一种检测BCR-ABL融合基因的LAMP引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测BCR

A lamp primer set and kit for detecting bcr-abl fusion gene

【技术实现步骤摘要】
一种检测BCR
‑
ABL融合基因的LAMP引物组及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测BCR
‑
ABL融合基因的LAMP引物组及试剂盒。

技术介绍

[0002]慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是一类骨髓增殖性肿瘤，其发病机制与BCR
‑
ABL融合基因相关。BCR
‑
ABL融合基因由9号染色体和22号染色体易位导致形成，可表达具有高酪氨酸激酶活性的BCR
‑
ABL融合蛋白，BCR
‑
ABL融合蛋白活性的失调进而导致CML的发生。90％以上的CML患者可检测到Ph染色体和BCR
‑
ABL融合基因。BCR
‑
ABL融合基因中BCR基因的断裂区主要分为三个类型：Major
‑
BCR(M
‑
BCR)、minor(m
‑
BCR)和u
‑
BCR。其中，M
‑
BCR区BCR基因的断裂点通常被限制在一个5.8kb的DNA片段区域，断裂点发生在外显子e13和e14或e14和e15之间，断裂后的BCR基因外显子上游留在22号染色体上，并与ABL基因断裂后的外显子a2融合，转录为e13a2或e14a2型mRNA，编码P210融合蛋白，见于90％以上的CML病例中；m
‑
BCR区域的BCR基因断裂点通常发生在外显子e1和e2之间，转录为e1a2型的mRNA，编码P190融合蛋白，见于3％非典型CML和2/3的Ph+急性B淋巴细胞白血病(Ph
‑
positive B
‑
cell acute lymphoblastic leukemia，Ph+B
‑
ALL)病例中；u
‑
BCR区域的BCR基因断裂点通常发生在外显子e19和e20之间，转录为e19a2型mRNA，编码P230融合蛋白，常见于慢性中性粒细胞白血病(Chronic neutrophilic leukemia，CNL)病例中。小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)伊马替尼等靶向药物可以与BCR
‑
ABL融合蛋白的ATP结合位点结合，抑制BCR
‑
ABL靶点的磷酸化，进而阻断下游信号通路的传导，从而抑制CML细胞的增殖，并诱导细胞凋亡发生，可显著延长患者的生存时间。BCR
‑
ABL融合基因作为CML的分子标志，其检测也已经成为CML诊断的“黄金标准”。
[0003]目前检测BCR
‑
ABL融合基因的方法主要有荧光原位杂交法、荧光定量PCR法、基因芯片法、PCR测序法等。然而，该类方法均存在设备依赖性、成本高、实验方法繁琐，时间长等缺点。
[0004]环介导恒温扩增技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)方法是一种新型的核酸扩增方法，因其快速(30
‑
60分钟)、简易、灵敏、特异等特点近年来被广泛用于病毒、细菌等生物物种的鉴定工作，在60
‑
65℃下即可实现痕量扩增，为物种大规模快速检测做出了巨大贡献。现有技术中，尚无采用环介导恒温扩增技术检测BCR
‑
ABL融合基因的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是解决现有技术中检测BCR
‑
ABL融合基因的方法存在的不足，提供一种检测BCR
‑
ABL融合基因的LAMP引物组、试剂盒及检测方法。
[0006]技术方案
[0007]一种检测BCR
‑
ABL融合基因的LAMP引物组，包括检测BCR
‑
ABL1基因的LAMP引物组、
检测BCR
‑
ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR
‑
ABL3基因的LAMP引物组；
[0008]所述检测BCR
‑
ABL1基因的LAMP引物组包括BCR
‑
ABL1
‑
F3引物、BCR
‑
ABL1
‑
B3引物、BCR
‑
ABL1
‑
FIP引物、BCR
‑
ABL1
‑
BIP引物和BCR
‑
ABL1
‑
LB引物，所述BCR
‑
ABL1
‑
F3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
B3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
FIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
BIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
LB引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
[0009]所述检测BCR
‑
ABL2基因的LAMP引物组包括BCR
‑
ABL2
‑
F3引物、BCR
‑
ABL2
‑
B3引物、BCR
‑
ABL2
‑
FIP引物、BCR
‑
ABL2
‑
BIP引物、BCR
‑
ABL2
‑
LF引物和BCR
‑
ABL2
‑
LB，所述BCR
‑
ABL2
‑
F3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述BCR
‑
ABL2
‑
B3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述BCR
‑
ABL2
‑
FIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述BCR
‑
ABL2
‑
BIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，所述BCR
‑
ABL2
‑
LF引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10，所述BCR
‑
ABL2
‑
LB引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；
[0010]所述检测BCR
‑
ABL3基因的LAMP引物组包括BCR
‑
ABL3
‑
F3引物、BCR
‑
ABL3
‑
B3引物、BCR
‑
ABL3
‑
FIP引物、BCR
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测BCR
‑
ABL融合基因的LAMP引物组，包括检测BCR
‑
ABL1基因的LAMP引物组、检测BCR
‑
ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR
‑
ABL3基因的LAMP引物组；所述检测BCR
‑
ABL1基因的LAMP引物组包括BCR
‑
ABL1
‑
F3引物、BCR
‑
ABL1
‑
B3引物、BCR
‑
ABL1
‑
FIP引物、BCR
‑
ABL1
‑
BIP引物和BCR
‑
ABL1
‑
LB引物，所述BCR
‑
ABL1
‑
F3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
B3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
FIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
BIP引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述BCR
‑
ABL1
‑
LB引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述检测BCR
‑
ABL2基因的LAMP引物组包括BCR
‑
ABL2
‑
F3引物、BCR
‑
ABL2
‑
B3引物、BCR
‑
ABL2
‑
FIP引物、BCR
‑
ABL2
‑
BIP引物、BCR
‑
ABL2
‑
LF引物和BCR
‑
ABL2
‑
LB，所述BCR
‑
ABL2
‑
F3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述BCR
‑
ABL2
‑
B3引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述BCR
‑
ABL2
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：刘松柏，
申请(专利权)人：苏州卫生职业技术学院，
类型：发明
国别省市：