一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法，即在第一试剂中改变非小而密脂蛋白的溶解特性，使其易于被清除并在第二试剂中特异性的定量小而密脂蛋白胆固醇(sdLDL

A small and dense reagent for the determination of low density lipoprotein cholesterol and its test method

【技术实现步骤摘要】
一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法。

技术介绍

[0002]低密度脂蛋白(LDL)具有异质性，由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。一般将LDL亚组份中颗粒较小密度较大的LDL称小而密LDL(smalldense Low
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Density Lipoprotein，sdLDL)；将颗粒较大、密度较小的LDL称大而轻LDL；介于二者之间的亚组份为中密度LDL。
[0003]近来研究发现sdLDL与普通LDL相比，sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强，是公认的引发心血管病的重要危险因素之一，已被美国胆固醇教育计划(National Cholesterol Education Program，NCEP)委员会成人治疗组列入新发现的重要心血管病危险因素之一。
[0004]目前在临床检测应用中，测定sdLDL的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等。但这些方法检测时间很长，不能进行大规模自动化检测，且需要昂贵的仪器设备，故不能应用于一般的临床医学检测。近几年来出现了采用表面活性剂和磷脂酶清除试样中非小而密脂蛋白胆固醇，但该类方法采用磷脂酶，价格昂贵，国内尚无生产该酶的企业。
[0005]申请号为201810803320.9的中国专利公开了一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒，其组合物包括聚乙二醇、表面活性剂A和脂蛋白酯酶，其采用与脂蛋白结合的聚阴离子化合物、脂蛋白酯酶和表面活性剂的组合，能够在第一试剂中排除乳糜颗粒的干扰，从而实现测定sdLDL的目的，所用试剂配制简单方便，能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性检测sdLDL。
[0006]但现有技术中并未对如何分散血液中的脂蛋白进行分析，其测试准确性有待进一步提高。

技术实现思路

[0007]针对目前对小而密脂蛋白的检测方法的不足，本专利技术提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法，即在第一试剂中采用表面活性剂A、离液离子化合物和聚乙二醇(PEG)，清除非小而密脂蛋白胆固醇，本专利技术所述的试剂无需使用磷脂酶，配制简单，能够高效、准确地定量试样中sdLDL。本专利技术所述的测定方法，能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL)，该测定方法可靠性高、成本低，能够大规模特异性地检测试样中sdLDL。
[0008]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：
[0009]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，包括在第一试剂中添加离液离子化合物、表面活性剂A和胆固醇酯酶，所述离液离子化合物通过电荷作用对脂蛋白进行分散，以使表面活性剂A和胆固醇酯酶选择性地作用于特定脂蛋白，从而达到测量特定脂蛋白中胆固醇的量。
[0010]本专利技术所述离液离子化合物选自溴化钠、硫氰酸钠、碘化钾中的一种或两种，所述
离液离子化合物的含量为10mmol/L～300mmol/L，较佳地为10mmol/L～200mmol/L。
[0011]本专利技术所述第一试剂中Trinder
’
s色原化合物的含量为0.2～10mmol/L，较佳地为0.50～5.0mmol/L，更佳地为2.0～3.0mmol/L。
[0012]本专利技术所述第一试剂中聚乙二醇的含量为0.1～1.0％，较佳地为0.1～0.6％，更佳地为0.1～0.5％。
[0013]本专利技术所述第一试剂中二价金属离子较佳地为镁离子或锰离子，更佳地为镁离子，最佳地为硫酸镁。所述二价金属离子的含量为1～90mmol/L，较佳地为2～30mmol/L，更佳地为5～10mmol/L。
[0014]本专利技术所述的第一试剂中，所述表面活性剂A的含量为0.05～3.0％，较佳地为0.05～2.0％，更佳地为0.10～1.0％。较佳地，所述表面活性剂A为与高密度脂蛋白相互作用的表面活性剂；较佳地，所述表面活性剂A为Sunnix FA
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103，PTS，Nok，生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS
‑
750
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M、TPGS
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1000中的一种或多种。较佳地为Nok、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS
‑
750
‑
M中的一种或两种，更较佳地为生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS
‑
750
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M。
[0015]本专利技术所述的第一试剂中，所述胆固醇酯酶的含量为1～10KU/L，较佳地为2～5KU/L。
[0016]本专利技术所述的第一试剂中，所述胆固醇氧化酶的含量为1～10KU/L，较佳地为2～5KU/L。
[0017]本专利技术所述的第一试剂中，所述过氧化氢酶的含量为100～300KU/L，较佳地为200～300KU/L。
[0018]本专利技术中，较佳地，所述第一试剂还包括缓冲液。所述缓冲液较佳地为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液，更佳地为MOPSO缓冲液。所述缓冲液的含量较佳地为25～120mmol/L，更佳地为30～50mmol/L。
[0019]本专利技术中，较佳地，所述第一试剂还包括稳定剂。所述稳定剂较佳地选自抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种，更佳地为牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种，最佳地为牛血清白蛋白、氯化钠和EDTA。所述稳定剂的含量较佳地抗坏血酸氧化酶的含量为1～10KU/L；所述牛血清白蛋白的含量较佳地为0.1～1g/L，更佳地为0.1～0.3g/L；所述氯化钠的含量较佳地为5～150mmol/L，更佳地为5～100mmol/L；较佳地，所述EDTA的含量为0.5～3mmol/L。
[0020]本专利技术中，较佳地，所述第一试剂还包括防腐剂。所述防腐剂较佳地为Proclin
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300。所述防腐剂的含量较佳地为0.01～0.5％。
[0021]本专利技术还提供了所述第一试剂的制备方法，其包括以下步骤：将所述离液离子化合物、聚乙二醇、二价金属离子、Trinder
’
s色原化合物和表面活性剂A依次加入水中，搅拌至完全溶解，调节pH至6.50～7.00，然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶，即得第一试剂。
[0022]本专利技术中，较佳地，所述缓冲液、所述稳定剂和所述防腐剂在调节pH之前添加。
[0023]本专利技术所述第一试剂的形态为澄清液体。
[0024]其中，本专利技术所述第二试剂中，所述过氧化物酶的含量为0.2～10KU/L，较佳地为2.5～10KU/L，更佳地为2.5～6KU/L。
[0025]本专利技术所述第二试剂中，所述4
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氨基安替比林的含量为1.0～10mmol/L，较佳地为
2～5mmol/L，更佳地为2～3mmol/L。
[0026]本专利技术所述第二试剂中，所述表面活性剂B的含量为0.05～3.0％，较佳地为0.08～0.5％，更佳地为0.1～0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征在于，包括在第一试剂中添加离液离子化合物、表面活性剂A和胆固醇酯酶，所述离液离子化合物通过电荷作用对脂蛋白进行分散，以使表面活性剂A和胆固醇酯酶选择性地作用于特定脂蛋白，从而达到测量特定脂蛋白中胆固醇的量。2.根据权利要求1所述的一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征在于，所述离液离子化合物选自溴化钠、硫氰酸钠、碘化钾中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征在于，所述离液离子化合物的浓度为10mmol/L～300mmol/L。4.根据权利要求1所述的一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法，其特征在于，所述第一试剂包括添加胆固醇测量的酶包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶。5.根据权利要求1所述的一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王伊琳，王贤理，池万余，王友群，贾刚，邓慰，卢强，
申请(专利权)人：浙江伊利康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：