一种预防骨坏死和/或促进血管生成的复合物及其制药用途制造技术

本发明专利技术提供了一种预防骨坏死和/或促进血管生成的复合物及其制药用途，属于生物医药领域。该复合物是以DNA四面体框架核酸和KLT多肽为原料制备而成的复合物，所述DNA四面体框架核酸和KLT多肽的摩尔比为1:(1～300)。实验结果表明，该复合物能有效促进内皮细胞的增殖和迁移，促进血管形成，并对双膦酸盐相关性颌骨坏死(BRONJ)起到良好的预防作用。值得注意的是，与DNA四面体框架核酸或KLT多肽相比，该复合物促进内皮细胞的增殖和迁移以及促进血管形成的效果显著提高，发挥了协同增效的作用。本发明专利技术提供的复合物能够用于制备促血管生成的药物以及预防骨坏死的药物，具有十分良好的应用前景。应用前景。应用前景。

A compound for preventing bone necrosis and / or promoting angiogenesis and its pharmaceutical use

【技术实现步骤摘要】
一种预防骨坏死和/或促进血管生成的复合物及其制药用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种预防骨坏死和/或促进血管生成的复合物及其制药用途。

技术介绍

[0002]骨坏死是指由于各种原因(机械、生物等)使骨循环中断、骨的活性成分死亡及随后修复的一系列复杂病理过程。骨坏死可累及全身许多关节，常见的骨坏死包括股骨头坏死、颌骨坏死、股骨髁坏死、肱骨头坏死等。
[0003]双膦酸盐(bisphosphonates，BPs)类药物作为一种抗骨质吸收的药物，主要应用于骨质疏松、佩吉特病(Paget病，又名湿疹样癌)、多发性骨髓瘤的预防和治疗以及肿瘤骨转移的预防。但是，长期使用BPs将引发严重的不良反应——双膦酸盐相关性颌骨坏死(Bisphosphonate related osteonecrosis of the jaw，BRONJ)。自2003年，关于BRONJ的报道逐年增多，发病率为1.6％
‑
14.8％，长期使用唑来膦酸的患者中，BRONJ发病率可高达20％。BRONJ患者可出现持续疼痛、流脓、张口受限、经久不愈的皮瘘甚至病理性骨折等，严重影响患者的生活质量，但目前医学界还缺少有效的应对措施。
[0004]目前临床尚无标准化治疗BRONJ的方案，原则上采用去除死骨及抗炎等对症治疗方法，但是预后较差。对于早期的患者，临床上主要以健康教育、使用抗生素、控制疼痛、使用漱口水等方式控制病情进展。当病情进展至三期时需采用清创，甚至手术切除病变等方式进行治疗，但是效果欠佳，病情容易进展和复发。因此，现阶段临床对于BRONJ多主张以预防为主。为有效预防拔牙术后BRONJ的发生，临床多采用拔牙术后创口早期关闭、高压氧治疗、干细胞疗法、生长因子等操作，但目前临床数据较少，难以达成共识。
[0005]DNA四面体框架核酸(tetrahedral framework nucleic acids,tFNA)是一种由4条单链DNA通过变性和复性，进而链间碱基互补配对形成的一种四面体结构，它易于合成，生物相容性高，通常用作某些药物的载体。赵丹等还报道了DNA四面体框架核酸可通过促进血管生成和M2极化来促进与双膦酸盐有关的颌骨坏死的治疗(2020年中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会第十次全国口腔生物医学学术年会暨第六次全国口腔杰青优青论坛论文汇编，2020
‑
10
‑
31)。但是，DNA四面体框架核酸在预防双膦酸盐相关性颌骨坏死中的效果有限，还无法满足临床需求。
[0006]因此，开发出一种对骨坏死，特别是BRONJ起到更好的预防作用的药物具有重要意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种预防骨坏死和/或促进血管生成的复合物及其制药用途。
[0008]本专利技术提供了一种复合物，它是以DNA四面体框架核酸和KLT多肽为原料制备而成的复合物，所述DNA四面体框架核酸和KLT多肽的摩尔比为1:(1～300)。
[0009]进一步地，所述DNA四面体框架核酸和KLT多肽的摩尔比为1:100。
[0010]进一步地，所述DNA四面体框架核酸由4条单链DNA经碱基互补配对形成，4条单链DNA的序列如SEQ ID NO.1～4所示；
[0011]和/或，KLT多肽的序列如SEQ ID NO.5所示。
[0012]本专利技术还提供了上述复合物的制备方法：将DNA四面体框架核酸和KLT多肽共同孵育，即得。
[0013]进一步地，所述共同孵育的温度为4～30℃，时间为0.5～15小时。
[0014]进一步地，所述共同孵育的温度为室温，时间为0.5小时。
[0015]进一步地，所述DNA四面体框架核酸的制备方法为：将4条单链DNA溶解于缓冲液中，充分混合，加热至95℃保持10分钟，之后降温至4℃维持20分钟，即得。
[0016]本专利技术还提供了一种预防骨坏死和/或促进血管生成的药物，它是以上述复合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的药物。
[0017]本专利技术还提供了上述复合物在制备预防骨坏死和/或促进血管生成的药物中的用途。
[0018]进一步地，所述骨坏死为颌骨坏死；
[0019]进一步地，所述颌骨坏死为双膦酸盐相关性颌骨坏死。
[0020]进一步地，所述药物能够促进内皮细胞的增殖和迁移。
[0021]本专利技术中，室温指25
±
5℃。
[0022]实验结果表明，本专利技术由tFNA和KLT形成的复合物tFNA
‑
KLT能有效促进内皮细胞的增殖和迁移，促进血管形成，并对双膦酸盐相关性颌骨坏死起到良好的预防作用。值得注意的是，与tFNA或KLT相比，本专利技术tFNA
‑
KLT促进内皮细胞的增殖和迁移以及促进血管形成的效果显著提高，发挥了协同增效的作用。本专利技术提供的tFNA
‑
KLT能够用于制备促血管生成的药物以及预防骨坏死的药物，具有十分良好的应用前景。
[0023]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0024]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0025]图1：合成复合物tFNA
‑
KLT的示意图。
[0026]图2：不同摩尔比的tFNA与KLT共同孵育后所得复合物的PAGE电泳结果。
[0027]图3：tFNA
‑
KLT的原子力显微镜检测图(a)、Zeta电位(b)及粒径(c)检测结果。
[0028]图4：KLT和tFNA
‑
KLT的入胞测试结果。
[0029]图5：CCK8检测不同浓度的tFNA(a)、KLT(b)和tFNA
‑
KLT(c)在24小时和48小时对HUVEC细胞增殖的影响；(d)CCK8测定250nMtFNA，250nM tFNA KLT，25μM KLT在24小时和48小时对HUVEC细胞增殖的影响；与对照组相比有显著性差异(*：24小时；#：48小时)，*(#)p<0.05，**(##)p<0.01，***(###)p<0.001。(e)HUVEC的EdU测定(Hoechst:蓝色；EdU:绿色)及其定量分析(f)，比例尺为75μm。HUVECs的伤口愈合试验(g)和用ImageJ(h)测量迁移面积的
ID NO.2)。
[0046]S3:
[0047]ACTACTATGGCGGGTGATAAAACGTGTAGCAAGCTGTAATCGACGGGAAGAGCATGCCCATCC(SEQ ID NO.3)。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合物，其特征在于，它是以DNA四面体框架核酸和KLT多肽为原料制备而成的复合物，所述DNA四面体框架核酸和KLT多肽的摩尔比为1:(1～300)。2.根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述DNA四面体框架核酸和KLT多肽的摩尔比为1:100。3.根据权利要求1或2所述的复合物，其特征在于，所述DNA四面体框架核酸由4条单链DNA经碱基互补配对形成，4条单链DNA的序列如SEQ ID NO.1～4所示；和/或，KLT多肽的序列如SEQ ID NO.5所示。4.权利要求1～3任一项所述复合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：将DNA四面体框架核酸和KLT多肽共同孵育，即得。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述共同孵育的温度为4～30℃，时间为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：林云锋，赵丹，蔡潇潇，肖德昡，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：