一种狼疮抗凝物检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种狼疮抗凝物检测试剂盒，包括LA1筛选试剂、LA2确认试剂；LA1筛选试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第一肝素中和剂、第一缓冲液和第一辅料，LA1筛选试剂为液态；LA2确认试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第二肝素中和剂、第二缓冲液和第二辅料，LA2确认试剂为液态；LA1筛选试剂中的重组磷脂的含量低于LA2确认试剂中的重组磷脂的含量；本发明专利技术将重组蛇毒酶和重组磷脂搭配使用，试剂灵敏度更高，测试阳性或弱阳性样本时，单位时间内的变化幅度要显著增强，提高阳性样本的检出率，降低假阴性；还包括肝素中和剂，消除了肝素的影响，提高准确性；试剂为液态，使用方便、成本低廉、稳定性好。稳定性好。

A lupus anticoagulant detection kit

【技术实现步骤摘要】
一种狼疮抗凝物检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种狼疮抗凝物检测试剂盒。

技术介绍

[0002]狼疮抗凝物（lupus anticoagulant，LA）是一组能直接与负电荷磷脂结合，或与磷脂蛋白复合物结合的免疫球蛋白，属于抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody，APL）。持续LA阳性患者被认为有较高血栓形成和复发风险，也是不明原因习惯性流产、死胎、易栓性疾病及某些自身免疫性疾病的危险信号；LA还能增强血小板聚集和抑制纤溶活性，故LA阳性患者易出现血栓并发症。
[0003]目前检测LA常用的方法为活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、 改良的稀释蝰蛇毒时间（dilute Russell viper venom time，dRVVT）及二氧化硅凝固时间（silica clotting time，SCT）检测法，通常以筛选试验、混合试验和确认试验传统的三步法来判读是否存在LA，且间隔12周后第二次检测，LA仍为阳性时方可确诊。LA在APS的诊断和治疗中起着非常重要的作用。dRVVT法相比于SCT法的特异性更高，能够精准地反映病人体内第X因子活化之后参与的凝血过程，且不受凝血因子VII，VIII，IX，XI等异常或缺失的影响，抗干扰能力更强，可适用于全自动凝血分析仪，在临床应用中的前景广阔。
[0004]但市面上主流的狼疮抗凝物检测试剂盒（dRVVT法）均为冻干粉形态，冻干工艺过于复杂，试剂的瓶间差较大，使用前均需要进行复溶操作，增加了人工操作步骤，并且易受复溶水质，移液器准确性和操作者手法的影响；狼疮抗凝物检测试剂盒（dRVVT法）灵敏度有待提升，尤其是对于待测样本中存在弱LA的情况下，经常会出现假阴性的结果；狼疮抗凝物检测试剂盒（dRVVT法）稳定性有待提升，效期不够长，不利于客户的使用和试剂储存，因此提升试剂的稳定性是非常有必要的；现有狼疮抗凝物检测试剂盒（dRVVT法）抗肝素干扰能力不足，遇到含肝素样本测试时，所得的结果不可信，因此急需提升现有试剂盒的抗肝素干扰能力；狼疮抗凝物检测试剂盒（dRVVT法）大多为国外进口，试剂盒定价昂贵，运输时间久，到货周期长，对医院和患者均造成了一定程度的影响。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题在于，针对现有技术的缺陷，提供一种狼疮抗凝物检测试剂盒，价格低廉、全液体、试剂灵敏度高、便捷、快速、抗干扰能力强、稳定性好、准确性好。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种狼疮抗凝物检测试剂盒，包括LA1筛选试剂、LA2确认试剂；所述LA1筛选试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第一肝素中和剂、第一缓冲液和第一辅料，所述LA1筛选试剂为液态；所述LA2确认试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第二肝素中和剂、第二缓冲液和第二辅料，所述LA2确认试剂为液态；
所述LA1筛选试剂中的重组磷脂的含量低于所述LA2确认试剂中的重组磷脂的含量。
[0007]进一步地，优选所述重组蛇毒酶在所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂的含量均为1~3 IU/mL。
[0008]进一步地，优选所述LA1筛选试剂中的重组磷脂的含量为0.02~0.06%，所述LA2确认试剂中的重组磷脂的含量为0.4~0.8%。
[0009]进一步地，优选所述第一肝素中和剂包括聚丙烯酰胺，所述聚丙烯酰胺在所述LA1筛选试剂的含量为1~3 mg/mL。
[0010]进一步地，优选所述第二肝素中和剂包括聚丙烯酰胺，所述聚丙烯酰胺在所述LA2确认试剂的含量为1~3 mg/mL。
[0011]进一步地，优选所述第一缓冲液、第二缓冲液分别为PBS缓冲液、Tris缓冲液、Hepes缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液、柠檬酸缓冲液中的至少一种，LA1筛选试剂、LA2确认试剂的pH均为7.2~7.4。
[0012]进一步地，优选所述第一缓冲液、第二缓冲液均为浓度100~200 mM 的PBS缓冲液。
[0013]进一步地，优选所述第一辅料包括第一稳定剂，所述第一稳定剂包括甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
‑
80、BSA、HSA、明胶、吐温
‑
20、海藻糖、葡萄糖、β
‑
环糊精和甘露醇中的一种或几种。
[0014]进一步地，优选第一稳定剂包括组分：甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
‑
80，且以上组分在所述LA1筛选试剂中的质量百分比为：甘氨酸1
‑
3%、聚乙二醇2000 1
‑
5%、Span
‑
80 0.1
‑
1%。
[0015]进一步地，优选所述第二辅料包括第二稳定剂，所述第二稳定剂包括甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
‑
80、BSA、HSA、明胶、吐温
‑
20、海藻糖、葡萄糖、β
‑
环糊精和甘露醇中的一种或几种。
[0016]进一步地，优选所述第二稳定剂包括组分：甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
‑
80，且以上组分在所述LA1筛选试剂中的质量百分比为：甘氨酸1
‑
3%、聚乙二醇2000 1
‑
5%、Span
‑
80 0.1
‑
1%。
[0017]进一步地，优选所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂均包括防腐剂，所述防腐剂为苯甲酸钠、叠氮化钠、Proclin
‑
300、庆大霉素以及亚硝酸盐中的至少一种。
[0018]进一步地，优选所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂均包括质量百分比为0.03
‑
0.05% 的Proclin
‑
300。
[0019]进一步地，优选所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂均包括蛋白酶保护剂，所述蛋白酶保护剂在所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂的质量百分比均为2~4%。
[0020]进一步地，优选所述蛋白酶保护剂为竹多糖。
[0021]进一步地，优选所述钙离子在所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂的含量均为10~20 mM。
[0022]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的一种狼疮抗凝物检测试剂盒，筛选试剂、确认试剂均为液态，使用方便、成本低廉、灵敏度高、抗干扰能力强、准确性好、稳定性好，为国产首创全液态狼疮抗凝物检测试剂盒，可以实现对进口狼疮抗凝物的检测试剂盒的替代，充分满足临床检验的需求；还能降低医院购买检测试剂的成本，同时减少病人的检测费用，降低
负担；重组蛇毒酶和重组磷脂为原料，两者搭配使用，可延长阳性患者（含弱阳）LA1筛选试剂的凝固时间，有利于提高阳性样本的检出率，降低假阴性，试剂灵敏度更高，测试阳性样本时，单位时间内的变化幅度要显著增强，在测试弱阳样本时，其试剂的检出能力更高，对于临床本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种狼疮抗凝物检测试剂盒，其特征在于，包括LA1筛选试剂、LA2确认试剂；所述LA1筛选试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第一肝素中和剂、第一缓冲液和第一辅料，所述LA1筛选试剂为液态；所述LA2确认试剂包括重组蛇毒酶、重组磷脂、钙离子、第二肝素中和剂、第二缓冲液和第二辅料，所述LA2确认试剂为液态；所述LA1筛选试剂中的重组磷脂的含量低于所述LA2确认试剂中的重组磷脂的含量。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述重组蛇毒酶在所述LA1筛选试剂、LA2确认试剂的含量均为1~3 IU/mL。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述LA1筛选试剂中的重组磷脂的含量为0.02~0.06%，所述LA2确认试剂中的重组磷脂的含量为0.4~0.8%。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一肝素中和剂包括聚丙烯酰胺，所述聚丙烯酰胺在所述LA1筛选试剂的含量为1~3 mg/mL。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二肝素中和剂包括聚丙烯酰胺，所述聚丙烯酰胺在所述LA2确认试剂的含量为1~3 mg/mL。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液、第二缓冲液分别为PBS缓冲液、Tris缓冲液、Hepes缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液、柠檬酸缓冲液中的至少一种，LA1筛选试剂、LA2确认试剂的pH均为7.2~7.4。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液、第二缓冲液均为浓度100~200 mM 的PBS缓冲液。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一辅料包括第一稳定剂，所述第一稳定剂包括甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
‑
80、BSA、HSA、明胶、吐温
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20、海藻糖、葡萄糖、β
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环糊精和甘露醇中的一种或几种。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，第一稳定剂包括组分：甘氨酸、聚乙二醇2000、Span
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【专利技术属性】
技术研发人员：曹佳强，胡彦勇，蔡晓霞，赵伟，
申请(专利权)人：深圳市帝迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：