抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体及其制备方法与应用技术

本申请涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体及其制备方法与应用，提供了纳米抗体Nb

Nano antibody against novel coronavirus and its variant strain and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体及其制备方法与应用


[0001]本申请属于生物医药
，尤其涉及一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (SARS
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CoV
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2，简称新冠病毒) 是目前正肆虐全球的冠状病毒疾病2019 (COVID
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19)的病原体。截至2022年5月18日世界卫生组织 (WHO) 统计数据显示在全球范围内，COVID
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19已导致超过5.2亿例确诊病例和620万例死亡。新冠病毒是β
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冠状病毒科的一种单链RNA病毒，其RNA基因组编码4种主要结构蛋白：刺突蛋白(Spike protein, S)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein, N)、跨膜蛋白(Membrane protein, M) 和包膜蛋白(envelope protein, E)。研究发现，S蛋白负责附着在宿主细胞表面受体血管紧张素转换酶
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2 (Angiotensin
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converting enzyme 2，ACE2) 上，在病毒的内化中发挥作用，也定义了宿主组织的趋向性和病毒的传播能力。S蛋白主要有N末端的S1亚单位和C末端的S2亚单位组成，S1主要负责病毒与宿主受体结合，S2主要起到膜融合的作用，其中S1亚单位的受体结合域 (RBD) 是直接结合ACE2的关键区域。
[0003]由于SARS
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CoV
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2病毒具有非常高的突变特性，目前针对新冠病毒突变株引发的疫情的防控与防治依然是世界公共卫生的头号问题。据世界卫生组织 (WHO) 报道，已确定了值得关注的变体有: Alpha、Beta、Gamma、Delta和Omicron，特别是Alpha、Delta以及Omicron突变体，是造成新冠肺炎大流行的主要病原体。目前主要的应对措施是接种疫苗以及现有药物再利用。然而，不断出现具有高传播力和逃避疫苗的变异株，使得疫苗在防治新冠病毒上面临了严峻的挑战。因此，具有靶向作用，能阻断S1与ACE2结合的中和抗体的开发为新冠肺炎的防治提供了一种新思路。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体及其制备方法与应用，旨在解决现有技术中缺乏一种能够同时与新型冠状病毒及其变异株有效结合的纳米抗体的问题。
[0005]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：第一方面，本申请提供一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体，纳米抗体包括纳米抗体Nb
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H6，其中，纳米抗体Nb
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H6的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示。
[0006]第二方面，本申请提供一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体的制备方法，包括如下步骤：提供目的蛋白抗原，将目的蛋白抗原包被在免疫管上并与噬菌体文库进行结合，得到目的蛋白抗原
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噬菌体文库；将目的蛋白抗原
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噬菌体文库进行洗脱处理得到洗脱液，将洗脱液与辅助噬菌体进行混合培养并进行富集筛选，并进行单克隆抗体筛选，得到特异性纳米抗体序列；
将特异性纳米抗体序列克隆至表达载体中得到重组质粒，将重组质粒转入宿主细胞中诱导表达并进行纯化，得到靶向新冠病毒的纳米抗体。
[0007]第三方面，本申请提供一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体在制备预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用。
[0008]第四方面，本申请提供一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体在制备检测新型冠状病毒的检测试剂或检测试剂盒中的应用。
[0009]本申请第一方面提供的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体，纳米抗体包括纳米抗体Nb
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H6，其中，纳米抗体Nb
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H6的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示；该纳米抗体Nb
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H6能够特异性针对新型冠状病毒及其变异株的S1，纳米抗体Nb
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H6为一种全新靶向S1蛋白的中和抗体，能够有效抑制S1蛋白与ACE2结合，并且能有效中和SARS
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CoV
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2假病毒与ACE2的结合，从而阻止病毒进入并感染细胞；同时Nb
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H6与Delta, Alpha以及Omicron突变体均具有很好的亲和力；并且，该单域抗体适用的表达体系选择灵活，既可以在原核系统中表达也可以在酵母细胞或哺乳动物细胞的真核系统中表达，且其在原核表达系统中的表达成本低，可降低后期生产成本，且由于该单域抗体为单结构域抗体，所以其抗体的多组合形式改造更为简单，通过基因工程的方式简单的串联即可以获得多价、多特异性的抗体，并且其免疫异质性很低，在不经过人源化改造的情况下也不会产生较强的免疫反应，该单域抗体的亲和力范围更为宽泛，为后期不同用途的抗体提供多个选择，该单域抗体可以偶联药物分子起到双重或多重靶点治疗作用，应用范围更广。
[0010]本申请第二方面提供的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体的制备方法，该制备方法使用天然的纳米抗体
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噬菌体文库筛选得到与新型冠状病毒蛋白S1具有亲和作用的纳米抗体，得到的纳米抗体Nb
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H6能够有效抑制S1蛋白与ACE2结合，并且能有效中和SARS
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CoV
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2假病毒与ACE2的结合，从而阻止病毒进入并感染细胞；同时Nb
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H6与Delta, Alpha以及Omicron突变体均具有很好的亲和力；有利于后续纳米抗体的广泛应用。
[0011]本申请第三方面提供的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体在制备预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用，由于纳米抗体Nb
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H6能够有效抑制S1蛋白与ACE2结合，并且能有效中和SARS
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CoV
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2假病毒与ACE2的结合，从而阻止病毒进入并感染细胞；同时Nb
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H6与Delta, Alpha以及Omicron突变体均具有很好的亲和力；因此，有利于在制备预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用。
[0012]本申请第四方面提供的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体在制备检测新型冠状病毒的检测试剂或检测试剂盒中的应用；由于纳米抗体Nb
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H6能够有效抑制S1蛋白与ACE2结合，并且能有效中和SARS
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CoV
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2假病毒与ACE2的结合，从而阻止病毒进入并感染细胞；同时Nb
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H6与Delta, Alpha以及Omicron突变体均具有很好的亲和力；因此，有利于在制备检测新型冠状病毒的检测试剂或检测试剂盒中的应用。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括纳米抗体Nb
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H6，其中，所述纳米抗体Nb
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H6的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括4个框架区FR1、FR2、FR3、FR4和3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3；其中，所述纳米抗体Nb
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H6中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。3.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体Nb
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H6的碱基序列如Seq.ID NO.9所示。4.一种权利要求1~3所述的抗新型冠状病毒及其变异株的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：提供目的蛋白抗原，将所述目的蛋白抗原包被在免疫管上并与噬...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶亮，吴丹丹，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：