如权利要求96所述的重组核酸，其中所述γ恒定结构域具有SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:155的序列、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。98.如权利要求94
‑
97中任一项所述的重组核酸，其中所述TFP的所述胞外结构域不包含γ链或δ链的可变结构域。99.如权利要求3
‑
61和63
‑
88中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR亚基包含TCR胞内结构域，所述TCR胞内结构域包含选自CD3ε、CD3γ或CD3δ的胞内信号传导结构域的蛋白质的刺激结构域，或对其具有至少一个修饰的氨基酸序列。100.如权利要求99所述的重组核酸，其中所述TFP的所述TCR亚基包含CD3的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。101.如权利要求100所述的重组核酸，其中CD3ε的所述TCR亚基包含SEQ ID NO:258的序列、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。102.如权利要求1
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101中任一项所述的重组核酸，其中所述TFP、所述TCRγ恒定结构域、所述TCRδ恒定结构域及其任何组合能够与内源TCR复合物和/或至少一种内源TCR多肽功能性相互作用。103.如权利要求1
‑
102中任一项所述的重组核酸，其中(a)所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域，并且所述TFP功能性整合到包含TCRδ、CD3ε、CD3γ、CD3δ或其组合的内源亚基的TCR复合物中；(b)所述TCR恒定结构域是TCRδ恒定结构域，并且所述TFP功能性整合到包含TCRγ、CD3ε、CD3γ、CD3δ或其组合的内源亚基的TCR复合物中；或
(c)所述TCR恒定结构域是TCRγ恒定结构域和TCRδ恒定结构域，并且所述TFP功能性整合到包含CD3ε、CD3γ、CD3δ或其组合的内源亚基的TCR复合物中。104.如权利要求1
‑
103中任一项所述的重组核酸，其中所述对其的至少一个但不超过20个修饰包括介导细胞信号传导的氨基酸的修饰或响应于配体与所述TFP结合而被磷酸化的氨基酸的修饰。105.如权利要求1、3
‑
61和85
‑
104中任一项所述的重组核酸，其中所述抗体是抗体片段。106.如权利要求105所述的重组核酸，其中所述抗体片段是scFv、单结构域抗体结构域、V
H
结构域或V
L
结构域。107.如权利要求1、3
‑
61和85
‑
106中任一项所述的重组核酸，其中所述抗原结合结构域选自由以下组成的组：抗CD19结合结构域、抗B细胞成熟抗原(BCMA)结合结构域、抗间皮素(MSLN)结合结构域、抗CD20结合结构域、抗CD70结合结构域、抗79b结合结构域、抗HER2结合结构域、抗PMSA结合结构域、抗MUC16结合结构域、抗CD22结合结构域、抗PD
‑
L1结合结构域、抗BAFF或BAFF受体结合结构域、抗连接素
‑
4结合结构域、抗TROP
‑
2结合结构域、抗GPC3结合结构域和抗ROR
‑
1结合结构域。108.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗MSLN结合结构域包含SEQ ID NO:60的CDR1、SEQ ID NO:61的CDR2和SEQ ID NO:62的CDR3。109.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗MSLN结合结构域包含SEQ ID NO:63的CDR1、SEQ ID NO:64的CDR2和SEQ ID NO:65的CDR3。110.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗MSLN结合结构域包含SEQ ID NO:66的CDR1、SEQ ID NO:67的CDR2和SEQ ID NO:68的CDR3。111.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗MSLN结合结构域包含与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71的序列具有至少约80％序列同一性的序列。112.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗CD19结合结构域包含SEQ ID NO:73的轻链CDR1、SEQ ID NO:75的CDR2和SEQ ID NO:77的CDR3。113.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗CD19结合结构域包含SEQ ID NO:79的重链CDR1、SEQ ID NO:81的CDR2和SEQ ID NO:83的CDR3。114.如权利要求107所述的重组核酸，其中所述抗CD19结合结构域包含与SEQ ID NO:85的序列具有至少约80％序列同一性的轻链可变区和/或与SEQ ID NO:87的序列具有至少约80％序列同一性的重链可变区。115.如权利要求1
‑
114中任一项所述的重组核酸，所述重组核酸还包含编码TCRα跨膜结构域的序列。116.如权利要求1
‑
114中任一项所述的重组核酸，所述重组核酸还包含编码TCRβ跨膜结构域的序列。117.如权利要求1
‑
114中任一项所述的重组核酸，所述重组核酸还包含编码TCRα跨膜结构域的序列和编码TCRβ跨膜结构域的序列。118.一种重组核酸，所述重组核酸包含(a)编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含(i)TCR亚基，所述TCR亚基包含
(1)鼠TCRα或鼠TCRβ胞外结构域的至少一部分，和(2)鼠TCRα或鼠TCRβ跨膜结构域，和(ii)包含抗原结合结构域的抗体或其片段；以及(b)编码一个或多个TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是鼠TCRα恒定结构域或鼠TCRβ恒定结构域；或编码鼠TCRα恒定结构域和鼠TCRβ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述抗体可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。119.一种重组核酸，所述重组核酸包含(a)编码T细胞受体(TCR)融合蛋白(TFP)的序列，所述TFP包含(i)TCR亚基，所述TCR亚基包含(1)鼠TCRα或鼠TCRβ胞外结构域的至少一部分，和(2)鼠TCRα或鼠TCRβ跨膜结构域，和(ii)能够与抗体或其片段结合的结合配体或其片段；以及(b)编码一个或多个TCR恒定结构域的序列，其中所述TCR恒定结构域是鼠TCRα恒定结构域或鼠TCRβ恒定结构域；或编码鼠TCRα恒定结构域和鼠TCRβ恒定结构域的序列；其中所述TCR亚基与所述结合配体或其片段可操作地连接，并且其中当在包含内源TCR的功能性破坏的经修饰的T细胞中表达时，所述TFP功能性掺入TCR复合物中。120.如权利要求118或119所述的重组核酸，其中所述TCR亚基包含鼠TCRα或鼠TCRβ的胞内结构域。121.如权利要求118或120中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR恒定结构域是TCRα恒定结构域。122.如权利要求121所述的重组核酸，其中所述TCRα恒定结构域包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146或SEQ ID NO:207、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。123.如权利要求121所述的重组核酸，其中所述TCRα恒定结构域包含鼠TCRα恒定结构域。124.如权利要求123所述的重组核酸，其中所述鼠TCRα恒定结构域包含所述鼠TCRα恒定结构域的氨基酸2
‑
137。125.如权利要求124所述的重组核酸，其中所述鼠TCRα恒定结构域包含SEQ ID NO:146的氨基酸2
‑
137。126.如权利要求124所述的重组核酸，其中所述鼠TCRα恒定结构域包含SEQ ID NO:207的序列。127.如权利要求123所述的重组核酸，其中所述鼠TCRα恒定结构域包含SEQ ID NO:146的氨基酸82
‑
137。128.如权利要求127所述的重组核酸，其中所述鼠TCRα恒定结构域包含SEQ ID NO:17的序列。129.如权利要求122
‑
128中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内结构域是TCRβ的胞
内结构域。130.如权利要求121
‑
129中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TCRα恒定结构域的所述序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码所述TCRα恒定结构域的序列可操作地连接。131.如权利要求130所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与所述TFP的所述抗原结合结构域或配体结合结构域相同或不同。132.如权利要求130所述的重组核酸，其中所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域通过接头与编码所述TCRα恒定结构域的所述序列可操作地连接。133.如权利要求118
‑
120中任一项所述的重组核酸，其中所述TCR恒定结构域是TCRβ恒定结构域。134.如权利要求133所述的重组核酸，其中所述TCRβ恒定结构域包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:209、其功能性片段或其具有至少一个但不超过20个修饰的氨基酸序列。135.如权利要求134所述的重组核酸，其中TCRβ恒定结构域包括鼠TCRβ恒定结构域。136.如权利要求134所述的重组核酸，其中鼠TCRβ恒定结构域包含所述鼠TCRβ恒定结构域的氨基酸2
‑
173。137.如权利要求134所述的重组核酸，其中鼠TCRβ恒定结构域包含所述SEQ ID NO:152的氨基酸2
‑
173。138.如权利要求134所述的重组核酸，其中鼠TCRβ恒定结构域包含SEQ ID NO:209。139.如权利要求134所述的重组核酸，其中所述TCRβ恒定结构域包含SEQ ID NO:152的氨基酸123
‑
173。140.如权利要求134所述的重组核酸，其中所述TCRβ恒定结构域包含SEQ ID NO:18。141.如权利要求133
‑
140中任一项所述的重组核酸，其中所述胞内结构域是TCRα的胞内结构域。142.如权利要求118
‑
141中任一项所述的重组核酸，其中编码所述TCRβ恒定结构域的所述序列还编码第二抗原结合结构域或配体结合结构域，所述第二抗原结合结构域或配体结合结构域与编码所述TCRβ恒定结构域的所述序列可操作地连接。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕特里克，
申请(专利权)人：T细胞受体治疗公司，
类型：发明
国别省市：