一种核酸质谱盐离子干扰评价方法技术

本发明专利技术公开一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，该方法包括：根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰；根据所述盐离子加合峰的峰型特征和分布特征对所述盐离子进行干扰评价，所述干扰评价包括盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预期纯化剂更换时间中的一种或多种。本发明专利技术通过分析盐离子产生的加合物形成的加合峰的峰型特征和分布特征来识别PCR反应产物中盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预测纯化剂更换时间及对于已经产生影响的目标峰进行补偿。时间及对于已经产生影响的目标峰进行补偿。时间及对于已经产生影响的目标峰进行补偿。

An evaluation method of salt ion interference in nucleic acid mass spectrometry

【技术实现步骤摘要】
一种核酸质谱盐离子干扰评价方法


[0001]本专利技术涉及生物质谱检测的
，尤其涉及一种核酸质谱盐离子干扰评价方法。

技术介绍

[0002]基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI TOF MS)是八十年代末发展起来的一种新的质谱分析技术，是激光电离技术和高速数据采集处理系统相结合的产物。经过多年的发展，MALDI TOF MS由于其简单快速、高通量和高灵敏度的优势，已被广泛应用于核酸、糖、蛋白质等生物大分子及合成高聚物分子的分子量测定和结构分析。
[0003]MALDI TOF MS技术是将聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)扩增延伸后的样品分散在基质分子中并形成晶体。当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质
‑
样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。
[0004]核酸样品经PCR扩增反应或/和延伸反应后，反应产物中带有大量的盐离子，如Na
+
、K
+
、Mg
2+
、Mn
2+
等金属阳离子，以下简称盐离子，因核酸扩增和/和延伸产物带有磷酸根，极性和负电性大，容易吸附盐离子，形成一种加合物，加合物产生的加合峰为干扰峰，核酸反应产物的目标峰附近出现盐离子而产生加合峰时，当加合峰与目标峰不重合时对于目标峰影响较少，当加合峰与目标峰重合时，可能造成目标峰变宽信噪比下降、分辨率下降、峰高升高、峰面积加大，峰偏移等不利于质谱分析结果判读。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，以至少解决现有技术中存在的以上技术问题。
[0006]本专利技术一方面提供一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，该方法包括：
[0007]根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰；
[0008]根据所述盐离子加合峰的峰型特征和分布特征对所述盐离子进行干扰评价，所述干扰评价包括盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预期纯化剂更换时间中的一种或多种。
[0009]在一可实施方式中，所述盐离子加合峰位于核酸质谱图中目标峰的位置处或目标峰的右侧，所述目标峰为PCR反应中目标对象形成的质谱峰，所述目标对象为核酸样本的延伸引物或/和延伸产物。
[0010]在一可实施方式中，所述目标对象包含但不限于核酸样本的延伸引物、核酸样本的腺嘌呤A型延伸产物、核酸样本的鸟嘌呤G型延伸产物、核酸样本的胞嘧啶C型延伸产物、
核酸样本的胸腺嘧啶T型延伸产物、核酸样本尿嘧啶的U型延伸产物中的一种或多种。
[0011]在一可实施方式中，在PCR反应中，所述目标对象与所述盐离子反应生成加合物，所述加合物的分子量为所述目标对象的分子量与所述盐离子的分子量之和。
[0012]在一可实施方式中，所述盐离子加合峰的峰型特征包括分子量、峰高、峰面积、信噪比、分辨率中的一种或多种。
[0013]在一可实施方式中，所述盐离子加合峰包括独立加合峰和重叠加合峰；
[0014]若所述盐离子加合峰的分子量与所述目标峰的分子量的差值与盐离子的分子量相同，则所述盐离子加合峰为独立加合峰；
[0015]若核酸质谱图中存在独立加合峰且所述目标峰之间的分子量的差值与盐离子的分子量相同，则分子量较大的所述目标峰中存在重叠加合峰。
[0016]在一可实施方式中，对所述盐离子进行盐离子纯化程度评价，包括：
[0017]将独立加合峰的峰高或/和峰面积与其对应的目标峰的峰高或/和峰面积的比值确定为加合比，所述加合比为0
‑
1之间的小数；
[0018]根据所述加合比对所述盐离子纯化程度进行评价。
[0019]在一可实施方式中，所述对所述盐离子影响量或/和补偿量进行评价，包括：
[0020]若所述目标峰的右侧出现独立加合峰，则独立加合峰与其对应的目标峰的加合比为盐离子影响量；所述独立加合峰的峰高或峰面积为盐离子补偿量；
[0021]若所述目标峰的位置出现重叠加合峰，则根据所述加合比与所述目标峰位置的总峰面积确定盐离子的影响量；所述目标峰位置的总峰面积与所述目标峰的面积之差为盐离子补偿量。
[0022]在一可实施方式中，对所述预期纯化剂更换时间进行评价，包括：
[0023]若所述目标峰的右侧出现盐离子加合峰，当所述盐离子加合峰的峰面积逐渐增大、峰高逐渐变高且所述盐离子加合峰与其对应的所述目标峰的加合比大于等于纯化阈值线时，则预测可更换纯化剂。
[0024]在一可实施方式中，该方法还包括对PCR反应产物中盐离子的纯化进行评价，所述盐离子的纯化评价包括加合比、峰高、峰面积、信噪比、分辨率中的一种或多种。
[0025]在本专利技术的上述方案中，通过分析盐离子产生的加合物形成的加合峰的峰型特征和分布特征来识别PCR反应产物中盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预测纯化剂更换时间及对于已经产生影响的目标峰进行补偿；通过分析盐离子对质谱图的干扰，从而进一步提高实验人员对质谱图的判读，提高质谱图分析的准确度。
附图说明
[0026]图1示出了一种核酸质谱盐离子干扰评价方法的流程示意图；
[0027]图2示出了不加除盐纯化剂的质谱峰图；
[0028]图3示出了加除盐纯化剂的质谱峰图。
具体实施方式
[0029]为使本专利技术的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅
仅是本专利技术一部分实施例，而非全部实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0030]如图1示出了本专利技术提供的一种核酸质谱盐离子干扰评价方法的流程示意图，该方法包括：
[0031]步骤S101、根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰。
[0032]PCR反应为聚合酶链式反应，本实施例选取成熟稳定的飞行时间质谱检测系统核酸样本预处理试剂，进行PCR扩增反应或/和延伸反应获取PCR反应产物，核酸样本预处理试剂为PCR反应的反应物，具体如下表1所示，
[0033]表1为PCR反应的预处理试剂及预处理试剂的主要组分
[0034][0035]将上述试剂加入到384孔板中进行PCR反应，共计6孔位，分为两组，每组3孔位，其中一组样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸质谱盐离子干扰评价方法，其特征在于，该方法包括：根据核酸质谱图识别PCR反应产物中盐离子加合峰，所述盐离子加合峰为PCR反应中盐离子产生的加合物形成的质谱峰；根据所述盐离子加合峰的峰型特征和分布特征对所述盐离子进行干扰评价，所述干扰评价包括盐离子纯化程度、盐离子影响量或/和补偿量、预期纯化剂更换时间中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐离子加合峰位于核酸质谱图中目标峰的位置处或目标峰的右侧，所述目标峰为PCR反应中目标对象形成的质谱峰，所述目标对象为核酸样本的延伸引物或/和延伸产物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述目标对象包含但不限于核酸样本的延伸引物、核酸样本的腺嘌呤A型延伸产物、核酸样本的鸟嘌呤G型延伸产物、核酸样本的胞嘧啶C型延伸产物、核酸样本的胸腺嘧啶T型延伸产物、核酸样本尿嘧啶的U型延伸产物中的一种或多种。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，在PCR反应中，所述目标对象与所述盐离子反应生成加合物，所述加合物的分子量为所述目标对象的分子量与所述盐离子的分子量之和。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐离子加合峰的峰型特征包括分子量、峰高、峰面积、信噪比、分辨率中的一种或多种。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述盐离子加合峰包括独立加合峰和重叠加合峰；若所述盐离子加合峰的分子量与所述目标峰的分子量的差值与盐离子的分子量相同，则所述盐离子...

【专利技术属性】
技术研发人员：何芬，相双红，叶圣军，李璇，
申请(专利权)人：浙江迪谱诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：