通过干扰细胞受体阻断ASFV感染的方法技术

在动物中预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症的方法，该方法通过在动物中抑制病毒进入蛋白与细胞受体的相互作用并且预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症。在个体中用溶原性和裂解性病毒治疗病毒感染的方法，该方法通过施用靶向病毒溶原期外膜上的蛋白的病毒抗原，施用靶向病毒裂解期衣壳上的蛋白的病毒抗原，并且治疗病毒感染。用于在个体中用溶原性和裂解性病毒治疗病毒感染的组合物。在个体中用溶原性和裂解性病毒发现用于治疗病毒感染的抗体的方法。法。法。

Methods of blocking ASFV infection by interfering with cell receptors

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过干扰细胞受体阻断ASFV感染的方法
专利技术背景
1.

[0001]本专利技术涉及在动物(非人类)中预防病毒和细菌感染、癌症预防和/或治疗的方法。更具体地，本专利技术涉及在猪和其他动物中治疗和预防感染及癌症的方法。
2.
技术介绍

[0002]非洲猪瘟病毒(ASFV)是大型双链DNA病毒，主要感染家猪、野猪、疣猪和非洲野猪(bush pig)。它也存在于软蜱中，因此软蜱充当了感染性载体。ASFV主要感染单核细胞和巨噬细胞，尽管在急性感染时可以感染许多其他细胞类型；因此重新定义GMO动物中的病毒/细胞受体将有助于预防急性感染和满足额外治疗的需要。ASFV会导致这些动物高烧、出血性病变、发绀、厌食和死亡。对于这种病毒没有疫苗或治疗，目前防止其传播的唯一方法是扑杀动物。申请人的美国临时专利申请号62/871,949披露了用于消除或中和病毒携带者(例如携带ASFV的软蜱)的基因驱动。在该基因驱动中，等位基因被改变，从而其一直在所有子代(不仅是50％)中作为显性等位基因出现。然而，仍然需要治疗病毒其本身的方法。
[0003]迄今为止，尚未确定ASFV的细胞受体，但有证据表明该病毒通过动力蛋白依赖的和网格蛋白介导的微胞饮过程进入单核细胞或巨噬细胞中(Jia等人，非洲猪瘟病毒结构蛋白在病毒感染中的作用，J Vet Res[兽医研究杂志]61,135
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143,2017)。尝试建立针对ASFV病毒抗原的强烈抗体应答的结果不佳。
[0004]基因编辑允许通过使用核酸酶在生物体的基因组中插入、删除或替换DNA或RNA。目前使用的核酸酶有几种类型，包括大范围核酸酶、锌指核酸酶、基于转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)和成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)
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Cas核酸酶。这些核酸酶可以产生DNA的位点特异性双(或单)链断裂，从而编辑该DNA。靶向受体基因组需要精确切割病毒基因组，并且没有可能对受试者有害的脱靶效应。
[0005]基因编辑先前已经被用于靶向病毒。Quake的美国专利申请公开号20160060655披露了使用指导核酸酶系统选择性治疗病毒感染的方法。本专利技术的方法可用于从宿主生物体中去除病毒或其他外来遗传物质，而不干扰宿主的遗传物质的完整性。核酸酶可用于靶向病毒核酸，例如CRISPR Cas9、锌指或TALEN，从而干扰病毒复制或转录，或甚至从宿主基因组中切除病毒遗传物质。
[0006]Zhang等人的美国专利申请公开号2014/0357530披露了在功能基因组学中使用的组合物、方法应用和筛选，其专注于细胞中的基因功能并使用载体系统和与成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)
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Cas系统及其组件相关的其他方面。Zhang等人披露了DNA短部分的修饰，产生最多200个碱基对，优选最多100个碱基对，或更优选最多50个碱基对的5'突出端。
[0007]Doudna等人的美国专利号10,266,850披露了靶向DNA的RNA，其包含靶向序列并且与修饰多肽一起提供靶DNA和/或与靶DNA相关的多肽的位点特异性修饰。还披露了在靶细
胞中调节靶核酸的转录的方法，该方法通常涉及使靶核酸与酶失活的Cas9多肽和靶向DNA的RNA接触。
[0008]基因编辑也已经被用于创建点突变。Rees等人(Nat Rev Genet.[遗传学自然评论]2018年12月；19(12):770
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788)教导了碱基编辑，较新的基因组编辑方法，其使用来自CRISPR系统的组件与其他酶一起将点突变直接安装到细胞DNA或RNA中，而不会使双链DNA断裂。DNA碱基编辑器包含与核碱基脱氨酶融合的催化失效的核酸酶，并且在某些情况下包含DNA糖基化酶抑制剂。RNA碱基编辑器使用靶向RNA的组件实现类似的变化。碱基编辑器直接将一个碱基或碱基对转换为另一个碱基或碱基对，从而能够在非分裂细胞中有效地安装点突变，而不会生成过多的不希望的编辑副产物。
[0009]Cas/脱氨酶融合蛋白也已经用于进行点突变。Zheng等人(Communications Biology[通讯生物学]第1卷,文章编号：32(2018))使用切口酶Cas9
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胞苷脱氨酶融合蛋白指导原核细胞内的胞嘧啶至胸腺嘧啶的转化，导致了大肠杆菌和布鲁氏菌中的高突变频率。Liu等人的美国专利申请公开号20160304846还披露了用于编辑细胞或受试者的基因组内的单个位点的Cas9和核酸编辑酶或酶结构域(例如脱氨酶结构域)的融合蛋白。
[0010]仍然需要通过改变动物中的受体来治疗和预防细菌和病毒感染(例如ASFV)以及癌症。

技术实现思路

[0011]本专利技术提供了在动物中预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症(优选地猪ASFV)的方法，该方法通过在动物中抑制病毒进入蛋白与细胞受体的相互作用(viral entry protein
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to
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cellular receptor interaction)并且预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症。这可以通过1)小分子非竞争性抑制或竞争性抑制或2)通过基因编辑方法改变细胞受体来完成，从而使病毒进入蛋白不再识别天然/野生型受体。
[0012]本专利技术提供了在个体中用溶原性和裂解性病毒治疗病毒感染的方法，该方法通过施用刺激产生靶向病毒溶原期外膜上的蛋白的抗体的B细胞应答的病毒抗原，施用靶向病毒裂解期衣壳上的蛋白的病毒抗原，并且治疗病毒感染。
[0013]本专利技术还提供了用于在个体中用溶原性和裂解性病毒治疗病毒感染的组合物，该组合物包含：刺激产生靶向病毒溶原期外膜上的蛋白的抗体的B细胞应答的病毒抗原，以及靶向病毒裂解期衣壳上的蛋白的病毒抗原。
[0014]本专利技术提供了在个体中用溶原性和裂解性病毒发现用于治疗病毒感染的抗体的方法，该方法通过将病毒溶原期外膜上的靶蛋白和病毒裂解期衣壳上的靶蛋白的全蛋白或肽用作抗原以使用抗体发现平台发现抗体，测试发现的抗体的亲和力(affinity)、亲合力(avidity)、特异性、选择性、稳定性、精密度和稳健性，并且选择最佳候选抗体作为病毒感染的治疗性治疗。
附图说明
[0015]在与以下附图结合考虑时，参照以下详细描述，会容易认识到并更好地理解本专利技术的其他优点：
[0016]图1描绘了溶原性和裂解性ASFV病毒粒子；
[0017]图2描绘了α
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衣壳抗体，这些抗体不能靶向具有外膜的溶原性病毒粒子，但容易靶向衍生自裂解性复制的不含外膜具有暴露的衣壳的病毒粒子；
[0018]图3A描绘了溶原性ASFV中的靶蛋白，并且图3B描绘了裂解性ASFV中的靶蛋白；以及
[0019]图4描绘了治疗策略。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了通过抑制病毒进入蛋白质与细胞受体的相互作用来在动物(优选猪的ASFV)中预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症的方法。技术上，这可以通过1)小分子非竞争性抑制或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在动物中预防和治疗细菌或病毒感染、或癌症的方法，该方法包括以下步骤：抑制动物中的病毒进入蛋白与细胞受体的相互作用，以及预防和治疗动物中的细菌或病毒感染、或癌症。2.如权利要求1所述的方法，其中该抑制步骤被进一步定义为选自由以下组成的组的步骤：进行小分子非竞争性抑制或进行竞争性抑制，并且通过基因编辑方法进行细胞受体改变。3.如权利要求1所述的方法，其中该病毒感染是非洲猪瘟病毒(ASFV)。4.如权利要求1所述的方法，其中该细菌感染选自由以下组成的组：炭疽杆菌、酿脓链球菌、鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性巴氏杆菌、类鼻疽假单孢菌、Achromobacter anitratium、猪肺炎支原体、A和D型多杀性巴氏杆菌、猪嗜血杆菌、肉毒杆菌、大肠弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鸭沙门氏菌、大肠杆菌、坏死圆杆菌、猪布鲁氏杆菌、流产布鲁氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、单核细胞增多性李斯特菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、肺炎克雷伯菌、化脓棒杆菌、林氏放线杆菌、波蒙纳钩端螺旋体、猪型钩螺旋体、流感伤寒钩端螺旋体、秋令热钩端螺旋体、兽疫链球菌、似马链球菌、破伤风梭菌、牛放线菌、败毒梭菌、林氏放线杆菌、奇异变形杆菌、化脓性棒状杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪鼻支原体和猪丹毒杆菌。5.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括，在所述抑制步骤之前，进行受体筛选并鉴定与病毒附着及进入蛋白相互作用的细胞受体的步骤。6.如权利要求1所述的方法，其中所述进行竞争性抑制并且通过基因编辑方法进行细胞受体改变进一步包括通过使进入蛋白功能障碍或将其破坏来阻止病毒结合的步骤。7.如权利要求6所述的方法，其中这些基因编辑方法使用选自由以下组成的组的核酸酶：锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶、人WRN、C2c2、C2c1、C2c3、CRISPR Cas9、CRISPR/Cpf1、CRISPR/TevCas9、CasX、CasY和古细菌Cas9。8.一种在个体中用溶原性和裂解性病毒治疗病毒感染的方法，该方法包括以下步骤：施用靶向该病毒溶原期外膜上的蛋白的病毒抗原；施用靶向该病毒裂解期衣壳上的蛋白的病毒抗原；以及治疗该病毒感染。9.如权利要求8所述的方法，其中该病毒感染是ASFV。10.如权利要求9所述的方法，其中该个体是猪。11.如权利要求9所述的方法，其中所述施用靶向该病毒溶原期外膜上的蛋白的病毒抗原的步骤被进...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈大路，托马斯，
申请(专利权)人：托马斯，
类型：发明
国别省市：