一种化学酶法合成α-肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种化学酶法合成α

A chemical enzymatic synthesis \u03b1- Methods of proteoglycan related glycopeptides in muscular dystrophy

【技术实现步骤摘要】
一种化学酶法合成
α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法


[0001]本专利技术属于医药
更具体地，本专利技术利用化学酶法高效地合成了α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]肌营养不良蛋白聚糖(dystroglycan,DG)是一种跨膜糖蛋白，DG蛋白是抗肌萎缩蛋白糖蛋白复合体(dystrophin
‑
glycoprotein complex,DGC)的一个重要的部分，DG由两个单个基因编码的α
‑
和β
‑
亚基组成，分别命为α
‑
肌营养不良蛋白聚糖(α
‑
DG)和β
‑
肌营养不良蛋白聚糖(β
‑
DG)。DG基因在骨骼肌等多的细胞的表达中起着至关重要的作用。DG基因突变本身未发现与疾病有关，但是翻译后修加工(主要是糖基化)水平的改变会导致肿瘤等重大疾病。
[0004]报道称，β
‑
肌营养不良蛋白聚糖(β
‑
DG)能参与骨骼肌中多种信号转导，但作用机制尚不明确。α
‑
肌营养不良蛋白聚糖(α
‑
DG)主要存在于骨骼肌、神经和大脑的细胞膜中，它在连接细胞骨架和细胞外基质的过程中起着至关重要的作用，在维护肌肉完整性等各种生命活动中必不可少。因此近年来α
‑
DG受到大家的广泛关注。
[0005]α
‑
DG表面的正常O
‑
甘露糖基化修饰对其功能具有重要影响。若O
‑
甘露糖基化生物合成途径异常、糖链表达过低，会导致DGC结构的破坏，影响肌肉组织的功能。此外，O
‑
甘露聚糖跟多种病理过程密切相关，如O
‑
甘露糖基化翻译后修饰的缺陷会影响乳腺癌等多种类型癌症的转移；异常的O
‑
甘露糖基化修饰会破坏肌营养不良受体的功能，影响神经系统的生长、发育、修复和信号传递，导致各类先天肌营养不良症(CMDs)等。
[0006]但O
‑
甘露聚糖的结构相对复杂多样，难以从自然界中提取分离到结构明确、足够量、高纯度的O
‑
甘露聚糖，从而影响对α
‑
DG结构和功能的系统理解。目前，O
‑
甘露聚糖的合成方法，主要有化学合成和酶法合成。(1)化学合成法需要进行繁琐的保护基操作，路线较长，糖苷化反应选择性较差，产率较低。(2)酶法合成策略采用的哺乳动物酶的催化效率低、底物适应性差。
[0007]在糖肽的合成中，也存在诸多挑战。常用的汇聚式合成策略主要针对N
‑
糖链多肽的制备。而本专利技术中制备的是O
‑
糖链多肽，需要考虑糖链与多肽连接时立体构型的问题，若采用直接连接的方法进行化学反应难度较大；且由于糖链空间位阻较大，导致连接效率较低的问题。
[0008]因此，大量制备结构确定的高纯度O
‑
甘露聚糖和α
‑
DG相关O
‑
糖链多肽成为目前亟待解决的问题。

技术实现思路

[0009]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种化学法合并酶法高效制备O
‑
甘露聚糖和α
‑
DG相关的复杂O
‑
甘露糖肽的方法。
[0010]为实现上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0011]本专利技术的第一个方面，提供了一种化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法，包括：
[0012]以O
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糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基供体，通过催化糖苷化方法，合成立体构型专一的O
‑
糖氨基酸；
[0013]以所述O
‑
糖氨基酸为原料，采用固相多肽合成方法组装糖肽；
[0014]采用酶法对所述糖肽进行糖链修饰，即得。
[0015]本专利技术的第二个方面，提供了上述的方法合成的糖肽，实现结构复杂的糖肽的多样化合成。
[0016](1)运用糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基供体，通过催化糖苷化方法，合成立体构型专一的O
‑
糖氨基酸，(2)通过微波辅助的固相多肽合成方法，合成带有特定糖链修饰的α
‑
DG相关糖肽，(3)通过酶法进行糖链延伸和修饰，获得结构复杂多样化的α
‑
DG相关糖肽化合物库。
[0017]本专利技术的有益效果在于：
[0018](1)本专利技术提供了一种高效的O
‑
甘露聚糖糖氨基酸的制备方法，反应产率高、选择性好。
[0019](2)本专利技术提供了一种高效的O
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糖肽的制备方法，适用于结构复杂的O
‑
甘露糖肽的多样化制备。
[0020](3)本申请的操作方法简单、实用性强、具有普适性，易于规模化生产。
附图说明
[0021]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0022]图1.化合物4核磁谱图；
[0023]图2.化合物6核磁谱图；
[0024]图3.化合物7核磁谱图；
[0025]图4.糖肽16：HPLC图和质谱图
[0026]图5.糖肽17：HPLC图和质谱图
[0027]图6.糖肽18：HPLC图和质谱图
[0028]图7.糖肽19：HPLC图和质谱图
[0029]图8.糖肽20：HPLC图和质谱图
[0030]图9.糖肽21：HPLC图和质谱图
[0031]图10.糖肽22：HPLC图和质谱图
[0032]图11.糖肽23：HPLC图和质谱图
[0033]图12.糖肽24：HPLC图和质谱图
[0034]图13.糖肽25：HPLC图和质谱图
[0035]图14.糖肽26：HPLC图和质谱图
[0036]图15.糖肽27：HPLC图和质谱图
具体实施方式
[0037]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0038]一种化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法，其特征在于，将化学方法与酶法相结合，具体包括以下步骤：以化学方法合成立体构型专一的糖链结构的糖氨基酸，通过固相多肽合成方法组装糖肽，通过酶法进行糖链修饰，实现结构复杂的糖肽的多样化合成。
[0039本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法，其特征在于，包括：以O
‑
糖基三氯乙酰亚胺酯为糖基供体，通过催化糖苷化方法，合成立体构型专一的O
‑
糖氨基酸；以所述O
‑
糖氨基酸为原料，采用固相多肽合成方法组装糖肽；采用酶法对所述糖肽进行糖链修饰，即得。2.如权利要求1所述的化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法，其特征在于，所述O
‑
糖氨基酸为O
‑
甘露糖，core m1型O
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甘露聚糖，core m2型O
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甘露聚糖，core m3型O
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甘露聚糖。3.如权利要求1所述的化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的方法，其特征在于，氨基酸结构为丝氨酸或苏氨酸。4.如权利要求1所述的化学酶法合成α
‑
肌营养不良蛋白聚糖相关糖肽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李天路，彭鹏，杨跃，张由芹，李彤，庄昊儒，
申请(专利权)人：山东大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：