基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于体外诊断与免疫检测技术领域，提出一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置低浓度检测区和高浓度检测区，其中低浓度检测区包被有相对于靶分析物低亲和力的竞争抗原一，高浓度检测区包被有相对于竞争抗原一高亲和力的竞争抗原二，竞争抗原一和/或竞争抗原二与靶分析物竞争结合标记抗体。不同亲和力的竞争抗原发挥不同作用，在确保功能灵敏度的同时，拓宽了检测范围，实现对浓度范围跨度较大的具有单一抗原表位的化合物的准确定量，简化了检测步骤，提高了检测效率。提高了检测效率。提高了检测效率。

Quantitative detection kit and method based on competitive immunoassay

【技术实现步骤摘要】
基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于体外诊断与免疫检测
，特别涉及一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]雌二醇（Estradiol，E2）是一种分子量为 272Da的类固醇激素，它是最具生物活性的雌激素。下丘脑
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垂体
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性腺轴负责调控 E2 的分泌，E2 在排卵的控制机制中起主导作用。E2 是非妊娠女性体内的一种重要且主要的生物活性雌激素，它主要由发育中的卵泡或黄体中产生，并且在促卵泡激素和黄体生成素的共同作用下，由卵泡细胞和颗粒细胞合成。睾丸和肾上腺皮质也可产生少量 E2，妊娠期妇女主要由胎盘产生 E2。循环中的 E2 主要与蛋白质相结合，只有 1
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3% 的 E2 处于游离状态。血清中的雌二醇在男性和女性的各种临床疾病中均起着重要的诊断标志物的作用。定量检测血清雌二醇水平，在临床上用于阐明下丘脑
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垂体
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性腺轴，男性乳房发育症、产生雌激素的卵巢和睾丸肿瘤以及肾上腺皮质增生的生育障碍。此外，雌激素的检测还用于在体外受精中监测生育治疗和确定排卵时间。
[0003]在不同人群中，雌二醇水平跨度相当大，青春期前儿童，青少年，绝经前后妇女和孕妇中的雌二醇浓度范围超过几个数量级（40
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2000 pg/mL）。此外，而对于进行体外受精的女性经卵巢刺激治疗后血清雌二醇水平可升高至10ng/mL左右。目前的免疫检测方法的在低雌二醇水平（＜40pg/mL）下缺乏适当的敏感度，而对于超出检测上限的高水平雌二醇的测定常需将标本稀释后再行测定，增加了检验人员的工作量和试剂成本以及出错误的风险。
[0004]目前临床上多采用免疫分析方法对雌二醇进行定量检测。雌二醇属于小分子半抗原类激素，只含单一抗原表位，需采用竞争性免疫分析模式进行检测。目前主流的用于检测只含单一抗原表位的分析物检测试剂主要分为两种竞争模式，分别是延时竞争法和非延时竞争法。采用延时竞争法可以提升检测的敏感度，但会导致检测时间增加，检测上限下降等，而非延时竞争法可以缩短检测时间，降低自动化难度，但会损失一定的敏感度。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有的对具有单一抗原表位的化合物定量检测的不足，提供一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法，利用该试剂盒检测时，具有优异的敏感度和较宽的检测范围，可满足临床上患者的鉴别诊断和治疗疗效监测两种需求。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的，一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置低浓度检测区和高浓度检测区，其中低浓度检测区包被有相对于靶分析物低亲和力的竞争抗原一，高浓度检测区包被有相对于竞争抗原一高亲和力的竞争抗原二，竞争抗原一和/或竞争抗原二与靶分析物竞争结合标记抗体。
[0007]在本专利技术第一个实施方案中，竞争抗原一为靶分析物结构类似物，竞争抗原二与
靶分析物结构一致。
[0008]在本专利技术的一个实施方案中，所述标记抗体为被荧光微球标记的抗体。
[0009]在本专利技术的一个实施方案中，所述载体为微流控芯片，竞争抗原一和竞争抗体二沿样本流动方向依次包被在微通道内形成低浓度检测区和高浓度检测区。
[0010]在本专利技术的一个实施方案中，当载体为微流控芯片时，标记抗体设置在微通道内位于低浓度检测区的前端或设置在加样孔形成标记区。
[0011]在本专利技术的一个实施方案中，当载体为微流控芯片时，高浓度检测区与废液收集池之间还设置有质控位区。
[0012]在本专利技术的一个实施方案中，所述载体上还设置释放剂，所述释放剂位于标记区之前或者位于标记区内。
[0013]在本专利技术的一个实施方案中，所述释放剂为酸性溶液并内包含置换剂。
[0014]在本专利技术的一个实施方案中，竞争抗原一和竞争抗原二与载体蛋白偶联后分别包被在低浓度检测区和高浓度检测区。
[0015]另一方面，本专利技术还提供了一种利用上述任一一个技术方案中的试剂盒进行定量检测的方法，通过设置临界点，比对校准函数，准确计算两类样本的结果,包括至少以下步骤：1）获取校准函数：通过含有靶分析物的系列浓度标准品溶液分别流经试剂盒获取标准品溶液的信号值，以抑制率为纵坐标、标准品溶液浓度为横坐标，获取校准函数，其中LT区的校准函数为T1，HT区的校准函数为T2；2）将可能包含靶分析物的样品与标记抗体混合后依次流经载体的LT区和HT区，反应结束后利用检测仪器分别获取LT区和HT区的信号值，进而得到LT点的抑制率、HT点的抑制率；3）将LT点的抑制率与临界点进行比较，若大于临界点，则属于低值样本，若小于临界点，则属于高值样本；4）通过比对校准函数确定靶分析物的浓度：若属于低值样本，选择样本在LT区的抑制率与T1比对，获取浓度值；若属于高值样本，选择样本在HT区的抑制率与T2比对，获取浓度值。
[0016]通过上述技术方案得到的一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法，其有益效果是：1、将低亲和力的竞争抗原一和高亲和力的竞争抗原二沿样本流经的方向依次设置，使不同亲和力的抗原发挥不同作用，在确保功能灵敏度的同时，拓宽了检测范围，实现对浓度范围跨度较大的具有单一抗原表位的化合物浓度的准确定量，减少不必要的稀释；2、应用所述的微流控芯片体积小，所消耗的试剂和样本量少，整个反应过程时间短，操作简单，前期芯片的制备简单，免疫微流控芯片技术成熟，容易实施。
附图说明
[0017]图1是根据本专利技术的一个技术方案提出的检测E2的试剂盒结构。
[0018]图2是应用图1中试剂盒的检测过程。
[0019]图3是应用图1中试剂盒的检测结果示意（其中坐标系中的横坐标代表载体的不同
区域，纵坐标B/B0代表抑制率）。
具体实施方式
[0020]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0021]除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0022]本文中所述的竞争性免疫分析特指延时竞争法。关于竞争性免疫分析，欲获得优质竞争性校准函数，其需确保抗体限量原则，检测抗体用量需要小于待测抗原和竞争抗原所需抗体的累计用量，但必须大于竞争抗原或待检抗原所需抗体累计用量。竞争抗原，是决定延时竞争免疫分析敏感度的关键因素。待测抗原和竞争抗原与抗体的亲和力差异，可决定待检抗原低区的灵敏度和准确度。若使用与抗体亲和力较弱的竞争抗原参与竞争反应，可以提升检测的敏感度，相反，若使用与抗体亲和力较高的竞争抗原参与竞争反应，可以拓宽检测方法的检测上限。若能将两种不同亲和力的竞争抗原联合使用，使各自发挥其优点，则可以实现对较高的敏感度和较宽的检测范围的兼顾。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，包括载体，其特征在于，所述载体上沿样本流动方向依次设置低浓度检测区和高浓度检测区，其中低浓度检测区包被有相对于靶分析物低亲和力的竞争抗原一，高浓度检测区包被有相对于竞争抗原一高亲和力的竞争抗原二，竞争抗原一和/或竞争抗原二与靶分析物竞争结合标记抗体。2.根据权利要求1所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，竞争抗原一为靶分析物结构类似物，竞争抗原二与靶分析物结构一致。3.根据权利要求1所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，所述标记抗体为被荧光微球标记的抗体。4.根据权利要求1所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，所述载体为微流控芯片，竞争抗原一和竞争抗体二沿样本流动方向依次包被在微通道内形成低浓度检测区和高浓度检测区。5.根据权利要求4所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，标记抗体设置在微通道内位于低浓度检测区的前端或设置在加样孔形成标记区。6.根据权利要求4所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，高浓度检测区与废液收集池之间还设置有质控位区。7.根据权利要求5所述的基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，其特征在于，所述载体上还设置释放剂，所述释放剂位于标记区之前或者位于标记区内。8.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓓，于洋，李雪，孙瑗敏，谭欣，李会强，杨赣英，叶涛，
申请(专利权)人：北京芯迈微生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：