高油酸大豆突变体及其检测方法技术

本发明专利技术涉及植物生物技术领域，尤其涉及高油酸大豆突变体的检测方法。本发明专利技术所使用的分子标记技术提供了一段新的标记序列，且通过诱变为传统育种提供了一个高油酸大豆亲本的应用，不但可以缩短育种年限，节约成本，而且精确到了FAD2

High oleic acid soybean mutant and its detection method

【技术实现步骤摘要】
高油酸大豆突变体及其检测方法


[0001]本专利技术涉及植物生物
，尤其涉及高油酸大豆突变体及其检测方法。

技术介绍

[0002]大豆(Glycine max L.Merrill)起源于中国,是我国乃至世界上重要的油料和经济作物,也是人类植物油和植物性蛋白的主要来源。大豆油脂中含有人体必需的脂肪酸，具有重要的营养和保健价值。大豆油脂品质的优劣，取决于主要脂肪酸的组成及其配比，主要包括5种脂肪酸成分，即饱和脂肪酸，包括棕榈酸与硬脂酸，不饱和脂肪酸，包括油酸、亚油酸与亚麻酸。我国大豆品种中它们的平均含量分别是10％、4％、18％、55％和13％。其中具有功能性保健作用的主要是不饱和脂肪酸。摄入过多饱和脂肪酸可增加患脑血管疾病的危险。而亚油酸、亚麻酸是多不饱和脂肪酸，稳定性差，而油酸作为一种单不饱和脂肪酸，性质稳定、抗氧化作用强。在人体的脂类代谢中能降低有害胆固醇，保持有益胆固醇，从而减缓动脉粥样硬化，有效预防脑血管疾病发生的几率。因此，提高油酸的相对含量，已成为大豆品质改良育种的重要目标之一。
[0003]通过自然突变体鉴定和人工诱变比如物理诱变，化学诱变，生物诱变等方法获得了多种新的大豆突变体。科学家们通过对大豆愈伤组织进行EMS诱变获得了大豆耐盐突变体，通过60Coγ射线辐射获得了高油分的大豆突变体。科学家还利用60Co
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γ射线诱变出了具有早熟、秆强、等优良品质的大豆品种。在γ射线辐照的条件下，选育出两个高产品种。有的科学家通过生物诱变获得了高油酸大豆突变体。物理诱变在保持原有亲本特性、改良单一性状上尤为优越。辐射诱变为物理诱变的主要诱变方式。辐射处理的大豆细胞可以诱发大豆多种类型的变异，如产量、品质方面，蛋白质、脂肪的变异等。而这种突变的多数为隐性突变，一般在M1不明显，到M2代后才会表现出来。因此，研究者往往把M2作为筛选突变体的重要世代。普通筛选方法往往时间长，如组织离体诱变，离体诱变中突变体的常规鉴定，从诱变开始到可进行变异鉴定需要2～3年，并且各个阶段工作量大，需耗费大量人力物力财力。随着生物技术的发展，分子标记技术也开始被运用于大豆某些性状的筛选，但是大豆基因组庞大，许多分子机制和调控机理尚不明朗，这可能也是限制了高品质大豆培育的理论瓶颈。
[0004]大豆中存在2个FAD2基因，分别为FAD2
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1和FAD2
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2是2个非等位基因。通过自然突变体鉴定和人工诱变比如物理辐射，化学处理等方法所获得的大豆突变体类型多种多样，若能从中筛选出某些具有优良性状的品系，对大豆育种意义重大。普通筛选方法往往周期很长，并且各个阶段工作量大，需耗费大量人力物力财力。现阶段，分子标记技术也开始被运用于大豆某些性状的筛选，但是大豆基因组庞大，许多分子机制和调控位点尚未被发现。利用与油分相关QTL连锁的标记对大豆种质进行辅助选择，这种方法在一定的程度上提高了选择的速度，但是这些标记都是大豆油分基因的连锁标记，准确性一般较低。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供提高油酸含量的大豆突变体及其检测方法。具体的，提供一种与大豆油酸相关的FAD2
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1A/FAD2
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1B基因突变体TL2021及其分子鉴定方法和应用。
[0006]本专利技术提供了如下I～IV中的至少一种在提高大豆油酸含量中的应用；
[0007]I、如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基间缺失179bp的突变体；
[0008]II、如SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基间缺失194bp的突变体；
[0009]III、敲除大豆中如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基的物质；
[0010]IV、敲除大豆中如SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基的物质。
[0011]本专利技术所述大豆FAD2
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1A/FAD2
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1B双基因突变体TL2021核酸为大豆FAD2
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1A/FAD2
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1B两个基因存在大片段缺失，分别为FAD2
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1A基因序列起始密码子起第288～466位碱基间缺失179bp，缺失序列如SEQ ID No:1，该突变位于FAD2
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1A基因第2外显子上；FAD2
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1B基因序列起始密码子起第285
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479位碱基间缺失194bp，缺失序列如SEQ ID No:2，该突变位于FAD2
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1B基因第5外显子上。
[0012]本专利技术所述大豆为“天隆一号”大豆。
[0013]本专利技术所述提高大豆油酸含量包括提高大豆中油酸含量，或提高大豆中油酸在脂肪酸中的百分比。
[0014]本专利技术中，所述油酸包括丁酸、己酸、辛酸、癸酸、十一碳酸、十二碳酸、十三碳酸、十四碳酸、顺
‑9‑
十四碳一烯酸、十五碳酸、顺
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10
‑
十五碳一烯酸、十六碳酸、顺
‑9‑
十六碳一烯酸、十七碳酸、顺
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10
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十七碳一烯酸、十八碳酸、顺
‑9‑
十八碳一烯酸、反
‑9‑
十八碳一烯酸、顺，顺
‑
9,12
‑
十八碳二烯酸、反，反
‑
9,12
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十八碳二烯酸、顺，顺，顺
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6,9,12
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十八碳三烯酸、顺，顺，顺
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9,12,15
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十八碳三烯酸、二十碳酸、顺
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11
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二十碳一烯酸、顺，顺
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11,14
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二十碳二烯酸、顺，顺，顺
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8,11,14
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二十碳三烯酸、二十一碳酸、顺
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5,8,11,14
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二十碳四烯酸、顺
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11,14,17
‑
二十碳三烯酸、顺
‑
5,8,11,14,17
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二十碳五烯酸、二十二碳酸、顺
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13
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二十二碳一烯酸、顺
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13,16
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二十二碳二烯酸、二十三碳酸、二十四碳酸、顺
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4,7,10,13,16,19
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二十二碳六烯酸、顺
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15
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二十四碳一烯酸。
[0015]本专利技术还提供了一种提高大豆油酸含量的制剂，其特征在于，包括如下i～ii中的至少一种：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.如下I～IV中的至少一种在提高大豆油酸含量中的应用；I、如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基间缺失179bp的突变体；II、如SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基间缺失194bp的突变体；III、敲除大豆中如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基的物质；IV、敲除大豆中如SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基的物质。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述提高大豆油酸含量包括提高大豆中油酸含量，或提高大豆中油酸在脂肪酸中的百分比。3.提高大豆油酸含量的制剂，其特征在于，包括如下i～ii中的至少一种：i、敲除大豆中如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基的物质；ii、敲除大豆中如SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基的物质。4.一种提高大豆油酸含量的育种方法，其特征在于，包括以权利要求3所述的制剂处理大豆幼苗或种子；或包括经辐射诱变使大豆如SEQ ID NO:23所示的FAD2
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1A基因片段中第288～466位碱基间缺失和/或经辐射诱变使大豆SEQ ID NO:24所示的FAD2
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1B基因片段中第285～479位碱基间缺失。5.一种预测大豆油酸含量的制剂，其特征在于，包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：何军光，楼亿圆，苗昱婷，周骏，赵振宁，任鑫，李焰，陆建明，李静静，张凌燕，
申请(专利权)人：浙江新安化工集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：