一种高存活率的细胞冻存方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，一种高存活率的细胞冻存方法。所述高存活率的细胞冻存方法，包括以下步骤：S1：取细胞悬浮液离心、弃上清得到细胞，将细胞与冻存液混合均匀得到细胞原液；S2：将细胞原液迅速转入冻存管中，将冻存管放入程序降温仪中进行程序降温；S3：程序降温完成后，转入液氮罐中保存；所述程序降温的步骤包括：(1)8℃等待10

【技术实现步骤摘要】
一种高存活率的细胞冻存方法


[0001]本专利技术涉及生物
，一种高存活率的细胞冻存方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞具有可以大量扩增的特点，被广泛使用到临床中和科学研究中，扩增后的干细胞有时需要被冻存起来，其目的是在低温环境下减缓细胞的代谢活动并维持生命，以备用于科研及临床随时复苏使用。传统的间充质干细胞是直接使用其与保护剂在液氮中冻存，，继而又发展了玻璃化冻存法：将细胞悬液和玻璃化溶液分别预冷后，在冻存管，向细胞悬液滴加玻璃化溶液，将冻存管两端以火焰封口，将冻存管投入液氮中保存。，但是这两种方法使用制备得到的细胞的存活率和增值能力较差。又发展了先将细胞与冻存液混合后先将其进行程序降温再转入液氮中保存，这种方法与玻璃化冻存法相比虽然效果较好，但是因为程序降温和冻存液的选择不佳，也达不到很好的效果。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术的第一个方面提供了一种高存活率的细胞冻存方法，包括以下步骤：
[0004]S1：取细胞悬浮液离心、弃上清得到细胞，将细胞与冻存液混合均匀得到细胞原液；
[0005]S2：将细胞原液迅速转入冻存管中，将冻存管放入程序降温仪中进行程序降温；
[0006]S3：程序降温完成后，转入液氮罐中保存；
[0007]所述程序降温的步骤包括：
[0008](1)8℃等待10
‑r/>30min；
[0009](2)降温阶段
‑
1；
[0010](3)升温阶段；
[0011](4)降温阶段
‑
2。
[0012]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述降温阶段
‑
1包括低速率降温
‑
1和高速率降温
‑
1。
[0013]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述低速率降温
‑
1中的降温速率为0.9
‑
1.5℃/min；所述高速率降温
‑
1中的降温速率为20
‑
24℃/min。
[0014]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述高速率降温
‑
1降温至
‑
59
‑‑
55℃。
[0015]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述升温阶段升温至
‑
29.5
‑‑
28℃。
[0016]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述降温阶段
‑
2包括低速率降温
‑
2和高速率降温
‑
2。
[0017]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述高速率降温
‑
2降温至
‑
90℃，等待5
‑
10min。
[0018]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述冻存液包括以下组分，按体积分数计，人血
白蛋白溶液10
‑
20份、DMSO5
‑
10份、右旋糖酐40葡萄糖注射液25
‑
40份、离子缓冲溶剂30
‑
50份。
[0019]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述离子缓冲溶剂为勃脉力A注射液和/或林格氏液。
[0020]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述细胞：冻存液＝1
×
107‑
1.3
×
107：1ml。
[0021]有益效果：
[0022]1.本专利技术经过的程序降温经过低温等待、降温阶段
‑
1、升温阶段、降温阶段
‑
2可以有效的减少此阶段细胞内冰晶释放潜热对细胞的损伤，增加了细胞的存活率；
[0023]2.本专利技术通过选择能够使用该程序降温并保护细胞的冻存液，使得细胞具有良好的增值力；
[0024]3.冻存液中的离子缓冲溶剂可提高细胞外的渗透压，减少细胞内的自由水，减少冻存过程中的冰晶形成造成的细胞损伤；
[0025]4.在本专利技术中，人血白蛋白溶液与右旋糖酐40葡萄糖注射液能够为细胞提供良好的营养，使得细胞保持良好的增值能力。
具体实施方式
[0026]参选以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本专利技术的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
[0027]如本文所用术语“由
…
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0028]连接词“由
…
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
…
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
[0029]当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
[0030]单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
[0031]说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本专利技术并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本专利技术不限于该精确数值。在某些例子中，近似
用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
[0032]此外，本专利技术要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高存活率的细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取细胞悬浮液离心、弃上清得到细胞，将细胞与冻存液混合均匀得到细胞原液；S2：将细胞原液迅速转入冻存管中，将冻存管放入程序降温仪中进行程序降温；S3：程序降温完成后，转入液氮罐中保存；所述程序降温的步骤包括：(1)8℃等待10
‑
30min；(2)降温阶段
‑
1；(3)升温阶段；(4)降温阶段
‑
2。2.根据权利要求1所述的一种高存活率的细胞冻存方法，其特征在于，所述降温阶段
‑
1包括低速率降温
‑
1和高速率降温
‑
1。3.根据权利要求2所述的一种高存活率的细胞冻存方法，所述低速率降温
‑
1中的降温速率为0.9
‑
1.5℃/min；所述高速率降温
‑
1中的降温速率为20
‑
24℃/min。4.根据权利要求2或3所述的一种高存活率的细胞冻存方法，其特征在于，所述高速率降温
‑
1降温至
‑
59
‑‑
55℃。5.根据权利要求1所述的一种高存活率的细胞冻存...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱灏，葛晨曦，张钰，吴丹枫，
申请(专利权)人：达瑟儿上海生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：